王金凤 周 琦 陈卓梅
(浙江省林业科学研究院,浙江 杭州 310023)
随着城市化进程的快速推进,城市居民人口不断增加,城市空间变得狭小、拥挤,环境污染和生活压力给人们身心健康带来的负面影响日益突出。而森林环境对人体健康有良好的疗养保健与促进作用[1-4],但在城市中不易实现。城市绿地因其距离近、易到达,可在城市中替代森林起到一定的保健、疗养作用[5-6]。因此,城市绿地的定位也随之由绿化、彩化、美化发展到具备一定保健作用的功能型绿地,从而对城市绿地景观树种的评价及配置提出了更高的要求。
植物挥发性有机物(Volatile Organic Compounds;VOCs)是指植物次生代谢产生的、室温条件下饱和蒸气压超过133 kPa且沸点介于50~260 ℃的易挥发小分子化合物[7-8]。植物VOCs的组成十分丰富,主要包括异戊二烯、单萜、倍半萜、醛类、酮类、醇类、酯类等[9-10]。研究表明,植物VOCs在自然界中具有十分重要的作用,除了可以增强植物自我防御[11-12]、促进植物间信息交流外[13-14],其中许多成分还在改善空气质量和提高人类身体健康方面有积极作用[15]。郭阿君[16]对10种室内观叶植物进行挥发性气体除菌试验,结果表明不同植物对不同细菌的抑制效果不同。赵亚红等[17]对杨梅Myrica rubra、青梅Vatica mangachapoi及茶Camellia sinensis3种常绿树挥发性成分的研究发现,3个树种对空气微生物的生长均有抑制作用,同时具有促进空气负离子形成和改善空气质量的作用。此外,其他具有除菌作用的园林树种还有七叶树Aesulus chinensis、合欢Albizia julibrissin、女 贞Chionanthus retusus、栾树Koelreuteria paniculata等,且不同植物配置类型的除菌效果也不同。植物释放的VOCs还具有调节人体免疫系统、神经系统 、缓解疲劳等作用。Li等[1-2]通过森林浴研究发现,受试人员进行森林浴后,人体的NK细胞活性及总B细胞含量增加,细胞内抗癌蛋白的水平提升,说明人体的免疫力增强。Mao等[3]研究发现,森林植物释放的VOCs可以改善慢性心衰患者的氧化应激水平和炎症状态。佟棽棽等[19]采用两种抑郁模型小鼠尾悬挂试验和小鼠强迫游泳试验对迷迭香Rosmarinus officinalis和柠檬草Cymbopogon citrates精油以及活体香气的抗抑郁作用研究结果表明:两种植物的精油以及活体香气都具有一定的抗抑郁作用。但是另一方面,植物释放的VOCs也会对环境产生部分负面影响[20-21]。植物释放的异戊二烯氧化后会改变臭氧浓度[20];同时植物释放的VOCs中也发现了可能对区域大气质量存在潜在影响的芴、菲和萘等有毒有害大气污染物[21]。综上可见,植物所释放的VOCs是评价植物康养保健作用的重要因子之一,对其VOCs的排放清单进行研究不但可以为大气环境质量监测提供参考数据,而且对园林绿化树种配置及保健作用评估提供数据支持,具有十分重要的意义。
深山含笑Michelia maudiae、乐昌含笑Michelia chapensis、广玉兰Magnolia grandiflora及玉兰Magnolia denudata4种木兰科乔木树种,因其树形优美、枝繁叶茂、花大而美丽,是园林绿化中常用的景观树种,然而对其保健功能方面的相关研究不多。现有研究或采用固相微萃取法[5]、或采用蒸馏法[22-24]、或采用超临界萃取的方式[25],对这4种乔木树种的叶片或花的化合物成分进行了初步分析。然而,植物不同部位合成与释放的VOCs有所不同,且采样后进行离体研究与植物自然状态下释放的VOCs存在较大差异[26-28]。鉴于此,本研究采用动态顶空气体循环采集法[29]对乐昌含笑、广玉兰及玉兰4种木兰科常用景观树种的枝叶在活体状态下自然释放的VOCs成分进行测定分析,并评价其对环境的保健作用及可能存在的潜在风险,以期为未来保健型园林绿地树种的评价与配置提供理论依据及支持。
