臻通集胶囊对高脂血症模型大鼠的治疗作用及其机制研究*

侯红平，王彩霞，彭 博，陈腾飞，赵晓晓，宋 玲，高云航，练东银，李丽丽，张广平

（1.中国中医科学院中药研究所，北京 100700；2.河北御芝林生物科技有限公司，河北 石家庄 050000）

高脂血症为临床常见的慢性疾病，血清或血浆中的胆固醇大于5.18 mmol/L，甘油三酯大于2.26 mmol/L时，就可诊断为高脂血症[1]。血脂异常往往伴随着血压、血糖的升高，是诱发心血管疾病的危险因素。目前，大量的研究表明，高脂血症与多种慢性疾病的发生和进展密切相关，如骨质疏松症[2]、慢性肾病[3]等。为此，积极地预防和治疗高脂血症有着非常重要的临床价值和社会意义。

臻通集胶囊由河北御芝林药业有限公司生产，主要成分包括三七粉、黄芪提取物、丹参提取物、银杏叶提取物、葛根提取物、余甘子提取物、玉竹提取物，可以辅助降血脂、增强免疫力。本研究通过建立高脂血症大鼠模型，探讨臻通集胶囊对该模型大鼠的治疗作用及其机制，以期为臻通集胶囊在高脂血症的治疗方面提供科学依据和参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物 4～5周龄SPF级SD大鼠100只，雌雄各半，体质量70～90 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物生产许可证号：SCXK（京）2016-0011，大鼠饲养于中国中医科学院中药研究所SPF级屏障环境动物房。饲养条件：环境要求温度为18～29 ℃，日温差≤3 ℃，相对湿度40%～70%，12 h明/12 h暗。所有动物实验操作均符合中国中医科学院中药研究所伦理委员会的规定，伦理批准号：2021B135。

1.2 药物与试剂 臻通集胶囊（批号：202102010702）由河北御芝林药业有限公司提供；阿托伐他汀钙片（批号：EY1805）购自辉瑞制药有限公司；甘油三酯（triglyceride，TG）试剂盒（批号：01130C11）、胆固醇（cholesterol，CHO）试剂盒（批号：01126D11）、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein，HDL）试剂盒（批号：10222A11）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）试剂盒（批号：10223A11）、胆汁酸（total bile acid，TBA）试剂盒（批号：10124E11）均购自北京安图生物工程有限公司；载脂蛋白B100（apolipoprotein B100，Apo-B100）ELISA试剂盒（批号：N16036068）、载脂蛋白A1（apolipoprotein A1，Apo-A1）ELISA试剂盒（批号：N15036067）均购自华美生物工程有限公司；丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量检测试剂盒（批号：20211117）购自北京索莱宝科技有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）试剂盒（批号：20220106）、总抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）检测试剂盒（批号：20210813）、乙酰辅酶A乙酰基转移酶（acyl coenzyme A: cholesterol acyltransferases，ACAT）ELISA试剂盒（批号：20220112）、3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A（3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme areductase，HMG-COA）ELISA试剂盒（批号：20220112）均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 主要仪器 3-18KS型高速冷冻离心机（德国Sigma公司）；TBA-120FR型全自动生化分析仪（日本佳能集团）；BSA3202S-CW型电子天平（德国Sartorius公司）。

1.4 造模与分组 随机取12只大鼠作为空白组，其余88只大鼠均为高脂血症模型。空白组给予大鼠生长维持饲料，高脂血症组大鼠给予专门的高脂饲料（混合型高脂血症饲料配方：基础饲料+15%猪油+20%蔗糖+1.2%胆固醇+0.2%胆酸钠[4]）喂养。连续4周后，剪尾采血，3 000 r/min离心15 min，分离血清，全自动生化分析仪测定各组大鼠血清中TG、CHO，高脂血症组大鼠TG和CHO明显高于空白组（P＜0.05），视为造模成功。86只大鼠造模成功，造模成功率为97.7%（86/88）。造模结束后，取72只大鼠根据CHO测定值随机分为模型组、西药组、中西药联合组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组，每组12只，雌雄各半。

