五倍子单宁酸凝胶对仔猪生长性能、血液生化指标及免疫指标的影响

陈亚强，彭津津

（重庆三峡职业学院，重庆 404100）

随着国内禁止在畜禽生产中添加促生长类饲料添加剂以来，其替代品研究受到越来越广泛的关注，如何制备能提高动物生产性能、增强免疫力的替代品是畜牧业健康发展亟待解决的问题。五倍子是我国传统中药，占世界总产量的95%，其最多的活性成分为单宁酸（GTA），具有显著的抗氧化、抗炎症、抗病毒、抗肿瘤和改善肠道微生态环境等多种作用（苟昌勇，2021）。近年来，国内外多个研究表明，以GTA作为饲料添加剂能提高动物生产性能及免疫力水平（童玉鑫等，2022）。此外，五倍子对口腔疾病有多方面功能，由此制成五倍子凝胶有利于口腔保健（刘玉梅和徐静舒，2017）。因此，本试验以断奶仔猪为研究对象，探讨前期研制的GTA凝胶对仔猪生长性能、血液生化指标及免疫指标的影响，以期为GTA凝胶作为新型添加剂在动物养殖中的应用提供理论支撑。

1 材料与方法

1.1 试验材料 GTA购自西安西奥生物科技有限公司，水解单宁酸含量为50%；28日龄断奶仔猪（杜×长×大）购自重庆万州德康农牧科技有限公司；牙龈卟啉单胞菌（ATCC33277）、具核梭杆菌（ATCC23276）由华南农业大学提供；牛心脑浸液肉汤购自Sigma公司。

1.2 凝胶制备 将N-甲基吡咯烷酮、三乙酸甘油酯按7∶3配成混合溶剂，加入35%浓度的聚乳酸-羟基乙酸共聚物，静置，待完全溶解后加入GTA，搅拌均匀，制成含GTA终末浓度为80 g/kg的凝胶，常温避光，连续缓慢搅拌5 d，4℃避光保存。

1.3 试验设计 制备终浓度为8%的GTA凝胶；采用单因素完全随机试验设计，将72头体重相近健康断奶仔猪分为4组，每组3个重复，每重复6头猪（公母各半），分别为空白组（不饲喂凝胶），对照组（饲喂空白凝胶），凝胶1组（GTA凝胶300 mg/kg·bw），凝胶2组（GTA凝胶600 mg/kg·bw），均在采食后饲喂给仔猪。试验周期28 d。

参照NRC（2012）猪营养需要和《中国饲料成分及营养价值表》（2018）设计玉米-豆粕型基础饲粮，营养水平参考发表文献（苟昌勇，2021；邓文等，2018）。

1.4 饲养管理 在重庆和厚农牧发展有限公司进行动物试验。试验猪均在同一圈舍，每个重复组在同一栏，圈舍通风采光良好，每日上午7：30（使用凝胶）、11：00和下午 2：00、7：30（使用凝胶）进行4次饲喂，向采食后仔猪口腔注入终浓度为8%的GTA凝胶，自由采食饮水。按照常规操作进行饲养管理，每日观察猪群健康。

1.5 测定指标

1.5.1 生长性能 在试验开始前和结束当天清晨，空腹称重试验猪，记录初重、末重，并记录日耗料量，计算平均日增重、平均日采食量和耗料增重比，具体公式如下：

平均日增重=（末重－初重）/试验天数；

平均日采食量=耗料量/（试验天数×试验头数）；

耗料增重比=耗料量/增重；

1.5.2 血液生化指标 试验结束时，每个重复选取中等体重的3头猪，采血10 mL，3 000 r/min离心10 min，-20℃保存，试剂盒测定血清中总蛋白、总胆固醇、尿素氮、血糖等指标。

1.5.3 免疫指标 ELISA法测定上述血清的IgA、IgM、IgG、IFN-γ、IL-1。

1.5.4 体外抑菌试验 取牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌菌株分别接种于牛心脑浸液肉汤培养基，37 ℃ 厌氧（80%N2、10%H2、10%CO2）培 养 48 h，将细菌密度调整为1.5×108CFU/mL，均匀涂布培养基，厌氧培养48 h。

将滤纸裁制成大小相同圆片，分别滴加GTA凝胶、生理盐水、2%洗必泰，放置于3个上述制备的培养基，37℃厌氧培养4 d，测抑菌圈直径。

1.6 数据统计与分析 采用SPSS 21.0进行单因素方差分析，采用Duncan’s法进行多重比较，数据结果以“平均值±标准差”表示，P＜0.05表示组间差异显著。

