葡萄酒中农药残留检测前处理方法研究进展

王小标，程锁明，翟银成，朱 莉

（昌吉市农产品质量安全检验检测中心（园艺工作站），新疆昌吉 831100）

葡萄酒是以鲜葡萄或葡萄汁为原料经全部或部分发酵酿制而成、含有一定酒精度的发酵酒[1]。酿酒葡萄在种植过程中，受栽培品种、土壤、气候和田间管理等因素的影响，易导致灰霉病、霜霉病、穗轴褐枯病、二星叶蝉和绿盲蝽等常见病虫害[2-3]。在酿酒葡萄的病虫害防治过程中，不可避免地导致农药在酿酒葡萄上的残留，进而伴随葡萄酒的生产酿造残留于葡萄酒中，对葡萄酒产品的品质安全构成潜在的风险隐患。本文综述了检测葡萄酒中农药残留的前处理技术，旨在为葡萄酒产品中的农残检测提供理论基础和技术参考。

1 葡萄酒中农药残留的现状

杀菌剂、杀虫剂、植物生长调节剂、除草剂、植物诱抗剂和杀螨剂等农药均可用于防治酿酒葡萄种植过程中的病虫害，已登记在中国农药信息网的就多达820种。我国现行的农药残留限量国家标准《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》 （GB 2763—2021）中，有关酿酒葡萄中农残限量种类只有216种，相对于可使用的农药种类，限量标准的制定严重滞后，更是缺乏葡萄酒中农药残留的检测方法和最大残留限量的国家标准，仅《绿色食品 葡萄酒》（NY/T 274—2014）中对多菌灵、甲霜灵、呋喃丹和氧化乐果4种农药残留作了限量规定。

国内有学者对进口和国产葡萄酒中的农药残留状况进行研究。尉冬梅等[4]对我国葡萄北方主产区采收期内829份葡萄酒样品中的13种常用杀菌剂进行了检测，13种杀菌剂的检出率达到72.52%，且所有检出样品中农药残留种类均不少于2种，检出样品中农药残留最多可达到10种。何佳[5]在河西走廊产区、进口和实验室自酿的64款葡萄酒中检测到了嘧菌酯、烯酰吗啉、氟吡甲禾灵等24种农药残留，检出频率较高的农药残留是烯酰吗啉、氟吡甲禾灵、甲霜灵，而啶酰菌胺、甲基硫菌灵等检出频率较低。麦巧冰等[6]对超市热销的130种进口葡萄酒中农药残留进行测定，发现多数进口葡萄酒产品中检出的农药残留多为1～2种，检出率较大的是杀菌剂、杀虫剂，尤其是甲霜灵、嘧霉胺和丙森锌。同时，还发现红葡萄酒中农药残留检出率比白葡萄酒高，可能与两者的生产工艺不同有关。薛洁等[7]对28个国产葡萄酒产品中40种农药残留进行检测，其中有13种农药的检出率高于5%，残留量在0.001～ 0.372 mg/L，红葡萄酒中农药平均残留量要高于白葡萄酒，分别为0.622 mg/L、0.359 mg/L，并且农药的残留率与其疏水值有关，甲霜灵的疏水值最小，残留率最高。

2 葡萄酒中农药残留的前处理方法

葡萄酒中农药残留含量较低，且葡萄酒中含有糖、酸、醇和多酚等物质，成分复杂，基质干扰大，因此前处理技术直接影响到农药残留检测的准确性。目前，葡萄酒中农药残留测定的前处理方法主要有分散液液萃取、固相微萃取、固相萃取和固相分散萃取等。

2.1 分散液液微萃取

分散液液微萃取是近年发展的一种新型绿色萃取技术，具有操作简便、富集倍数高、试剂用量少和萃取效率高等特点，广泛应用于农药残留、重金属检测、中药成分分析等领域。其原理是在萃取体系中加入能够与水、萃取剂互相溶解的分散剂，形成乳浊液体系，萃取剂在分散剂的分散下，形成了非常微小的液滴，增加了萃取剂与待测物的萃取面积，从而实现萃取剂对待测物的快速萃取[8-10]。

郭亚芸等[11]采用分散液液微萃取技术提取葡萄酒中4种三嗪类除草剂特丁津、扑草净、西玛津和莠去津的残留。结果表明，在萃取剂为20 μL十一醇，萃取10 min，分散剂为2 μL 0.25 g/LTween-20，NaCl浓度为250 g/L的条件下，葡萄酒中4种三嗪类除草剂的萃取效果佳，稳定性好，浓缩倍数可达到24.5～32.4倍，回收率在84%～102%。周建科等[12]采用分散液液微萃取法提取白葡萄酒样品中联苯菊酯、氟氯氰菊酯、氰戊菊酯和氯氰菊酯共4种拟除虫菊酯类农药残留。结果表明，二氯甲烷作萃取剂，乙醇作分散剂，葡萄酒中4种拟除虫菊酯类农药的回收率高，达到83.20%～102.71%，杂质峰干扰小。

