响应面法优化地参三萜酸提取工艺及抗氧化活性分析

李金金，孟琦，崔馨燕，石汝杰，吴应梅，杨玲，周浓

（重庆三峡学院生物与食品工程学院/三峡库区道地药材绿色种植与深加工重庆市工程实验室，重庆 404120）

0 引言

【研究意义】地参（Lycopus lucidusTurcz.）为泽兰地下部分，称为泽兰根，又名地笋、虫草参，主要分布在云南、四川及山东等地，喜潮湿的中高海拔地区（国家药典委员会，2020）。地参味道鲜美且可入药，既是原生态的绿色保健食品，又是良好的药食同源资源。因地参营养丰富，含有三萜酸、黄酮、多酚等多种生物活性成分，受到大众喜爱（许泳吉等，2003；黄小兰等，2021）。相关研究表明，地参具有一定的抗氧化能力（Lee et al.，2006），萜类物质在其他中药材中有广泛研究，且具有较高抗氧化活性（卢静等，2009；江洪波和董小萍，2015；黄勤英等，2019），但地参中三萜酸对清除自由基的研究未见详细报道。由于自由基无处不在（王洪滨和刘伟，2009），过量自由基会破坏机体系统平衡，影响人体健康，不仅会加速衰老，还会引起人体组织损伤，因此寻找天然抗氧化物质清除自由基意义重大。目前，对地参中三萜酸成分提取及抗氧化活性研究较少，通过对其提取工艺进行优化研究，有利于地参中萜类的开发和利用，对开发保健类食品有一定的参考意义。【前人研究进展】由于地参属于良好的药食同源植物资源，学者们对其研究较多。王文净和高春燕（2016）采用水提醇沉法对地参多糖进行提取，测得地参多糖抗氧化活性较强，且随采收期而变化；李月等（2018，2019）采用冷凝回流方法提取地参总多酚和总黄酮，测得其总多酚和总黄酮清除2,2-联苯基-1-苦基肼基自由基（DPPH·）的半抑制浓度（IC50）分别为114μg/mL和46 mg/L，表明地参是良好的天然抗氧化剂，值得下一步开发和利用。成分的分离鉴定是地参开发功能性食品的前提。Ren等（2017）建立超高效液相色谱与飞行时间质谱联用（UHPLC-Q-TOF-MS）法，在负离子模式下鉴定出地参三萜酸成分包括齐墩果酸、熊果酸和白桦脂酸3种化合物；黄小兰等（2020）建立高效液相色谱法，测得地参中白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸3种萜类成分，三萜酸提取总量达2.748 mg/g。关于地参三萜酸的抗氧化能力研究甚少，但其他物种资源的三萜酸相关研究较多。黄勤英等（2019）对苦丁茶齐墩果酸优化提取，并分析其抗氧化活性，结果表明，苦丁茶齐墩果酸对DPPH·和2,2-联氮-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐自由基（ABTS+）清除率均在90%以上，但效果不如抗坏血酸（Vc）；陈毓龙等（2020）研究表明，地榆根、茎、叶不同部位三萜酸含量略有差别，对DPPH·的清除能力大小为：茎＞根＞叶＞Vc；付亚玲等（2021）对比黑化红枣中粗提物与纯化物三萜酸清除DPPH·和ABTS+的IC50，通过抗氧化试验可得黑化红枣纯化后抗氧化活性强于粗提物；徐树来等（2022）研究表明，超高压辅助提取法的灵芝三萜抗氧化性优于有机溶剂浸提法，灵芝三萜浓度与抗氧化活性具有相关性。【本研究切入点】三萜酸是天然活性成分（Szakiel et al.，2012；罗小芳等，2018；朱登辉等，2021），目前对地参三萜酸成分分离鉴定已有研究，但鲜见针对其提取工艺优化及抗氧化能力分析的文献报道。【拟解决的关键问题】提取地参萜类成分，对白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸3种主要萜类成分的总含量测定进行响应面参数优化，并分析其抗氧化活性，为地参生物活性成分的进一步研究及功能性产品开发提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