供试植株深山含笑、乐昌含笑、广玉兰及玉兰均为树龄15年以上的大树,散生种植于浙江省杭州市浙江省林科院苗圃试验地内(20°1.514′ E、30°13.033′ N),采用相同的管理措施。试验地海拔31 m,属亚热带季风气候,四季分明,雨量充沛,夏季高温多雨,冬季寒冷干燥。年平均温度15.0~17.7 ℃,年平均降水量1 100~1 600 mm,平均相对湿度70.3%,年日照时数1 765 h。土壤为红壤,肥力中等,排水良好。
1.2.1 VOCs采集方法 采样选择在晴朗无风的夏季上午(2016年8月1日)进行,用ZC-Q便携式双泵大气采样器(浙江恒达)进行样品采集。每个树种各选取1株生长健康、无病虫害的植株,每株分别选择树冠中部同一生长高度不同生长角度且长势茂盛、向阳的3个枝条,作为3个重复。用Reynolds微波炉袋采样袋(0.1 m3,Rennolds Metals Company,美国)将活体植株的枝条套住后,立即用大气采样器把袋内空气抽尽,形成瞬时真空;随后采用动态顶空气体循环采集法进行样品采集[29]。采样器流量0.1 m3/min,采气时间30 min。同时,设空白对照用于校正本底影响,即采样管不进行VOCs采集,其他处理相同。
1.2.2 挥发性有机物的测定 植物VOCs采用热脱附-气相色谱-质谱联用法(TDS-GCMS) 分析。各仪器工作条件如下。TDS:系统压力20 kPa;进样口温度250 ℃;脱附温度250 ℃(10 min);冷阱温度-100 ℃(3 min);冷阱进样时温度骤然升温至260 ℃;GC:色谱柱为HP-5MS(30 m×250 μm×0.25 μm);程序升温: 40 ℃(3 min)→6 ℃/min→112 ℃(3 min)→6 ℃/min→250 ℃→10 ℃/min→270 ℃(5min)。MS:EI源,电子能量为70 eV;质量范围29~400 m/z;接口温度280 ℃;离子源温度230℃;四级杆温度150 ℃。
利用Xcalibur1.2软件通过检索 NIST 2008谱库,根据色谱保留时间与匹配度确定4个树种枝叶挥发性物质的化学成分。挥发性成分确定之后,根据离子流峰面积归一化法,计算各成分的相对含量[29-30]。即:
相对含量=(某物质峰面积/样品中所有物质的峰面积总和)×100%。
参照美国国家环境保护局(US EPA)制定的《清洁空气法》(Clean air act section 112b)[31]中所列HAPs(Hazardous Air Pollutants)清单,对4个树种枝叶释放的VOCs进行筛选,建立其有毒有害VOCs排放名录。
利用Excel 2013及Origin 8.0软件进行数据分析及图形绘制。
深山含笑枝叶释放的VOCs种类最少(图1,表1),共20种。其中12种为萜烯类化合物,相对含量为75.50%,主要成分为长叶烯(45.93%)、α-蒎 烯(13.74%)、龙 脑(3.09%);2种 有 机酸的相对含量次之(13.69%),主要成分为乙酸(9.05%);其余类别化合物中,无论VOCs种类及相对含量均较低,包括烷烃类化合物(0.43%)、酮类化合物(0.54%)、醇类化合物(2.92%)、酯类化合物(1.12%)各1种,芳烃类化合物(5.80%)2种。
乐昌含笑枝叶中共检测出25种VOCs(图1,表1),以萜烯类化合物的种类最多(10种),相对含量(66.44%)最高,主要成分为长叶烯(40.99%)、长 叶 环 烯(8.26%)、α-长 叶 蒎烯(4.48%);酯类化合物种类(4种)及相对含量(9.38%)均居第二位;其余类别化合物中,无论VOCs种类及相对含量均较低,包括芳烃类化合物(6.67%)4种,其他类化合物(4.02%)及酮类化合物各2种(3.48%),烷烃类(1.07%)、醇类(6.81%)及有机酸类(2.12%)化合物各1种。
广玉兰枝叶中共检测出24种VOCs(图1,表1),以萜烯类化合物的种类(10种)最多,相对含量(60.81%)最高,主要成分为长叶烯(37.57%)、长叶环烯(6.13%)、α-长叶蒎烯(4.08%);2种醇类化合物相对含量(13.11%)次之,主要成分为2-乙基-1-己醇(11.47%);其余类别化合物中,无论VOCs种类及相对含量均较低,包括酯类化合物(5.96%)、烷烃类化合物(4.04%)及其他类化合物各3种,芳烃类化合物(3.78%)、酮类化合物(2.84%)及有机酸类化合物(2.71%)各1种。