2.2 固相微萃取

固相微萃取（Solid-Phase Microextraction，SPME）的核心是固相微萃取纤维，由用来萃取目标分析物的高分子涂层和支撑涂层的载体两部分构成。根据萃取方式的不同，固相微萃取可分为直接-固相微萃取（Direct Immersion-SPME）、顶空-固相微萃取（Head Space-SPME）、膜保护-固相微萃取（Membrane-protected-SPME）和衍生化-固相微萃取（Derivatization SPME），根据萃取装置的不同，可分为管内固相微萃取（In-tube-SPME）、纤维固相微萃取（Fiber-SPME）、针内固相微萃取（Syringeneedle-SPME）和 管 尖 微 萃 取（Pipette-Tip-SPME）等。固相微萃取具有萃取性能佳、稳定性好、选择性好、使用寿命长和易操作等优点，普遍用于食品中农药残留、风味物质、食品添加剂检测和环境监测等多个领域[13-14]。

崔宗岩等[15]优化了葡萄酒中94种农药残留固相微萃取-气相色谱-质谱联用法检测。研究发现，浸入式固相微萃取萃取的农药种类、数量显著多于顶空式固相微萃取，聚二甲基硅烷/二乙烯基苯（Polydimethylsiloxane/Divinylbenzene，PDMS/DVB）、二乙烯基苯/Carboxen/聚二甲基硅氧 烷（Divinylbenzene/Carboxen/Polydimethylsiloxane，DVB/CAR/PDMS）和PA萃取纤维的萃取效果最好，优化后的方法对甲拌磷、灭线磷等94种农药的检出限均低于10 μg/L，加标回收率可达到60%～110%，重复性标准偏差和再现性标准偏差分别低于20%和30%。郭亚芸等[16]优化了白葡萄酒中西玛津等4种三嗪类除草剂固相微萃取方法，结果表明最优萃取条件为萃取头85 μmPA，NaCl质量浓度100 g/L，50 ℃下萃取40 min，对白葡萄酒中西玛津等4种三嗪类除草剂的萃取效果良好，加标回收率可达到82%～103%，相对标准偏差在3.2%～8.8%。

2.3 固相萃取

固相萃取是食品营养分析和安全检测常用的待测样品预处理技术，原理是固相萃取材料通过范德华力、静电力、氢键等作用力选择性吸附原溶液中的目标分析物，通过淋洗、洗脱等步骤实现对目标分析物的净化、富集，具有选择性好、灵敏度高、有机试剂用量少和易于操作等优点，常用的固相萃取吸附材料主要有键合硅胶、活性炭、纳米材料、有机聚合物树脂和分子印迹吸附剂等[17-19]。

刘滨等[20]采用固相萃取技术提取测定葡萄酒中4种杀菌剂氟吡菌胺、胺啶酰菌胺、硅噻菌胺和吲哚磺菌的含量，经HR-X固相萃取小柱吸附净化、乙酸乙酯洗脱，4种杀菌剂的回收率达到77.2%～93.9%。庄丽丽[21]在LC-NH2柱上部填入无水MgSO4，并和HLB柱串联富集净化葡萄酒中敌敌畏、灭线磷、甲拌磷等16种有机磷农药，用正已烷+乙酸乙酯（1+1）洗脱目标物，在葡萄酒中添加0.01～0.10 mg/kg浓度的16种有机磷类农药时，回收率为65.3%～92.3%。

2.4 固相分散萃取

固相分散萃取是在传统固相萃取技术基础上研发的一种前处理方法，融合了样品匀浆、提取、净化等前处理流程，具有样品用量和试剂用量少、分析高效、易操作等优点，被广泛应用于食品中农兽药残留的检测，尤其QuEChERS的应用和发展较为快速[22]。

谢建军等[23]采用固相分散萃取法提取葡萄酒中甲基对硫磷、乙烯菌核利、敌敌畏等43种葡萄上常用的杀虫剂、杀菌剂和杀螨剂。葡萄酒样品通过乙腈提取、加入NaCl和无水MgSO4盐析，再用30 mg NH2粉、30 mg GCB粉、80 mg PSA粉组成的混合吸附剂净化，43种农药的加标浓度为50～200 μg/kg时，回收率可达67.43%～114.74%。郭璐瑶[24]采用乙腈作提取剂，50 mg PSA和150 mg无水MgSO4作净化剂，对葡萄酒中嘧菌酯、苯醚甲环唑、戊唑醇、吡啶嘧菌酯、噻虫嗪和噻虫胺6种农药残留进行提取净化，6种农药的回收率在77.37%～96.91%。赵振宇等[25]采用QuEChERS方法提取净化葡萄酒中97种农药残留。样品经QuEChERS前处理技术提取和净化后，97种农药残留的回收率在85.0%～115.8%。

3 结语

本文综述了葡萄酒中农药残留检测的常用前处理技术，并简述了不同前处理技术在葡萄酒中的研究进展。检测方法的标准化、前处理过程的低毒、低成本、高效、快速与高灵敏度和高分辨率的色谱质谱技术联用，才能更好地保障葡萄酒的质量安全，从而为我国葡萄酒产业的健康持续发展提供技术 支持。