地参产自重庆市万州区（人工栽培），经重庆三峡学院生物与食品工程学院周浓教授鉴定为地参，在自然条件下烘干备用。白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸对照品购自成都德思特生物技术有限公司，批号分别为DST180505-026、DST171026-051和DST 180606-019，HPLC≥98%；甲醇（AR）、无水乙醇（AR）和甲酸（AR）购自重庆川东化工集团有限公司；DPPH（含量≥98%）和ABTS（BR，99%）购自西亚化学科技（山东）有限公司；七水合硫酸亚铁（AR）购自四川西陇化工有限公司；水杨酸（AR）购自成都新都区木兰镇工业开发区；30%过氧化氢（AR）购自成都市科龙化工试剂厂；过硫酸钾（AR）购自优耐德引发剂（上海）有限公司。

主要仪器设备：A2004型电子天平（上海津平科学仪器有限公司）、精密天平（梅特勒—托利多集团）、HSY-26型数显恒温水浴锅（上海跃进医疗器械有限公司）、LC-20AT高效液相色谱仪（日本shimadzu株式会社）、BUCHI R-300旋转蒸发仪（北京海富达科技有限公司）和V-1100D型可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 样品溶液制备地参粉碎后过100目筛，称取地参1.000±0.002 g置于锥形瓶中，平行3次，醇提法提取，过滤，浓缩，以甲醇溶液定容至5 mL，摇匀，过0.22μm微孔滤膜后，高效液相色谱仪检测，计算白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸含量。

1.2.2 标准品制备分别精密称取减压干燥至恒重的白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸对照品适量，加甲醇溶解并制成质量浓度分别为1.082、0.878和1.016 g/mL的对照品贮备液。取3种对照品溶液各1 mL，用甲醇定容至5 mL，逐级稀释；再分别精密吸取对照品贮备液0.001、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035和0.040 mL，加甲醇稀释至1 mL，定容摇匀后用0.22μm微孔滤膜过滤。

1.2.3 色谱条件色谱柱为Diamonsil C18（5μm，4.6 mm×250 mm）；检测波长210 nm；流动相为甲醇—0.03%甲酸水溶液（pH 2.50）（89∶11，v/v）；柱温30℃；体积流量0.8 mL/min；进样量20μL。

1.2.4 方法学考察

1.2.4.1 精密度试验取1.2.2混合对照品溶液，按照1.2.3色谱条件连续进样6次，计算白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸峰面积的相对标准偏差（Relative standard deviation，RSD）。

1.2.4.2 重复性试验精密称取地参粉末1.0 g，依据1.2.1方法制得地参三萜酸待测液，平行制备6份，按照1.2.3色谱条件进样测定，计算白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸峰面积的RSD。

1.2.4.3 稳定性试验精密称取地参粉末1.0 g，依据1.2.1方法制得地参三萜酸待测液，按照1.2.3色谱条件对同一样品分别在0、3、9、15、21和24 h进样测定，计算白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸峰面积的RSD。

1.2.4.4 加样回收率试验分别精密称取6份已知含量的地参粉末0.5 g，加入白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸对照品适量，依据1.2.1方法制得地参三萜酸化合物待测液，按照1.2.3色谱条件进样测定，分别计算白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸的加标回收率和RSD。

1.2.5 单因素试验

1.2.5.1 乙醇体积分数的选择固定提取时间1.5 h、料液比1∶30（g/mL，下同）、提取温度70℃，考察乙醇不同体积分数（60%、70%、80%、90%和100%）对地参三萜酸提取量的影响。

1.2.5.2 提取时间的选择固定乙醇体积分数90%、料液比1∶30、提取温度70℃，考察不同提取时间（1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 h）对地参三萜酸提取量的影响。

1.2.5.3 料液比的选择固定乙醇体积分数90%、提取时间2.0 h、提取温度70℃，考察不同料液比（1∶20、1∶30、1∶40、1∶50和1∶60）对地参三萜酸提取量的影响。

1.2.5.4 提取温度的选择固定乙醇体积分数90%、料液比1∶40、提取时间2.0 h，考察不同提取温度（35、45、55、65和75℃）对地参三萜酸提取量的影响。

1.2.6 响应面设计根据单因素试验结果，进一步设计响应面优化试验。选取对三萜酸提取效果最佳的因素水平，以提取时间、乙醇体积分数、料液比和提取温度为自变量，三萜酸提取量为响应值，采取4因素3水平设计Box-Behnken Design试验，响应面因素与水平见表1。

