AFP、AKT2、SATB1在原发性肝癌患者中的表达水平及与临床病理特征的关系*

李 欢，董宇曦

1.河北省唐山市人民医院检验科，河北唐山 063000;2.北京中医药大学生命科学学院,北京 102446

原发性肝癌为世界十大恶性肿瘤之一，具有发病隐匿、恶性程度高、复发率高、预后差等特点[1-2]。目前，临床治疗原发性肝癌多采用以手术治疗为主的综合治疗方案，但由于肝癌发展迅速并有转移潜能，术后复发、转移较为常见，患者5年生存率为25%～39%[3-4]。目前，人们对原发性肝癌发生、发展和转移等的分子机制仍不清楚。因此，研究原发性肝癌发展进程的分子机制，探讨能阻断原发性肝癌发展的靶点，以改善患者预后是亟待解决的问题。既往研究证实，甲胎蛋白(AFP)、丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)2、核基质结合区结合蛋白(SATB)1与乳腺癌、肺癌、肝癌等多种恶性肿瘤的发生、发展、转移生物学行为有关[5-7]。目前，AKT2、SATB1用于预测原发性肝癌术后复发风险，临床鲜有报道。基于此，本研究尝试探讨癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达与原发性肝癌临床病理特征的关系及预测术后复发的价值，旨在为临床防治该病提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年5月至2020年5月于唐山市人民医院接受手术治疗的82例原发性肝癌患者的病历资料进行回顾性研究。纳入标准：均符合原发性肝癌诊断标准及相关分期标准[8]，经术后病理检查证实为原发性肝癌；术前均未进行任何抗癌治疗；手术方案为根治性切除术；有完整的临床病历和病理学资料；有完整的随访记录。排除标准：术前肝功能或其他器官功能严重不全；合并其他器官、组织恶性肿瘤；精神、心理异常。其中男59例，女23例；年龄<60岁63例，≥60岁19例；合并肝硬化62例，未合并肝硬化20例；肿瘤最大径：<3 cm 23例，3～5 cm 19例，>5 cm 40例；TNM分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期51例，Ⅲ期17例；病理分级：高分化37例，中分化23例，低分化22例。

1.2方法 (1)临床病理特征收集：包括性别、年龄、肿瘤数目、有无肝硬化、肿瘤最大径、TNM分期、病理分级等。(2)AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA检测：提取肝癌组织、癌旁组织总RNA，反转录为cDNA，以β-actin为内参，采用实时荧光定量PCR测定AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达。条件：95 ℃预变性2 min，95 ℃ 15 s，64 ℃ 15 s，60 ℃ 45 s为1个循环，共45个循环，检测基因相对表达量(公式为2-ΔΔCt)。(3)随访。术后1年定期行影像学检查(肝动脉造影、B超、CT、MRI等)，发现肝内新发病灶为复发，否则为未复发。

1.3观察指标 (1)癌组织及癌旁组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平。(2)癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平与临床病理特征的关系。(3)对比术后1年复发与未复发患者癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平。(4)分析原发性肝癌患者术后复发的影响因素。(5)分析癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA对原发性肝癌患者术后复发的预测价值。

2 结 果

2.1癌组织及癌旁组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平比较 癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平均高于癌旁组织(P<0.05)。见表1。

表1 癌组织及癌旁组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平比较

2.2癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平与临床病理特征的关系 癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平与TNM分期、病理分级有关(P<0.05)。见表2。

表2 癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平与临床病理特征的关系

2.3不同预后患者癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平比较 术后1年复发19例，复发率为23.17%(19/82)。复发者癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平均高于未复发者(P<0.05)。见表3。

表3 不同预后患者癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平比较

2.4原发性肝癌患者术后复发影响因素的多因素Logistic回归分析 以原发性肝癌患者术后复发情况为因变量，以癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达作为自变量，赋值见表4，多因素Logistic回归分析结果显示，癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平升高均为术后复发的独立影响因素(P<0.05)。见表5。

表4 变量赋值表

表5 原发性肝癌患者术后复发影响因素的多因素Logistic回归分析

2.5癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA对原发性肝癌患者术后复发的预测价值 以复发者癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA作为阳性样本，以未复发者癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA作为阴性样本，绘制各指标预测原发性肝癌患者术后复发的ROC曲线。结果显示，癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA单独预测复发的AUC分别为0.815、0.756、0.761，三者联合预测的AUC为0.853。见表6、图1。

表6 癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达对原发性肝癌患者术后复发的预测价值

图1 癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA预测复发的ROC曲线

3 讨 论

转移是恶性肿瘤最基本的生物学特征，多数原发性肝癌患者行根治性切除术后仍死于肿瘤复发、转移[9]。复发、转移已成为影响原发性肝癌患者远期疗效和生存期的瓶颈问题。现在的研究热点为探讨与原发性肝癌复发、转移相关的分子标志物，明确原发性肝癌复发、转移的分子机制，以服务于肿瘤的靶向治疗。