1.5 实验给药 空白组大鼠正常喂食、饮水，其余各组大鼠正常饮水，给予专门的高脂饲料的同时灌胃给予药物。阿托伐他汀钙片的临床开始用量为10 mg，1次/d，成人以70 kg为标准体质量计算，大鼠的等效剂量为0.900 mg/kg，故西药组大鼠灌胃给予阿托伐他汀钙片溶液，0.900 mg/kg；臻通集胶囊（0.4g/粒）临床用量为3粒/次，2次/d，大鼠的等效剂量为0.216g/kg。故中药高、中、低剂量组大鼠分别灌胃给予臻通集胶囊溶液，0.432、0.216、0.108 g/kg；中西药联合组大鼠灌胃给予阿托伐他汀钙片溶液（0.900 mg/kg）和臻通集胶囊溶液（0.216 g/kg），给药体积10 mL/kg，空白组和模型组大鼠灌胃给予等体积生理盐水，1次/d，连续给药8周。实验期间每周称一次大鼠的体质量，根据动物体质量调整给药量。

1.6 观察指标

1.6.1 大鼠一般情况观察 实验期间，每天给药前和给药后观察大鼠的基本状态，包括饮食情况、粪便、外观及被毛、活动状况等。

1.6.2 实验取材 末次给药后，大鼠禁食16 h，麻醉后腹主动脉采血，3 000 r/min离心15 min，取血清，进行后续指标的检测。取肝脏，称重后，部分肝脏冻存，进行后续指标的检测；部分肝脏置于4%多聚甲醛中，进行HE病理染色观察。

1.6.3 肝脏系数 根据肝脏质量和动物体质量，计算动物的肝脏系数。计算公式：肝脏系数（g/100 g）=肝脏质量/动物体质量×100。

1.6.4 血清血脂水平检测 采用TBA-120FR型全自动生化分析仪检测血清中的TG、CHO、HDL、LDL和TBA的含量，同时计算HDL/LDL（H/L）的比值。

1.6.5 血清中载脂蛋白的表达 严格按照ELISA试剂盒说明书检测血清中Apo-B100和Apo-A1的含量。

1.6.6 血清中氧化应激指标的表达 严格按照ELISA试剂盒说明书检测血清中MDA的含量，以及SOD和T-AOC的活性。

1.6.7 肝脏组织中胆固醇合成相关指标的表达 肝脏组织匀浆后，严格按照ELISA试剂盒说明书检测肝脏组织中的ACAT和HMG-COA的活性。

1.6.8 各组大鼠肝脏组织病理学检测 固定后的肝脏组织，经包埋、切片、脱蜡后进行苏木素-伊红染色，染色时间约5 min，封片后，通过显微镜观察，采集图像进行分析。

1.7 统计学方法 采用SPSS 25.0软件进行统计分析，计量资料以“均数±标准差”表示，多组比较采用单因素方差分析，方差齐时，两两比较方法使用最小显著性差异法（LSD）进行检验，方差不齐时，选用Tamhane's T2法进行检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠一般情况 空白组大鼠自主活动、精神状态良好，反应敏捷，饮水、摄食及二便正常，毛色有光泽。模型组大鼠被毛暗淡无光泽，偶有干枯并伴有脱毛现象，行动迟缓，起初体质量增加明显，但造模2周后，大鼠出现饮食减少，体质量持续波动的情况，分析认为与大鼠出现厌食情况有关，上述情况持续2～3周后有所缓解，体质量持续均匀增加，排便量有所下降。西药组、中西药联合组、中药中剂量组、中药高剂量组大鼠较模型组精神状态有所好转，活动量增大，体质量增加较为缓慢。中药低剂量组大鼠精神状态与模型组无明显的区别，体质量增加明显。