表1 响应面试验因素与水平Table 1 Response surface experimental factors and level

1.2.7 抗氧化试验

1.2.7.1 DPPH·清除率测定DPPH溶液配制：参考梁磊等（2017）的方法，略有改动。称取0.0196 g DPPH粉末置于容量瓶中，加入无水乙醇并稀释定容至250 mL，即配制成0.2 mmol/L DPPH溶液，避光30 min后摇匀备用。

测定方法：移取地参三萜酸提取液，将样品溶液配制成质量浓度为0.15～0.35 mg/mL 5个不同浓度梯度的样品液。移取已配制的0.2 mmol/L DPPH溶液，充分混匀后，避光反应30 min，在波长517 nm处测定吸光值（A0）。分别移取DPPH溶液与乙醇混匀后在同样条件下测定空白组吸光值（A），然后移取地参三萜酸提取液与乙醇混匀，在相同条件下测定对照组吸光值（A1），分别平行3次试验，同时以相同质量浓度的VC做对照试验。

1.2.7.2 ABTS+清除率测定溶液配制：参照王天等（2022）的方法，称取ABTS粉末38.41 mg，加入蒸馏水定容至10 mL容量瓶，再称取过硫酸钾6.62 mg，加入蒸馏水定容至10 mL容量瓶，将定容后的ABTS与过硫酸钾溶液转移至25 mL容量瓶并定容至刻度，混匀后在25℃下避光反应16 h备用。移取配制成质量浓度为0.15～0.35 mg/mL 5个不同浓度梯度的地参三萜酸样品溶液于5个试管中，分别加入配制好的ABTS混合液，在25℃条件下避光反应6 min，在734 nm波长处测定吸光值（A0）；同时在相同条件下移取乙醇与ABTS混合溶液混匀后测定空白组吸光值（A），分别平行3次试验，并以相同质量浓度的VC做对照试验。

1.2.7.3 羟自由基（·OH）清除率测定硫酸亚铁、过氧化氢和乙醇—水杨酸溶液配制：准确称量硫酸亚铁0.2502 g，加入蒸馏水稀释定容至100 mL，配制成9 mmol/L硫酸亚铁溶液；精密移取0.44 mL 30%过氧化氢，稀释定容至500 mL容量瓶中，配制成8.8 mmol/L过氧化氢溶液；准确称量0.243 g水杨酸，加入乙醇稀释定容至100 mL，配制成9 mmol/L乙醇—水杨酸溶液。

测定方法：参照姚佳等（2021）的方法，移取配制成质量浓度为0.15～0.35 mg/mL 5个不同浓度梯度的地参三萜酸提取液于5个试管中，分别加入已配制的硫酸亚铁溶液和乙醇—水杨酸溶液混匀，加入过氧化氢溶液设为试验组A0，参照以上操作不加样品设为空白组A，加入蒸馏水设为对照组A1，测定其吸光值，平行3次试验，以相同质量浓度的VC为阳性对照。

1.3 统计分析

采用Excel 2019和Origin 2018对试验数据进行处理分析及绘图，以Design-Expert 12进行响应面设计及试验分析。

2 结果与分析

2.1 线性关系考察结果

以峰面积为纵坐标（Y）、进样浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，回归方程和线性范围见表2。白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸的线性范围分别为5.41～216.40μg/mL、4.39～175.60μg/mL和5.08～203.20μg/mL，R2在0.99996～0.99998。

表2 对照品的线性关系和范围Table 2 Linear relation and range of reference substance

2.2 方法学验证结果

2.2.1 精密性试验结果 计算所得白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸平均RSD分别为0.87%、0.36%和0.40%，小于1%，表明仪器精密度良好。

2.2.2 重复性试验结果所测白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸平均RSD分别为0.97%、0.45%和0.53%，小于1%，表明重复性良好。

2.2.3 稳定性试验结果所得白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸平均RSD分别为1.89%、0.49%和0.31%，白桦脂酸RSD小于2%，齐墩果酸和熊果酸RSD小于1%，说明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.4 加标回收试验结果由表3可知，白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸的平均回收率在100.27%～103.90%，RSD分别为1.90%、1.05%和0.78%，小于3%，表明测定地参三萜酸的试验方法可行。