玉兰枝叶释放的VOCs种类最为丰富(图1,表1),共40种。其中萜烯类化合物的种类(12种)及相对含量(32.25%)均最高,主要成分为长叶烯(14.78%);5种其他类化合物(17.35%)、12种芳烃类化合物(16.60%)、3种醇类化合物(16.90%)及4种酯类化合物(12.71%),尽管种类成分差异较大,然而相对含量比较接近,各类主要成分分别为N-甲基苯胺(10.63%)、α-甲基苯乙烯(3.12%)、2-乙基-1-己醇(14.18%)、丙烯酸-2-乙基己酯(8.44%);其余2种烷烃类化合物(0.97%)、1种酮类化合物(2.18%)及1种有机酸类化合物(1.04%)的相对含量均较低。
图1 4个木兰科树种释放VOCs的GC-MS总离子流Fig.1 Total ion chromatograms of VOCs of the four Magnoliaceae trees
4种木兰科乔木景观树种中共鉴定出56种VOCs(表1),分别为21种萜烯类化合物、5种烷烃类化合物、12种芳烃类化合物、酮类及醇类化合物各3种、4种酯类化合物、2种有机酸类化合物及6种其他类化合物,4个树种中均未检测到醛类化合物。由表1可见4种木兰科树种枝叶释放的VOCs均以萜烯类化合物为主,以深山含笑枝叶释放的萜烯类化合物相对含量最高(75.50%),其次为乐昌含笑(66.44%)及广玉兰(60.81%),玉兰枝叶释放的萜烯类化合物相对含量最低(32.25%)。4个树种共有的VOCs有5种,分别为长叶烯、长叶环烯、α-长叶蒎烯、可巴烯及2-乙基-1-己醇,其中前4种为萜烯类化合物。3个树种共有的VCOs有13种,其中马兜铃烯、石竹烯、α-甲基苯乙烯、异佛尔酮、2-羟丙基异丁烯酸酯、2-丁烯酸甲酯、丙烯酸-2-乙基己酯、苯胺、N-甲基苯胺为乐昌含笑、广玉兰及玉兰共有成分;龙脑、乙酸异龙脑酯为深山含笑、乐昌含笑及玉兰共有成分;乙酸为深山含笑、广玉兰、玉兰共有成分;(+)-环苜蓿烯为深山含笑、乐昌含笑、广玉兰共有成分。4个树种均含特有VOCs。其中玉兰的特有VOCs种类最多(14种),单个成分相对含量大于1%的有佛术烯(5.05%)、连四甲苯(1.13%)、1-乙基-2,4,5-三甲基苯(1.54%)、五甲基苯(2.33%)、二甲基苯胺(1.30%);深山含笑特有VOCs为9种,单个成分相对含量大于1%的有莰烯(1.21%)、乙苯(1.71%)、间二甲苯(4.09%);乐昌含笑及广玉兰均含2种特有VOCs,其累计相对含量较低,分别为2.10%及2.03%。
表1 4种木兰科树种释放的VOCs成分及相对含量Table 1 Constituents and relative contents of VOCs released from branches and leaves of the four Magnoliaceae trees
由表2及图2可知,对照HAPs清单,4个树种共释放8种HAPs,其中深山含笑释放2种,相对含量占其VOCs总量的5.80%;乐昌含笑释放5种HAPs,相对含量占其VOCs总量的7.93%;广玉兰释放3种HAPs,相对含量占其VOCs总量的6.73%;玉兰释放7种HAPs,相对含量占其VOCs总量的13.01%。
图2 4个木兰科树种释放的萜烯类化合物及有毒有害污染物种类与相对含量对比Fig. 2 The comparison of kinds and relative contents between terpenes and HAPs emitted by the four Magnoliaceae trees
表2 4个木兰科树种释放的有毒有害大气污染物名录Table 2 List of HAPS emitted by four Magnoliaceae trees