AFP是一种糖原蛋白，AFP基因位于第4号染色体上，其在健康成人肝细胞中仅微量表达，在肝癌细胞中高表达[10]。研究报道，AFP诊断原发性肝癌的假阳性率仅为2%，是目前较有价值的早期诊断指标[11]。本研究结果显示，癌组织AFP mRNA表达水平高于癌旁组织，且与TNM分期、病理分级有关(P<0.05)，提示AFP mRNA高表达与原发性肝癌发生及生物学行为有关，但APF的生物学活性是否与疾病转归有关尚需继续探讨。多因素Logistic回归分析显示，癌组织AFP mRNA高表达为术后复发的相关影响因素(P<0.05)。分析可能原因：AFP对肝癌细胞生长有促进作用，其机制在于，通过细胞膜上AFP受体，影响淋巴细胞或肝癌细胞的肿瘤坏死因子家族及受体表达，导致癌细胞逃避机体免疫监视，并可促进癌基因表达[12]。此外，AFP在肝癌组织中的表达呈癌巢分布的趋势，癌旁组织的部分细胞也可见AFP表达，提示这些细胞可能是癌前细胞，但尚缺乏恶性转化表型[13]。结合上述研究得出，AFP可能与肝细胞恶性转化有关，参与肝癌进展及术后复发、转移。

AKT是信号转导途径中重要的蛋白激酶，其为磷脂酰肌醇-3-羟基激酶(PI3K)下游的靶蛋白，是PI3K/AKT信号转导通路的核心[13]。AKT2是AKT重要亚型之一，介导体内PI3K依赖的细胞黏附、侵袭和转移效应[14]。在肝癌、卵巢癌、胰腺癌、结直肠癌中均可检测到AKT2基因扩增与过表达，因此，AKT2被定义为癌基因[15]。本研究结果显示，原发性肝癌患者癌组织AKT2 mRNA异常高表达，且可反映原发性肝癌的生物学特性，与既往研究[16]结果一致。进一步分析发现，癌组织AKT2 mRNA高表达为原发性肝癌术后复发的影响因素(P<0.05)。相关机制可能如下：(1)AKT2通过上调金属基质蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、β1-整合素表达而促进肿瘤细胞侵袭和转移[17]；(3)AKT2可抑制肿瘤细胞凋亡，使BCL-2相关凋亡促进基因(Bad)、叉头状转录因子O1等凋亡相关分子活化或失活，引起前凋亡基因转录水平降低，并抑制细胞凋亡，导致肿瘤细胞凋亡机制障碍[18]。

SATB1是一种核基质结合区结合蛋白质，对胸腺细胞发育和T细胞成熟起重要作用，是调节免疫系统的关键物质[19]。有研究发现，SATB1能调节癌基因c-myc转录及BCL-2的转录活性，参与细胞凋亡调控[20]。因此，探讨SATB1在肿瘤发生、发展过程中的作用成为研究热点。本研究采用实时荧光定量PCR检测SATB1在原发性肝癌癌组织中的表达情况，结果显示，SATB1 mRNA在癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织，且与肿瘤分化程度、TNM分期有关(P<0.05)，提示SATB1可能参与了原发性肝癌的发生、发展过程。有研究显示，采用RNA干扰技术敲除SATBl基因可对肝癌细胞增殖及远处转移起到抑制作用[21]，也证明了SATBl在肝癌细胞转移和侵袭中发挥了重要作用。本研究还发现，癌组织SATB1 mRNA高表达为原发性肝癌患者术后复发的影响因素(P<0.05)，分析其原因可能与SATBl能上调许多转移相关基因表达有关，如钙结合蛋白(CBP)基因、血管内皮生长因子(VEGF)基因[22]。有研究报道，CBP、VEGF基因表达水平与肿瘤复发、转移呈正相关[23-25]。目前，SATB1对癌细胞生长、侵袭及转移具体调控的基因和分子机制尚不清楚，有待于进一步研究。另外，本研究进行癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA联合检测预测原发性肝癌术后复发的ROC曲线分析，发现联合预测的AUC达0.853，高于各指标单独预测。因此，临床可同时检测上述基因表达，为预测术后复发提供更有效的量化参考依据。

综上所述，原发性肝癌患者癌组织AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA表达水平与TNM分期、病理分级及术后复发有关，三者联合检测可有效预测原发性肝癌术后复发风险，为预防术后复发提供指导。但AFP mRNA、AKT2 mRNA、SATB1 mRNA具体调控癌细胞生长、侵袭及转移的分子机制尚不清楚，有待于进一步研究。