表3 加标回收试验结果（n=6）Table 3 Results of standard addition recovery test（n=6）

2.3 单因素试验结果分析

2.3.1 乙醇体积分数对地参三萜酸提取量的影响由图1可知，乙醇体积分数过高或过低，对三萜酸提取量均有显著影响（P＜0.05，下同），乙醇体积分数过低，地参三萜酸的提取效果较差，随着乙醇体积分数升高，三萜酸提取效果越好，乙醇体积分数在80%～90%时，三萜酸提取量呈显著上升趋势，在乙醇体积分数为90%时提取量达最大值（1.6281 mg/g），90%～100%乙醇体积分数的三萜酸提取量均在较高水平，二者间差异不显著（P＞0.05，下同）。说明乙醇体积分数越高，样品中的三萜酸有效成分能高效溶出。这可能是样品与溶剂相似相溶原理，溶剂与三萜酸极性相似成分可被溶剂充分溶出而被提取，乙醇体积分数过低，样品溶出能力较弱，提取效果较差，三萜酸的提取量低。因而选取80%、90%和100%3个乙醇体积分数作为后续响应面优化分析的水平。

2.3.2 提取时间对地参三萜酸提取量的影响 由图2可知，随着提取时间的延长，地参三萜酸提取量先增后减，提取1.0～1.5 h时，三萜酸提取量上升最快，提取至2.0 h时，提取量达最大值（1.5600 mg/g），此时地参中三萜酸成分已基本溶解出来。继续延长提取时间，溶出的三萜酸成分含量直线下降，可能是选取较高的乙醇体积分数、提取温度恒定等因素促使三萜酸成分快速溶出，也可能是提取时间过长，使三萜酸成分遭到破坏。因此，选取1.5、2.0和2.5 h作为后续响应面优化分析的水平。

2.3.3 料液比对地参三萜酸提取量的影响 由图3可知，地参三萜酸提取量随溶剂用量的增加呈先升高后降低的变化趋势，料液比为1∶40时三萜酸提取量达最大值（1.6761 mg/g）。这可能是因为在一定的提取温度、提取时间和乙醇体积分数下地参样品的溶解度稳定，溶剂体积过少，三萜酸无法溶解完全；当达到一定的溶剂体积，三萜酸溶解已基本溶出且处于恒定状态，三萜酸已达最大溶解量；若进一步加大溶剂体积，不仅对提取量影响小，还可能会溶解出其他成分。因此，选取料液比1∶30、1∶40和1∶50作为后续响应面优化分析的水平。

2.3.4 提取温度对地参三萜酸提取量的影响由图4可知，提取温度对地参三萜酸提取量的影响趋势呈现不规则性，提取温度为35℃时，三萜酸成分开始溶出，随着温度的升高，在45℃时三萜酸提取量有所减少，可能其他成分的溶出影响了萜类成分提取，说明提取温度低于55℃时，提取温度对三萜酸提取量处于不稳定状态，提取不完全，三萜酸提取量波动大，可能与地参粉末接触不均匀，以及温度升高使样品组织细胞开始破碎从而有其他成分溶出等影响有关。当温度不断升高时，提取液中分子运动加快，与地参粉末得到充分接触，三萜酸溶出量也不断增加，在55℃时三萜酸提取量达最大值；超过55℃后，三萜酸提取量快速下降，可能是提取温度过高导致乙醇溶剂易挥发，影响三萜酸结构的稳定性，从而影响三萜酸的提取效果。因此，选取45、55和65℃3水平进行响应面优化试验。

2.4 响应面优化试验结果分析

2.4.1 响应面回归模型建立综合单因素试验结果所得，采用提取时间（A）、乙醇体积分数（B）、料液比（C）和提取温度（D）4因素3水平的响应面中心试验，运用Design-Expert 12进行二次多项式拟合。以地参三萜酸提取量（Y）为响应值，由回归模型可得三萜酸与4个变量之间的线性关系，即二次回归方程：Y=1.88+0.0106A+0.2487B+0.0446C-0.0391D+0.00037AB-0.0086AC-0.0325AD-0.0557BC+0.0364 BD-0.0209CD-0.0713A2-0.2338B2-0.1428C2-0.0361D2。