类别Type序号No.成分Constituent相对含量/ %Relative content深山含笑M. maudiae玉兰M. denudata烷烃类Alkanes乐昌含笑M. chapensis广玉兰M. grandiflora 22 Decane, 3,6-dimethyl- 3,6二甲基-癸烷 0.43 0.00 0.00 0.00 23 Dodecane 十二烷 0.00 0.00 1.44 0.00 24 Cyclohexane, propyl- 丙基环已烷 0.00 1.07 0.00 0.00 25 Tridecane 十三烷 0.00 0.00 1.53 0.33 26 Tetradecane 十四烷 0.00 0.00 1.07 0.64芳烃类Aromatics 27 Ethylbenzene 乙苯 1.71 0.00 0.00 0.00 28 m-Xylene 间二甲苯 4.09 0.00 0.00 0.63 29 α-Methylstyrene α-甲基苯乙烯 0.00 3.05 3.78 3.12 30 Benzene, 1,2,3,4-tetramethyl- 连四甲苯 0.00 0.00 0.00 1.13 31 Benzene, 1-methyl-4-(1-methylpropyl)-1-甲基-4-(1-甲基丙基)-苯 0.00 0.00 0.00 0.71 32 Naphthalene 萘 0.00 0.89 0.00 2.08 33 Benzene, 1-ethyl-2,4,5-trimethyl-1-乙基-2,4,5-三甲基苯 0.00 0.00 0.00 1.54 34 Benzene, 1,3-dimethyl-5-(1-methylethyl)-5-异丙基间二甲苯 0.00 0.00 0.00 0.42 35 1H-Indene, 2,3-dihydro-4,7-dimethyl-4,7-二甲基-2,3-二氢化茚 0.00 0.00 0.00 0.57 36 1H-Indene, 2,3-dihydro-1,2-dimethyl-1,2-二甲基-2,3-二氢化茚 0.00 0.00 0.00 0.44 37 Benzene, pentamethyl- 五甲基苯 0.00 0.00 0.00 2.33 38 Naphthalene, 1-methyl- 1-甲基萘 0.00 1.93 0.00 2.39 39 Naphthalene, 2-methyl- 2-甲基萘 0.00 0.80 0.00 1.24酮类Ketones 40 Acetophenone 苯乙酮 0.54 0.00 0.00 0.00 41 Isophorone 异佛尔酮 0.00 2.46 2.84 2.18 42 4-Hepten-3-one, 2,6-dimethyl-2,6-二甲基-4-庚烯-3-酮 0.00 1.02 0.00 0.00醇类Alcohols 43 1-Hexanol, 2-ethyl- 2-乙基-1-己醇 2.92 6.81 11.47 14.18 44 α,α-dimethyl-benzyl alcohol α,α-二甲基苄醇 0.00 0.00 1.64 2.24 45 1-Dodecanol,3,7,11-trimethyl-3,7,11-三甲基-1-十二醇 0.00 0.00 0.00 0.48酯类Esters 46 2-Propenoic acid, 2-methyl-, 2-hydroxypropyl ester 2-羟丙基异丁烯酸酯0.00 2.16 1.64 2.14 47 2-Butenoic acid, methyl ester 2-丁烯酸甲酯 0.00 1.19 0.82 1.23 48 2-Ethylhexyl acrylate丙烯酸-2-乙基己酯 0.00 4.80 3.49 8.44 49 Bornyl acetate 乙酸异龙脑酯 1.12 1.23 0.00 0.90有机酸类Organic acids 50 Acetic acid 乙酸 9.05 0.00 2.71 1.04 51 Benzoic acid 苯甲酸 4.64 2.12 0.00 0.00其他Others 52 Aniline 苯胺 0.00 1.85 1.90 2.72 53 Phenol 苯酚 0.00 0.00 1.99 1.78 54 Aniline, N-methyl- N-甲基苯胺 0.00 2.17 2.86 10.63 55 Benzenamine, N,N-dimethyl- 二甲基苯胺 0.00 0.00 0.00 1.30 56 Pyridine, 5-ethenyl-2-methyl-2-甲基-5-乙烯基吡啶 0.00 0.00 0.00 0.93
