区域性结核病实验室结核杆菌检测方法比较研究

郝珊珊 侯彦强

上海市松江区中心医院检验科，上海 201600

通信作者：侯彦强，Email：houyanqiang@aliyun.com

区域医学检验中心是指在一定区域内建立的为区域内各级医疗机构提供临床检验服务的医学检验实验室，其建立实现了检验资源共享、检验服务标准化、检验结果互认等［1-15］。上海市松江区区域医学检验中心于2011 年成立，中心以松江区中心医院检验科为主体，联合5 家二级医院、16家社区卫生服务中心组建而成［16-17］。松江区中心医院是上海市25 家区域性医疗中心之一，承担辖区内各医疗机构三大常规以外以及无技术条件开展的项目。2019年松江区中心医院成立了上海区域性结核病实验室，接受来自松江、金山、闵行、嘉定和青浦区结核杆菌检验任务。鉴于区域性结核病实验室接受样本涉及区域之广、数量之大，我们必须对自己提出更高的要求，及时、准确、高效地为辖区内各级医疗机构出具高质量的检验报告。基于此，本文将依托区域性结核病实验室2018年至2021年结核杆菌检测数据，比较分析结核杆菌3 种检测方法，以便为各级医疗机构临床医生选择合适的检测方法提供数据支持。

由结核杆菌感染引起的慢性传染病——结核病，是一种非常古老且迄今为止仍然严重威胁人类健康的疾病。2016 年世界卫生组织估计，世界人口的25%（超过17 亿人）将感染结核杆菌［2-3］。人类感染结核杆菌会产生一种称为结核的活动性疾病或一种称为潜伏性结核感染的无症状疾病。潜伏性结核感染在感染后前2 年内发展为结核病的风险为5%～15%。随后，可能会在感染者免疫力低下的时候或由于年龄增长在将来的某个时候患上结核病［4-6］。结核病是人类传染病死亡的主要原因，病死率高于艾滋病和疟疾［2］。这很大程度上是由于结核病诊断上存在困难，也与基层医疗机构检验设施、检验技术人员、传染病宣教等方面普遍处于较低水平有关。诊断延迟是结核病控制中的一个主要问题：从患者向医疗系统就诊的第1 天到确诊，延迟了1～3个月［7-8］。2017年，新病例通知与估计的事件病例数之间差距为360 万例，这表明结核病病例严重漏报和诊断不足［9］。因此，亟需寻找一种检测结核杆菌灵敏度高、特异度高、简便、快速、平价等优点的检测方法，为医疗资源落后、检验人员知识和技能不足的基层医疗机构提供可补救的途径，使就诊的患者在尽可能短的时间内得到确诊和治疗。本文研究了区域性结核病实验室结核杆菌3 种检测方法［抗酸染色法、液体培养法以及实时荧光聚合酶链反应（polymerize chain reaction，PCR）法］结核杆菌检出率、结果符合率、检测周期及费用，现将结果报道如下。

材料与方法

1、一般资料

选取区域性结核病实验室2018年5月至2021年8月初诊患者1 169 例，观察组中男830 例，女339 例，年龄10～89岁。

2、病例入选、排除标准

纳入标准：所选人员均为初诊患者，样本均为黏液样或干酪样晨痰。排除标准：未使用3种方法进行检测的样本。

3、方法

3.1、抗酸杆菌染色 ⑴挑取适量痰标本，以涂抹大小为1 cm×2 cm 厚薄均匀的痰膜，自然晾干。⑵自动染片机（上海皓信生物，Mycob.T STAINER）进行染色。⑶镜检结果。

3.2、液体培养法 ⑴标本前处理：样本与样本稀释液（珠海贝索生物技术有限公司）按体积1∶1 混合振荡，静置15 min；取5.0 ml 混合液加入含35.0 ml PBS 的离心管中，混匀，3 000×g离心15 min后弃上清；将沉淀物用2.0 ml PBS混匀，取0.5 ml 的菌液加入含分枝杆菌培养添加剂（上海碧迪公司）的分枝杆菌培养管（上海碧迪公司）内。⑵上机（上海碧迪医疗器械有限公司，BD BACTECTM MGITTM 960）培养。⑶判读结果。

3.3、实时荧光PCR 法 ⑴样本与样本稀释液按体积1∶1 混合振荡，取消化完全的痰液2.0～3.0 ml 加入GeneXpert 分子检测试剂盒中上机（Cepheid 公司，GeneXpert）检测。⑵读取结果。

4、统计学处理

所有数据采用SPSS 19.0 统计软件分析，计数资料以例（%）表示，采用χ2检验；P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1、3种检验方法结核杆菌的检出率比较