由ANOVA分析结果（表5）可知，模型F=23.95，P=0.0001，模型极显著（P＜0.01，下同），失拟项F=2.91，P=0.1573，失拟项不显著，表明选用的二次多项模型拟合程度良好，模型成立。模型相关系数R2=0.9599，表明该回归方程有很好的相关性，校正决定系数=0.9385，表明有93.85%的响应值变化。影响地参三萜酸提取的因素中，B、A2、B2和C2影响极显著，C和D影响显著。选取的4个因素对三萜酸提取量影响排序为：B＞C＞D＞A。

表5 方差分析结果Table 5 Analysis result of variance

2.4.2 交互作用影响分析 响应面图能直观反映两因素之间的交互作用对地参三萜酸提取效果的影响，由回归方程得出响应面图（图5），响应面曲面越陡，表明交互作用越明显，反之响应面曲面坡度缓，表明无交互作用。响应面投影底部为等高线图，等高线的形状能反映两因素之间是否交互，圆形表示两因素之间无明显的交互作用，椭圆形则表示两因素之间有交互作用。

图5-a、图5-b和图5-f的等高线中椭圆度不大，趋近于圆的程度，说明两因素间的交互作用不明显，均未达显著水平；图5-c、图5-d和图5-e的等高线中椭圆程度相对明显，但两因素间交互作用相对较弱，仍未达显著水平。图5-a～图5-f中，固定一个因素，地参三萜酸提取量均随着另一个因素的增大而减小，等高线趋近于圆形，从而表明两因素之间交互不明显，与方差分析结果一致。

表4 响应面试验设计及结果Table 4 Response surface experimental design and results

2.4.3 验证试验结果 通过单因素及响应面试验进行优化分析，得出提取地参三萜酸的最佳工艺条件：提取时间1.944 h、乙醇体积分数95.591%、料液比1∶40.332、提取温度51.750℃，在此工艺条件下，地参三萜酸理论提取量为1.9440 mg/g。综合试验条件的操作，将各参数进行调整：提取时间2.0 h、乙醇体积分数95%、料液比1∶40、提取温度50℃，重复3次，测得地参三萜酸提取量为1.9431 mg/g，与预测值差异小，说明该试验方法可行。

2.5 地参三萜酸抗氧化活性分析结果

2.5.1 DPPH·清除能力测定结果DPPH·清除率是常见且稳定的抗氧化指标之一，DPPH粉末醇溶物呈紫色，在517 nm处有吸收峰值。由图6可知，地参三萜酸提取液有一定的清除DPPH·能力，随着提取液浓度的逐渐增大，清除率呈上升趋势，不同浓度梯度均有良好的清除能力。在0.15～0.20 mg/mL和0.30～0.35 mg/mL范围内，三萜酸的DPPH·清除率随浓度增大而上升，在0.20～0.30 mg/mL范围内，清除率保持平缓稳定状态。当三萜酸提取液质量浓度为0.15 mg/mL时，DPPH·清除率为75.89%；质量浓度为0.35 mg/mL时，DPPH·清除率达87.46%。Vc对DPPH·的清除率随Vc质量浓度的增大而缓慢升高，在相同浓度下，Vc的清除能力强于三萜酸的清除能力。通过分析可知，地参三萜酸对DPPH·具有较强的清除能力，说明地参中三萜酸成分有较好的抗氧化活性。

2.5.2 ABTS+清除能力测定结果ABTS与过硫酸钾反应生成的自由基在734 nm处有最大吸光值，避光反应孵育的ABTS溶液与过硫酸钾溶液混合溶液需在测定前稀释成工作液。由图7可知，地参三萜酸提取液ABTS+清除率变化趋势与Vc相似，但稍低于Vc清除率，地参三萜酸提取液最大清除率为97.57%，Vc的最大清除率为99.00%。ABTS+清除率随着样品溶液质量浓度增大而递增，与质量浓度梯度呈正相关。结果表明，地参三萜酸提取液具有良好的ABTS+清除效果，抗氧化活性强。

2.5.3 ·OH清除能力测定结果·OH是一种常见的反映抗氧化活性强弱的指标，·OH易与大分子物质发生反应，Fe2+与过氧化氢反应后产生的羟基可与水杨酸反应，在510 nm处有最大吸收峰。由图8可知，地参三萜酸对·OH的清除能力较DPPH·和ABTS+的清除能力弱，最大清除率仅为46.78%，其质量浓度越低清除率越低，而Vc阳性对照的清除率远高于三萜酸，Vc质量浓度在0.35 mg/mL时清除率趋近于100.00%。即使三萜酸的·OH清除率低，也有一定的抗氧化活性。