2.2 各组大鼠体质量及肝脏系数比较 与空白组比较，模型组大鼠体质量及肝脏系数均明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，西药组、中西药联合组和中药高剂量组大鼠体质量及肝脏系数均明显降低（P＜0.05）；中药中剂量组大鼠肝脏系数明显低于模型组（P＜0.01），而体质量与模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；中药低剂量组大鼠体质量及肝脏系数与模型组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（见表1）

表1 各组大鼠体质量及肝脏系数比较 （±s）

表1 各组大鼠体质量及肝脏系数比较 （±s）

注：与空白组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05，cP＜0.01

给药剂量臻通集胶囊（g/kg）阿托伐他汀钙片(mg/kg)空白组12--419.0±124.0 2.454±0.281模型组12--621.7±176.1a 3.593±0.397a西药组12-0.900464.1±153.1b 2.655±0.245c中西药联合组 120.2160.900455.8±126.1b 2.550±0.257c中药高剂量组 120.432-483.4±143.9b 2.782±0.305c中药中剂量组 120.216-495.7±152.2 3.203±0.248c中药低剂量组 120.108-499.8±145.2 3.459±0.418 F 6.4539.234 P 0.0000.000组别动物数（只）体质量（g） 肝脏系数（g/100 g）

2.3 各组大鼠血清中血脂相关指标比较 与空白组比较，模型组大鼠CHO、TG、LDL、HDL含量均明显升高（P＜0.01或P＜0.05），H/L明显降低（P＜0.05）；与模型组比较，西药组、中西药联合组、中药高剂量组、中药中剂量组大鼠CHO、TG、LDL含量均明显降低（P＜0.01或P＜0.05），H/L明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，中西药联合组、中药高剂量组大鼠HDL含量均明显降低（P＜0.01或P＜0.05）；中药低剂量组大鼠CHO、TG、LDL、HDL含量及H/L与模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠间TBA含量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（见表2）

表2 各组大鼠血清中血脂相关指标比较 （±s）

表2 各组大鼠血清中血脂相关指标比较 （±s）

注：与空白组比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与模型组比较，cP＜0.05，dP＜0.01

给药剂量臻通集胶囊（g/kg） 阿托伐他汀钙片（mg/kg）空白组12--0.49±0.132.02±0.500.90±0.200.43±0.1422.76±5.804.71±1.25模型组12--1.35±0.35b5.46±0.98b2.07±0.66a1.55±0.51b 43.84±35.83 0.49±0.14a西药组12-0.9000.58±0.11d2.92±0.49d1.69±0.500.85±0.28d 24.92±13.64 1.33±0.40d中西药联合组 120.2160.9000.65±0.18d2.66±0.88d0.89±0.26c0.92±0.30d 20.28±9.731.41±0.45d中药高剂量组 120.432-0.67±0.22d3.49±0.87d0.92±0.30c0.98±0.28c 24.47±9.801.80±0.41d中药中剂量组 120.216-0.77±0.20c3.86±1.04c1.38±0.361.01±0.31c 31.89±17.21 1.18±0.37d中药低剂量组 120.108-0.99±0.215.13±1.371.44±0.331.23±0.3333.45±11.63 0.93±0.22 F 6.6707.1955.8324.1942.61713.451 P 0.0000.0000.0000.0000.6230.000组别动物数（只）TG（mmol/L） CHO（mmol/L）HDL（mmol/L）LDL（mmol/L）TBA(μmol/L)H/L

2.4 各组大鼠血清中Apo-A1和Apo-B100含量比较 与空白组比较，模型组大鼠血清中Apo-A1、Apo-B100含量均明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，中西药联合组、中药高剂量大鼠血清中Apo-A1、Apo-B100含量均明显降低（P＜0.01或P＜0.05），西药组和中药中剂量组大鼠血清中Apo-B100含量均明显降低（P＜0.01）；中药低剂量组大鼠血清中Apo-A1、Apo-B100含量与模型组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（见表3）