抗酸染色法、液体培养法、实时荧光PCR法结核杆菌检出率分别为16.6%（194∕1 169）、28.1%（329∕1 169）、26.1%（305∕1 169）。抗酸染色法与液体培养法结核杆菌检出率结果差异有统计学意义（χ2=44.888，P＜0.001），抗酸染色法与实时荧光PCR 法结核杆菌检出率结果差异有统计学意义（χ2=31.391，P＜0.001），而液体培养法和实时荧光PCR 法结核杆菌检出率结果差异无统计学意义（χ2=1.247，P＞0.05）。由此可见，抗酸染色法阳性率最低，这可能与其自身局限性有关，导致排菌量少的患者容易漏诊。液体培养法结核杆菌检出率最高，这可能与选择性培养基有利于结核杆菌生长有关。

2、3种检验方法的结果符合率比较

在抗酸染色法镜检阳性194 例晨痰标本中液体培养法阳性187 例，结果符合率96.4%。在抗酸染色法镜检阴性975 例标本中液体培养法阳性142 例，说明液体培养法检测晨痰中结核杆菌比抗酸染色法灵敏。在抗酸染色法和液体培养法阳性187例标本中实时荧光PCR法阳性180例，结果符合率96.3%。120 例抗酸染色法阴性实时荧光PCR 法阳性、27 例液体培养法阴性实时荧光PCR 法阳性。综上所述，实时荧光PCR法比抗酸染色法、液体培养法具有更高的特异度和灵敏度，但3种检验方法的结果符合率较高。

3、3种检验方法的检测周期及费用比较

抗酸染色法、液体培养法以及实时荧光PCR 法检测周期 分 别 为30 min、6 周、2 h，费 用 分 别 为15 元、100 元、800 元。抗酸染色法检测周期短，费用低；由于结核杆菌生长缓慢，液体培养法需要数周时间，但对于排菌量少的感染者较灵敏；实时荧光PCR 法检测周期相对较短，但费用昂贵，由于区域医学检验中心的建立，此检测方法在上海市松江区中心医院是免费项目。

讨 论

随着国家医疗改革的不断深入和各项利好政策的出台，区域医学检验中心已进入快速发展的阶段。区域医学检验中心的建立可以共享先进医疗资源，弥补基层医疗机构检验设备落后、检验项目少、检验技术人员缺乏等不足。松江区域医学检验中心之所以能顺利运营，依赖于人员和质量的精益化管理、实验室设计与安全、自动化与信息化建设、物流系统建设等，尤其是区域物流系统建立的“人员不动-标本动”模式，改善了人们看病难的现状，这一模式在新型冠状病毒疫情期间也发挥了重要作用。虽然松江区域医学检验中心历经10 年左右的发展，但在运行过程中仍然存在一些小问题，如不合格样本的处理；双方的信息系统对接不佳，系统中内容不完善；专业术语不规范；个别医疗机构信息系统数据维护不全，检验项目少；对少见、罕见检验项目医生开单少且不主动维护；部分医疗机构检验人员能力及责任心有待进一步提高等。由此可见，区域医学检验中心未来还有很大的发展空间。

结核病是一种可通过空气传播的高度传染性疾病，可累及患者肺部或其他组织器官，导致感染者患肺结核或肺外结核。近几年，青春期感染结核杆菌越来越受到重视［10］。与4 岁以下的幼儿相比，年轻人通常更容易罹患肺结核，这部分人群通常在家庭之外有更广泛的社会接触［11］，因此，也会助长疾病的传播。历史数据表明，青少年和青年期感染结核杆菌的风险最高，与儿童或老年人相比，12～24岁之间的人群感染后发展为结核病的风险增加［12-13］。世界卫生组织计划在2015年至2035年将结核病死亡人数减少95%，新发病例减少90%［14］。但是，耐药结核病和共患其他慢性疾病结核病对实现这一目标构成了重大挑战。因此，早期、快速和准确地鉴定结核杆菌感染对于结核病的管理和治疗至关重要。

区域医学检验中心的建立大大提高了医院的检验质量，尤其是对结核杆菌的检验。通过分析比较区域性结核病实验室3 种检测方法发现：抗酸染色镜检法虽然具有简便、经济、快速等优点，但该方法容易使排菌量少的患者漏诊，导致检出率较低；液体培养法检出率高，但由于结核杆菌生长缓慢，使潜在不适当抗结核治疗延长、增加治疗时间和相关费用，增加了传染率和病死率。由于以上检验方法缺点的存在，需要新的诊断方法及时、准确、灵敏地鉴别结核杆菌。分子方法提供了一种快速、准确、特异性高的方法——实时荧光PCR 法，但该方法价格昂贵。虽然3 种检验方法各有优缺点，但它们的结果符合率较高。结核病确诊不仅仅依靠上述3 种检验方法，还需要结合影像学检查（例如胸片、肺部CT 等）、临床症状等。本文旨在分析比较区域性结核病实验室常用结核杆菌检验方法的优缺点，以便为各级医疗机构的临床医生及检验人员选择合适的检测方法提供科学依据，所以未涉及其他内容的研究。

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