3 讨论

浸提法广泛应用于中药材及食品中有效成分提取的研究（王念等，2021），三萜酸成分多采用乙醇和甲醇等有机溶剂进行提取，黄小兰等（2020）研究表明乙醇对地参中三萜酸成分提取效果良好。本研究结合试验过程中实验室条件、试验可行性和操作简便性等问题，综合考察后采用醇提法提取地参三萜酸成分，并对其抗氧化作用进行研究。经单因素和响应面试验优化，得到提取地参三萜酸工艺条件为：提取时间2.0 h、乙醇体积分数95%、料液比1∶40、提取温度50℃，在此条件下，地参三萜酸提取量为1.9431 mg/g。刘娜（2016）对泽兰茎叶和根部进行研究，所得地参三萜酸提取率为茎叶三萜酸提取率（3.21%）的1/3；黄小兰等（2020）研究表明，不同产地地参三萜酸提取总量在2.099～2.748 mg/g。本研究采用醇提法对地参三萜酸的提取量略少于超声辅助提取法（黄小兰等，2020），但相差较小，可能因为超声辅助提取对样品的破碎能力强，萜类成分能更好地溶解。邹俊等（2018）在热浸法条件下提取连钱草三萜酸成分，所得齐墩果酸和熊果酸含量分别为0.8059和1.5683 mg/g，结果显示乙醇体积分数为88%左右时，对连钱草三萜酸成分的提取效果最优，本研究结果与其类似，乙醇体积分数均在90%左右，进而说明乙醇体积分数较高，地参与连钱草中的三萜酸有效成分能高效溶出，与三萜酸的极性有关，可证明在乙醇体积分数越大的条件下对三萜酸提取更完全。在单因素基础上运用响应面优化工艺条件，根据响应面及等高线结果可知，乙醇体积分数与料液比两因素之间交互作用较弱，未达显著水平，其余两两因素之间交互作用也未达显著水平，表明两因素之间交互作用不明显。在单个因素中，乙醇体积分数是主要的影响因素，且响应面结果显示对三萜酸提取量有极显著影响。

地参含有多种生物活性成分，已有学者对其多糖、多酚、黄酮等活性成分进行提取及抗氧化活性研究（黄菊华，2015；王文净和高春燕，2016；桑鹏和高春燕，2016；李月等，2018，2019），结果表明地参中多种生物活性成分均具有一定的抗氧化作用。本研究通过研究3种自由基清除率评价地参中三萜酸成分的抗氧化活性。在DPPH·抗氧化活性方面，地参三萜酸在最大质量浓度下的清除率为87.46%，与何策等（2021）对桑树桑黄总三萜提取物测定的最大质量浓度下抗氧化活性结果（86.45%）类似，说明不同物种资源、不同质量浓度下三萜酸成分的抗氧化活性有相似性；在ABTS+抗氧化活性方面，李晓强等（2022）测定余甘子多酚的ABTS+清除率可达97%，本研究结果（97.57%）与其研究结果类似，说明不同物种资源、不同活性成分的抗氧化活性能力有相似性。本研究结果表明，地参三萜酸提取物质量浓度不同，抗氧化活性不同。通过对DPPH·、ABTS+和·OH 3种体外抗氧化活性进行测定，发现地参三萜酸成分清除ABTS+效果最优，其次是清除DPPH·，对·OH的清除效果最低，说明三萜酸对·OH的清除效果不明显，可能地参中所含三萜酸的含量未达到较高抗氧化效果所需的质量浓度，与蔡天娇（2010）、付亚玲等（2021）研究同浓度下三萜酸的·OH清除能力类似。本研究表明地参中三萜酸提取物具有一定的抗氧化活性，但未进行提取物的分离纯化，总三萜酸成分复杂，后续有必要对地参三萜酸有效成分进行分离纯化并对其功能进一步研究，为地参资源的高值化利用提供基础。

4 结论

通过响应面法优化提取地参三萜酸方法可靠，获得地参三萜酸提取量为1.9431 mg/g；地参三萜酸具有一定的抗氧化活性，可开发功能性产品。