急性ST段抬高型心肌梗死患者血浆UCA1、miR-1表达水平及相关性分析

侯维维,郭良敏,王春彬

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)多是因寒冷刺激、暴饮暴食、激动、过劳引起的持续性冠状动脉缺血缺氧，是我国常见急重症，由于病情凶险、预后差，导致病死率一直居高不下，对此需尽早发现、诊断、治疗[1]。ST段抬高型心肌梗死是心电图表现为ST段弓背向上抬高曲线的AMI类型，可伴病理性Q波，误诊、漏诊率仍较高，导致治疗时机被延误，故需寻找特异性好、灵敏度高的诊断标志物[2]。近年来随着基因学及相关临床研究备受关注，学者发现非编码RNA常在恶性病变中发挥重要作用[3]。尿路上皮癌抗原1(urothelial cancer antigen 1，UCA1)是一种发现于膀胱移行的长链非编码RNA，参与了癌胚基因发生、发展过程，目前已有研究证实其在尿路上皮癌中存在异常表达[4]。但目前关于UCA1与AMI关系研究较少，处于探索阶段。基于以往研究结果，本文分析了AMI患者中UCA1表达情况，并探索了UCA1表达与miR-1及心肌损伤指标的相关性，以此探究ST段抬高型心肌梗死的发生机制，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年3月—2021年3月成都市第三人民医院心内科收治的STEMI 患者124例为研究对象(STEMI组)，其中男75例，女49例，年龄54～61(59.35±4.22)岁，体质量58～64(61.12±3.26)kg，体质量指数22.90～24.52(23.51±2.01)kg/m2。同期医院健康体检者116例为健康对照组，其中男66例，女50例，年龄55～63(59.41±4.57)岁，体质量59～66(62.33±3.45)kg，体质量指数23.01～24.27(23.51±2.01)kg/m2。2组性别、年龄、体质量等比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究通过医院伦理评审委员会审核，全部受试者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 病例选择标准 纳入标准：①STEMI诊断符合“急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南(2019)”[5]中关于急性AMI诊断标准；②经心电图检查，发现病理性Q波；经冠状动脉造影检查，冠状动脉内存在血栓。排除标准：①既往有心室扩大、心肌病、心力衰竭、房颤者；②合并血液系统、自身免疫性疾病者；③合并急性脑血管疾病者。

1.3 检测指标与方法 STEMI组患者入组后第2天、健康对照组于体检当日晨起抽取受检者空腹外周肘静脉血10 ml，分装2管，其中1管5 ml，1 500 r/min离心10 min，取血清存放于冰箱(-20℃)待检。使用全自动生化检测仪(日本希森公司Sysmexbx-5000型)检测心肌损伤标志物包括肌钙蛋白I(troponin I，cTnI)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme，CK-MB)。另1管5ml加抗凝后取血浆，使用定量聚合酶链反应检测miR-1、UCA1表达水平。提取总RNA进行反转录，按照试剂盒要求提取血浆中总RNA，UCA1和miR-1引物序列由上海吉凯基因公司提供，miR-1上游引物序列：5′-GGGGTGGAATGTAAAGAA-3′，下游引物序列：5′-TGCGTGTCGTGGAGTC-3′；UCA1上游引物序列：5′-ACGCTAACTGGCACCTTGTT-3′，下游引物序列：5′-TGGGGATTACTGGGGTAGGG-3′，采用实时荧光定量PCR仪(ABI公司PRISM 7900型)，严格按照说明书进行逆转录。建立PCR反应体系20 μl:PCR Master Mix 10 μl，目的引物1 μl，通用引物1 μl，无DNA酶水7 μl，模板CDAN 1 μl，扩增条件：3 min 95℃，40个循环，77℃ 20 s，72℃ 20 s，60℃ 20 s，95℃ 15 s。miR-1、UCA1相对表达水平采用2-△△Ct表示。

2 结 果

2.1 2组受试者UCA1、miR-1表达及cTnI、CK-MB水平比较 STEMI组血浆UCA1表达低于健康对照组，而miR-1表达及cTnI、CK-MB水平高于健康对照组，差异均具有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 2组UCA1、miR-1表达及cTnI、CK-MB水平比较Tab.1 Comparision of UCA1,miR-1 expression and cTnI,CK-MB levels between 2 groups

2.2 相关性分析 Pearson分析结果表明，血浆UCA1表达与miR-1表达及cTnI、CK-MB均呈显著负相关(r/P=-0.755、-0.581、-0.646，P<0.001)。

2.2 各项指标预测STEMI的ROC曲线分析 经ROC曲线分析，血浆UCA1、miR-1表达水平及cTnI、CK-MB水平预测STEMI的AUC分别为0.992、0.995、0.982、0.972，见表2、图1。