2 结果

2.1 对仔猪生长性能的影响 由表1可知，凝胶1组和凝胶2组能显著提高仔猪日增重和平均日采食量（P＜0.05），凝胶2组能显著降低耗料增重比（P ＜ 0.05）。

表1 GTA凝胶对仔猪生长性能的影响

2.2 对仔猪血清生化指标的影响 由表2可知，凝胶1组能显著降低血浆BUN浓度（P＜0.05），凝胶2组能显著提高血浆TP浓度（P＜0.05）、极显著降低血浆BUN浓度（P＜0.01）；对血浆TC、GLU浓度无显著影响（P＞0.05）。

表2 GTA凝胶对仔猪血清生化指标的影响

2.3 对仔猪免疫指标的影响 由表3可知，凝胶1组能显著提高血浆IgA、IgM、IgG浓度（P＜0.05）；凝胶2组能显著提高血浆IgA、IgG、IFN-γ浓度（P＜0.05），极显著提高血浆IgM浓度（P＜0.01），极显著降低血浆IL-1β浓度（P＜ 0.01）。

表3 GTA凝胶对仔猪免疫指标的影响

2.4 体外抑菌试验结果 由表4可知，GTA凝胶对牙龈卟啉单胞菌的抑菌圈大小为2.9 mm，对具核梭杆菌的抑菌圈大小为3.5 mm。

表4 GTA凝胶体外抑菌试验结果 mm

3 讨论

凝胶制备饲料是目前仔猪饲料的发展趋势之一（Miriam等，2012）。本研究制备的GTA凝胶在采食后直接注入口腔，主要考虑仔猪采食特点及口腔护理两方面需求。

单宁是单胃动物的“抗营养因子”，能抑制动物生长（郑翠玲，2022）。但近几年研究表明，日粮添加GTA具有改善动物生长性能、调节肠道菌群及免疫促进作用（Huang Q等，2018）。胡成等（2021）按照0.1%添加单宁酸至仔猪日粮，测得70日龄体重增加7.46 kg，且腹泻率显著降低。李建光等（2021）研究发现，五倍子单宁酸能显著提高仔猪日增重，且显著优于氧化锌，并能减少腹泻，提高仔猪生长性能。本研究发现，凝胶2组不仅能显著提高仔猪日增重和平均日采食量，且能显著降低耗料增重比。

血液生化指标具有指示机体健康的作用，如TP反映蛋白质吸收、TC反映脂代谢、BUN反映了肾脏代谢、GLU反映糖代谢。宋妍妍等（2021）研究发现，0.51%的五倍子单宁酸添加能损伤仔猪肝脏，0.1%则无影响。郑翠玲（2022）研究发现，饲喂五倍子提取物能显著提高仔猪血液总蛋白和球蛋白浓度，显著降低尿素氮浓度。本研究同样证实五倍子单宁酸对仔猪肝脏代谢有促进作用，且使用剂量对仔猪肝脏无损害。

当机体受到抗原侵入时，IgG、IgA、IgM发挥着重要的免疫防御功能（Cheng Y等，2020）。解湧芳（2022）研究表明，添加2%或4%的单宁酸能使绵羊IgA、IgG、IgM含量显著提高。IL-1β是一种促炎细胞因子，可加剧炎症反应。IFN-γ是抗炎因子，若IL-1β浓度降低、IFN-γ浓度提高能反映免疫应答增强（范秋丽等，2022）。童玉鑫等（2022）研究表明，GTA显著增加脾脏IFN-γ的mRNA表达，从而提高免疫应答。范秋丽等（2022）在研究发现，添加250 mg/kg和500 mg/kg五倍子提取物能显著提高空肠分泌型免疫球蛋白A和IFN-γ含量，且显著降低IL-1β、IL-8和TNF-α浓度。本研究的两个试验组均能显著提高血浆IgA、IgM、IgG浓度，且凝胶2组能显著提高血浆IFN-γ浓度，极显著提高IgM浓度，极显著降低血浆IL-1β浓度，由于IFN-γ和IgM多在脾脏生成，因此，凝胶2组是否能增强脾脏功能有待于进一步研究。

本研究以2%洗必泰作为阳性对照，发现GTA凝胶对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌均有较好的抑菌效果，可同时作为预防口腔疾病的药物使用。

4 结论

GTA凝胶可有效提高仔猪生长性能、代谢水平和免疫能力，最佳使用量为600 mg/kg·bw，且具备一定的预防口腔疾病作用。