莫高组合对环磷酰胺致小鼠免疫功能低下的影响

蒋海生，张晓云

（1.河北征宇制药有限公司，河北 石家庄 051430；2.河北省兽用免疫增强剂产业技术研究院，河北 石家庄 051430；3.河北省动物专用免疫增强剂技术创新中心，河北 石家庄 051430）

中医有云：“正气内存，邪不可干。”所谓正气就是机体的免疫力，当免疫力低下时，免疫系统无法及时消除衰老和受损细胞以及致病微生物，导致疾病的发生。提高免疫力低下者的免疫功能对维持机体的健康和对抗疾病非常重要。

莫力健主要成分包括多种维生素以及可饲用天然植物提取物等，专门用于提高动物机体黏膜免疫力，修复受损黏膜，维护黏膜完整性，促进黏膜蛋白合分泌，降低机体发病率。

高免多糖是一种复合植物多糖免疫增强剂，临床上主要用于增强机体的免疫功能、发挥免疫佐剂作用、辅助治疗病毒病、降低应激反应。张洪德等研究发现，高免多糖有提高雏鸡法氏囊指数的作用，并且能在提高抗体水平的基础上提高整齐度。褚秀玲等研究发现，高免多糖可以明显改善番鸭的生长性能，促进免疫器官的发育；可以提高特异性免疫抗体水平，促进白细胞介素-2（IL-2）和γ干扰素（IFN-γ）等细胞因子的分泌。刘学彬等研究表明，高免多糖能提高母猪的免疫水平，提高猪瘟抗体效价、血清IFN-γ和IL-2水平；增加母猪所产仔猪的平均断奶头数、提高断奶成活率和断奶均重，还能减少仔猪腹泻的发生。说明在母猪饮水及日粮中添加高免多糖能提高母猪的生产性能和免疫机能，间接改善哺乳仔猪的生长性能和健康状况。

基于上述理论基础，本研究通过小鼠免疫功能低下模型，探讨莫高组合对小鼠的免疫调节作用及作用机制，旨在为莫高组合的临床应用提供合理的理论依据。

1 材料

1.1 试验动物SPF级C57BL/6小鼠80只，雌雄各半，体质量18～22g，6～8周龄，购自河北伊维沃生物科技有限公司（实验动物生产许可证号：SCXK（冀）2020-002）。

1.2 药物与试剂莫力健、高免多糖均由河北征宇制药有限公司提供；环磷酰胺（756240-1G，购自北京华迈生物科技有限责任公司）；小鼠溶菌酶（LZM）试剂盒（购自南京建成生物工程研究所）。

1.3 主要仪器AUW120D电子分析天平，上海岛津仪器有限公司；DH36001B电热恒温培养箱，天津泰斯特仪器有限公司；Centrifuge 5810 R高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司；101-2EBS电热鼓风干燥箱，北京永光明医疗仪器有限公司；SP-756P紫外可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司；Infinite F50酶标仪，奥地利Tecan有限公司；微量移液器，北京大龙。

2 方法

2.1 试验分组、造模和给药将80只小鼠随机分为8组，每组10只，分别为正常对照组、模型组、莫高0.5g/kg、1g/kg、1.5g/kg、2g/kg、2.5g/kg、3g/kg六 个不同剂量组。适应性饲养10d后，除正常对照组外其余各组腹腔注射环磷酰胺（80mg/kg）制造免疫力低下模型，1次/d，连续3d，第6天同剂量加强一次；正常对照组动物注射等体积生理盐水。造模成功后各组分别灌胃给予相应药物，正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水，连续给药10d。

2.2 一般状态观察每日观察小鼠精神状态，活动、采食、饮水情况，毛发光滑度等。

2.3 体质量变化率的测定

2.4 溶菌酶活性测定末次给药后正常饮水，禁食12h后将所有组小鼠称重，眼眶静脉采血。采集的血液置于37℃恒温箱中保温30min，然后置于4℃冰箱中过夜，5000rpm离心10min，用微量移液器分离血清，-20℃保存，备用。采用溶菌酶试剂盒测定溶菌酶含量，严格按照试剂盒说明书操作。

2.5 免疫器官指数测定采完血之后，小鼠断颈处死，取其脾脏、胸腺，用滤纸吸去多余的血液，在电子天平上称其重量，记录数据，计算免疫器官指数。脾脏指数=脾脏质量（mg）/体质量（g）胸腺指数=胸腺质量（mg）/体质量（g）

2.6 数据统计与分析采用SPSS 26.0软件对试验数据进行单因素方差分析，试验数据用“平均值±标准差”表示，采用Duncan法对试验结果进行差异显著性分析，P＜0.05表示差异显著，具有统计学意义。

3 结果

3.1 莫高组合对免疫功能低下小鼠一般状态的影响连用环磷酰胺3d后，除正常对照组（见图1）外，其余各组小鼠均表现出毛色无光，精神不振，双目无神，闭眼昏睡（见图2），喜欢蜷缩在一旁，活动减少，对外界环境的动静反应比较迟钝，小鼠采食量、饮水逐渐减少，体质量明显下降，表明免疫力低下模型造模成功。经莫高组给药治疗后，各给药组小鼠（见图3）精神状态逐渐改善、活动量增加，采食量、饮水、体质量均有不同程度的提高。