表3 各组大鼠血清中Apo-A1 和Apo-B100 含量比较（±s）

表3 各组大鼠血清中Apo-A1 和Apo-B100 含量比较（±s）

注：与空白组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05，cP＜0.01

给药剂量臻通集胶囊（g/kg）阿托伐他汀钙片（mg/kg）空白组12--747.96±157.172.29±0.48模型组12--4 051.58±1 198.85a 9.79±2.95a西药组12-0.9002 205.41±669.672.43±0.52c中西药联合组 120.2160.9001 008.20±237.52b 2.76±0.54c中药高剂量组 120.432-823.85±122.14c 2.15±0.56c中药中剂量组 120.216-1 885.56±520.405.96±1.50c中药低剂量组 120.108-3 320.06±899.78 11.72±3.28 F 8.69613.265 P 0.0000.000组别动物数（只）Apo-A1（ng/mL）Apo-B100（μg/mL）

2.5 各组大鼠血清中氧化应激指标比较 与空白组比较，模型组大鼠血清中MDA含量明显升高（P＜0.01），而SOD、T-AOC活性均明显降低（P＜0.01）。与模型组比较，中西药联合组、中药中剂量组和中药高剂量组大鼠血清中MDA含量均明显降低（P＜0.01），而SOD、T-AOC活性均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）；西药组和中药低剂量组大鼠血清中MDA含量及SOD、T-AOC活性与模型组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（见表4）

表4 各组大鼠血清中氧化应激指标比较（±s）

表4 各组大鼠血清中氧化应激指标比较（±s）

注：与空白组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05，cP＜0.01

组别动物数（只）MDA（nmol/mL） SOD（U/mL） T-AOC（mmol/L）给药剂量臻通集胶囊（g/kg）阿托伐他汀钙片（mg/kg）空白组12--24.48±8.15 308.91±92.071 170.44±13.39模型组12--155.93±50.58a 112.981±29.80a 39.20±12.87a西药组12-0.900130.97±43.99 132.35±28.2034.67±11.34中西药联合组 120.2160.90031.25±9.92c 277.18±90.05c 102.96±17.54c中药高剂量组 120.432-32.13±10.04c 237.84±13.02c 101.68±33.56c中药中剂量组 120.216-54.74±18.07c 193.64±60.79b70.33±20.52b中药低剂量组 120.108-84.99±28.05 164.86±12.2848.45±15.81 F 24.47514.77266.429 P 0.0000.0000.000

2.6 各组大鼠肝脏组织中胆固醇合成相关指标比较 与空白组比较，模型组大鼠肝脏组织中HMG-COA、ACAT含量均明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，中西药联合组、中药高剂量组大鼠肝脏组织中HMG-COA、ACAT含量均明显降低（P＜0.05或者P＜0.01）；西药组大鼠肝脏组织中HMG-COA含量明显低于模型组（P＜0.01）；中药中剂量组大鼠肝脏组织中ACAT含量明显降低（P＜0.01）；中药低剂量组大鼠肝脏组织中HMG-COA、ACAT含量与模型组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（见表5）

表5 各组大鼠肝脏组织中胆固醇合成相关指标比较（±s）

表5 各组大鼠肝脏组织中胆固醇合成相关指标比较（±s）

注：与空白组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.05，cP＜0.01

组别 动物数（只）HMG-COA（ng/mg）ACAT（ng/mg）给药剂量臻通集胶囊（g/kg）阿托伐他汀钙片（mg/kg）空白组12--模型组12--西药组12-0.900中西药联合组 120.2160.900中药高剂量组 120.432-中药中剂量组 120.216-中药低剂量组 120.108-F 308.22±100.48 1 093.83±276.67a 505.32±118.29c 500.28±100.20c 763.66±186.94b 811.60±242.92 934.03±205.37 453.91±177.59 1 200.90±249.55a 1 366.96±340.27 430.51±181.77c 646.20±238.64c 630.21±200.99c 1 108.75±284.84 24.83327.710 P 0.0000.000