3 讨 论

急性心肌梗死是临床常见疾病，其发病率和病死率均较高，给人民生命健康带来巨大的威胁，造成沉重的社会和经济负担。其发病主要是因冠状动脉血流减少、急性梗阻引起的心肌缺血缺氧，早期可出现持续性剧烈胸骨后疼痛，随着病情恶化，可并发心力衰竭、休克、心律失常。ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者具有典型的缺血性胸痛，一般持续时间超过20 min，在心电图检查中可见典型ST段抬高表征，威胁患者生存质量和健康，需尽早诊治[6-7]。目前多项研究表明，采用冠状动脉介入、药物治疗能够解除AMI患者动脉血流受限，改善心肌供血和预后。但常规介入和药物治疗的整体疗效受治疗时机影响，无法有效保证整体预后。因此，早期准确诊断显得尤为重要。随着临床对AMI病理机制研究不断深入，学者发现非编码RNA在多种疾病发生发展中存在重要意义，蔡华荣等[8]研究发现长链非编码RNA UCA1在非小细胞肺癌中存在异常表达失调，且有学者通过动物实验，发现长链RNA作为核受体信号转导的共激活因子，可引起心室肌收缩功能障碍，故学者推测长链非编码RNA在AMI诊断中可能存在一定价值[9]。

表2 血浆UCA1、miR-1表达及cTnI、CK-MB水平预测STEMI的效能Tab.2 Efficiency of plasma UCA1,miR-1 expression and cTnI,CK-MB levels in predicting STEMI

图1 血浆UCA1、miR-1及血清cTnI、CK-MB预测STEMI的ROC曲线Fig.1 ROC curve of plasma UCA1,miR-1 and serum cTnI,CK-MB in predicting STEMI

本研究结果表明，STEMI组相较于健康对照人群，cTnI、CK-MB水平明显升高，UCA1表达显著降低，说明cTnI、CK-MB、UCA1在AMI人群中存在异常表达，可作为预测心肌损伤的重要生物指标。UCA1是一种存在于血浆中的长链非编码RNA，最早在膀胱移行细胞癌中发现，可在膀胱癌中出现异常表达，但无编码蛋白质的功能，故常作为诊断膀胱癌的潜在标志物[10]。近年来随着学者研究不断深入，发现UCA1在心肌损伤中也有一定异常表现。推测原因是，在高糖刺激下，心肌细胞UCA1可逐渐减少，导致机体热休克蛋白被抑制，加速心肌细胞凋亡，同时还可促使细胞色素C释放、线粒体功能下降，减少心肌葡萄糖摄取，降低葡萄糖转运体4水平，从而影响心肌能量代谢，加重心力衰竭[11-12]。本研究经Pearson相关分析发现，UCA1表达与cTnI、CK-MB水平呈负相关，考虑是由于UCA1表达在心功能保护中发挥一定作用，与刘崇韬等[13]研究结果相符。

miR-1是心脏中表达丰度较高的miRNA，且特异表达于心肌细胞。miR-1在抑制转录后基因表达中具有一定作用，可介导细胞分化、增殖，促进靶向mRNA降解过程中负向调节功能，在心肌细胞中存在特异性表达，且对心血管病变发生、发展有着重要作用[14]。本结果显示，STEMI组miR-1表达高于健康对照组，分析原因，系机体发生AMI后，可通过受损破裂的心肌细胞渗入至体循环，加入微囊泡主动分泌，使得miR-1表达水平升高[15]。而经相关性分析，miR-1与UCA1表达呈负相关性，是因为miR-1可通过介导氧化，下调UCA1表达，当机体发生AMI后，miR-1表达升高，从而间接或直接影响UCA1结合，抑制UCA1表达，随之miR-1降低，UCA1可从受损心肌释放至血液中，使得体内UCA1水平逐渐上升。此外，通过线性回归分析，miR-1会对血浆UCA1表达产生显著的负向影响关系，但cTnI、CK-MB并不会对血浆UCA1表达产生直接关系，说明AMI体内UCA1表达含量变化与miR-1更具有直接关系，可能是因miR-1、UCA1有着相同特点，均直接参与调控心肌重塑过程，是心血管病变重要的靶向分子和生物标志物[16]。

综上所述，STEMI患者存在UCA1表达降低，且与miR-1 cTnI、CK-MB均呈显著负相关，可为今后STEMI疾病诊断、病情评估、预后预测提供科学依据。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

侯维维：设计研究方案，实施研究过程，论文撰写；郭良敏：提出研究思路，分析试验数据，论文审核；王春杉：课题设计，进行统计学分析，论文撰写