图1 正常对照组

图2 免疫低下模型组

图3 给药治疗组

3.2 莫高组合对免疫功能低下小鼠采食量、体质量变化率的影响结果如表1所示，与正常对照组相比，模型组小鼠采食量减少（P＞0.05），体质量变化率显著下降（P＜0.05）。与模型组相比，各个剂量莫高给药组采食量、体质量变化率均有所增加（P＞0.05），并且在0.5g/kg剂量时均显著升高（P＜0.05）。

表1 莫高组合对免疫低下小鼠采食量、体质量的影响（n=10）

3.3 莫高组合对免疫功能低下小鼠溶菌酶活性的影响结果（见表2），与正常对照组比较，模型组小鼠血清溶菌酶活性显著下降（P＜0.05）。与模型组比较，各个剂量莫高组小鼠血清溶菌酶活性均显著提高（P＜0.05），其中0.5g/kg莫高组作用效果最好。

表2 莫高组合对免疫低下小鼠溶菌酶活性的影响（n=10）

3.4 莫高组合对免疫功能低下小鼠免疫器官指数的影响结果（见表3），与正常对照组比较，模型组小鼠脾脏指数、胸腺指数均显著降低（P＜0.05）。与模型组比较，各剂量莫高组小鼠脾脏指数、胸腺指数均有不同程度的提高，其中0.5g/kg莫高组作用效果最好（P＜0.05）。

表3 莫高组合对免疫低下小鼠免疫器官指数的影响（n=10）

4 讨论

4.1 莫高组合对免疫功能低下小鼠一般状态、采食量、体质量变化率的影响环磷酰胺（Cyclophosphamide，CTX）在药理学等研究领域中常用于制造免疫功能低下或免疫功能抑制状态的动物模型，在临床应用中已经非常成熟。康慧琳等研究结果表明，高剂量（80mg/kg）CTX通过抑制DNA的复制、促进细胞凋亡，降低T、B细胞增殖指数及巨噬细胞吞噬功能，从而降低免疫细胞功能，使机体处于免疫抑制状态。因此，本实验采用环磷酰胺（80mg/kg）腹腔注射造模，制备小鼠免疫功能力低下模型。

本实验研究结果显示，与正常组比较，模型组小鼠均表现出毛色无光，精神不振，双目无神，闭眼昏睡，喜欢蜷缩在一旁，活动减少，对外界环境的动静反应比较迟钝，采食量、饮水逐渐减少，体质量明显下降，这与高敏、魏琳等人用环磷酰胺制备小鼠免疫力低下模型相一致。经莫高组给药治疗后，各给药组小鼠精神状态逐渐改善、活动量增加，以及采食量、饮水、体质量均有不同程的提高。由此说明莫高组合对由环磷酰胺导致免疫功能低下的小鼠具有很好的免疫保护作用，其具体作用机制还有待进一步研究。

4.2 莫高组合对免疫功能低下小鼠血清溶菌酶活性的影响巨噬细胞是动物机体自然抵抗力和非特异性免疫的一个重要组成部分，在细胞介导的免疫和体液免疫中都发挥着重要作用，血清溶菌酶水平是评估机体非特异性免疫功能强弱的一个重要指标。溶菌酶是单核细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的产物，主要由单核细胞-吞噬细胞释放到血清中。作为一种存在于动物正常体液和组织中的非特异性免疫物质，溶菌酶具有多种药理作用，如抗菌、抗病毒、抗肿瘤、激活补体和促进吞噬作用。

本试验研究表明，与模型组相比，0.5～3g/kg剂量莫高组均可显著提高免疫功能低下小鼠血清溶菌酶含量，增强非特异性免疫功能，其中0.5g/kg剂量莫高组作用效果最明显。同时，小鼠血清溶菌酶活性的提高表明莫高组合可能激活血液中吞噬细胞的活性。激活的吞噬细胞可以分泌一些酶类（溶酶体水解酶、溶细胞酶）、TNF、NO等活性分子，这些活性物质对肿瘤细胞和致病细胞有强大的杀伤力，提高机体的体液免疫和细胞免疫功能，促进机体的免疫保护机制，进而从机体免疫系统的多个层次调节免疫功能。关于莫高组合提高小鼠血清溶菌酶活性，增强非特异性免疫功能的机制还有待于进一步研究。

4.3 莫高组合对免疫功能低下小鼠免疫器官指数的影响免疫器官的重量和功能与其中所含免疫细胞的数量密切相关，从器官指数可以看出淋巴细胞的增殖，也可以粗略估计免疫功能的强弱。与模型组相比，各个剂量水平莫高组合（0.5g/kg、1g/kg、1.5 g/kg、2g/kg、2.5g/kg、3g/kg）均可提高小鼠的脾脏指数、胸腺指数，其中0.5g/kg莫高组的作用明显优于其他组，且具有统计学意义。这表明莫高组合能够有效对抗由环磷酰胺导致的免疫器官损伤或萎缩，改善由环磷酰胺导致的免疫功能低下小鼠的免疫机能。

5 结论

莫高组合（0.5～3g/kg）可以提高小鼠体质量变化率、血清溶菌酶的活性、脾脏指数和胸腺指数，改善由环磷酰胺导致的免疫功能低下小鼠的免疫机能，增强机体的免疫防御能力，其中0.5g/kg莫高组的作用效果最好。