2.7 各组大鼠肝脏组织病理学变化情况 空白组大鼠肝脏组织结构正常，细胞质丰富，肝窦清晰可见；模型组大鼠肝脏组织出现脂肪变性，肝细胞胞浆出现脂滴，肝窦受压，同时出现不同程度的炎症细胞浸润；西药组大鼠肝脏组织排列整齐，大小形态正常；中西药联合组大鼠肝脏组织空泡明显减少，肿胀得到缓解；中药中、高剂量组大鼠肝细胞的损伤有所减轻，脂滴有所减少；与模型组比较，中药低剂量组大鼠肝细胞和组织的改善不明显，细胞肿大，明显空泡化。（见图1）

图1 各组大鼠肝脏组织病理切片图（HE，×200）

3 讨论

目前，临床上降脂的一线药物多为化学药物，一般分为三大类，即他汀类药物、胆固醇吸收抑制剂类药物和贝特类药物。其中，他汀类药物主要是通过抑制细胞内胆固醇的合成来降低血脂，主要包括阿托伐他汀、瑞舒伐他汀和辛伐他汀等[5-6]。胆固醇吸收抑制剂类药物主要是通过抑制血脂在肠道的吸收来降低血脂，主要为依折麦布[7-9]。贝特类药物主要作用于甘油三酯的代谢，代表药为氯贝丁酯[10]。上述药物的作用靶点较为明确，疗效显著，但是长期应用对肝脏和肾脏有一定的损伤，从而限制临床的长期应用[11]。中医药由于其多成分、多靶点、多效应的作用特点和优势，在血脂代谢异常方面的调控作用越来越突出。

在本研究中，SD大鼠在给予混合型高脂血症饲料喂养4周后，TG和CHO均出现不同程度升高，证明造模成功。经灌胃给药8周后，阿托伐他汀钙片能在一定程度上降低血清TG、CHO、LDL的表达，臻通集胶囊联合阿托伐他汀钙片能在一定程度上降低血清TG、CHO、LDL、HDL的表达，高、中剂量臻通集胶囊能在一定程度上降低血清TG、CHO、LDL、HDL的表达，提高H/L比值。在载脂蛋白方面，阿托伐他汀钙片仅能降低Apo-B100的表达，臻通集胶囊联合阿托伐他汀钙片、高剂量臻通集胶囊均能一定程度降低Apo-A1和Apo-B100的表达。而在抗氧化应激方面，臻通集胶囊表现出了一定的优势。阿托伐他汀钙片对HMG-COA的活性具有抑制作用，而对胆固醇脂化酶ACAT的活性无影响，这与他汀类药物主要通过抑制细胞内胆固醇合成来降低血脂相一致。而臻通集胶囊对ACAT和HMG-COA的表达均有一定的抑制作用。

臻通集胶囊的降脂作用与其成分的作用特点密不可分。研究表明，丹参总酚酸具有降血脂和抗氧化的作用[12]。葛根多糖、葛根素、葛根总黄酮均有降低血脂的作用，与其能够降低血清炎症因子水平、抑制MAPK信号通路激活、改善血凝系统、降低血黏度、提高抗氧化能力等密切相关[13-15]。黄芪甲苷作为黄芪的主要药效成分，具有降脂、改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤的作用[16]。同时，黄芪多糖可降低高脂血症大鼠的血脂，减少肝脏脂质沉积，提高肝脏和血液的抗氧化能力，减轻高脂饮食导致的氧化损伤[17]。银杏叶提取物具有降低血脂的作用，与其抑制脂质过氧化[18]、促进肠道有益菌生长繁殖[19]、调整脂蛋白-胆固醇代谢、纠正自由基代谢紊乱、增强抗氧化酶活性等作用密切相关[20]。现代药理研究结果表明，余甘子有多种药理作用，如抗氧化、降血脂、降血糖、降血压等[21]。玉竹多糖具有较好的调节糖脂作用，并可抑制小鼠肥胖的形成[22]。

综上，臻通集胶囊能够降低高脂血症大鼠的血脂水平，与其抗氧化、抑制胆固醇合成等作用密切相关。