研究证明,萜烯类化合物具有很强的生理功效,并将其相对峰面积之和作为衡量植物保健作用的指标[32-33]。因此我们将各个树种释放的HAPs种类及相对含量与其释放的萜烯类化合物进行了对照分析,深山含笑枝叶释放的12种萜烯类化合物的相对含量为2种HAPs相对含量的13.02倍;乐昌含笑枝叶释放的10种萜烯类化合物的相对含量为5种HAPs相对含量的8.38倍;广玉兰枝叶释放的10种萜烯类化合物的相对含量为4种HAPs相对含量的9.04倍;玉兰枝叶释放的12种萜烯类化合物的相对含量为7种HAPs相对含量的2.48倍。
植物的花、叶等器官的油腺可以分泌出大量的被称为芬多精(pythoncidere)的挥发性有机物[28]。这些物质具有多种生理功效,不但能起到杀菌抑菌、净化环境的作用[18,34-36],还能对人体健康产生许多有益的影响[2-3,6,19,37]。其中起主要作用的是萜烯类化合物,大多数具有镇痛、抗炎性、抗风湿、抗肿瘤、降血压、镇静等作用[28,33]。如α-蒎烯不但具有抗菌、抗病毒、驱虫等功效[38-42],同时具有镇咳祛痰[43]、调节人体神经系统的作用[5];马兜铃烯和石竹烯具有抗炎作用[44-45],石竹烯还具有净化空气、镇痛镇静、保护神经、抗焦虑、抗抑郁、抗肿瘤的作用[45-48];龙脑能够降低心率和血压[49];长叶烯、长叶蒎烯、长叶环烯等倍半萜除具有芳香气味[50-51]外,长叶烯还具有抗菌、驱虫作用[38,52],长叶蒎烯则具有抗炎解毒、抑制乙型肝炎的作用[53];可巴烯具有抑菌驱虫[54]的作用。现代科学家通过水蒸气蒸馏法、冷压榨法或溶剂萃取法等将这些物质从植物器官大量地提取出来即得到植物油(挥发油)[55-56]。然而这些经过提炼的挥发油在植物自然状态下不一定释放[5,28],因此将植物的器官和组织在自然状态下释放出的挥发性有机物称为植物精气[28]。本研究通过动态顶空气体循环采集法对深山含笑、乐昌含笑、广玉兰及玉兰4个木兰科植物活体植株的枝叶进行VOCs的采集与测定,最大程度还原了植株自然状态下VOCs的释放情况。
研究结果表明,尽管深山含笑枝叶释放的VOCs种类最少(20种),但其枝叶释放的萜烯类化合物相对含量最高(75.50%),主要包括α-蒎烯、龙脑、α-长叶蒎烯、长叶环烯、长叶烯、可巴烯,还包括莰烯、α-柏木烯等5种含量低但特有的萜烯类化合物。这与已报道的关于深山含笑的挥发油研究在成分和含量上均有不同。孙延军等[5]用固相微萃取的方法,从深山含笑的叶片中检测出24种VOCs,其中单个物质含量大于5%的所有萜烯类含量就高达94.08%,包括柠檬烯、莰烯、α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、β-石竹烯等。操璟璟等[22]及刘超祥等[57]用蒸馏法从深山含笑的叶片水提物分别鉴定出37及34种化合物,其萜烯类相对含量分别为77.75%及97.57%。尽管几个研究中由于研究方法、采样部位及植株年龄等的差异导致研究结果有所不同,但均表明,深山含笑可释放(或含有)大量的对人体有益的萜烯类物质,不仅可以清新空气[46,50-51],对环境起到抗菌、驱虫作用[38,52],还具有抗肿瘤、调节人体的神经系统、呼吸系统、心血管系统的作用[5,22,45,47-49]。对深山含笑HAPs分析结果表明,该树种仅释放2种HAPs,相对含量仅占总VOCs的5.80%,萜烯类化合物的相对含量是其13.02倍,因此综合来看,作为国家珍稀优良二级景观绿化树种的深山含笑也具有十分重要的保健功能,是兼具景观与保健功能的优良绿化树种。
乐昌含笑枝叶中共检测出25种VOCs,萜烯类化合物的相对含量(66.44%)仅次于深山含笑,主要包括α-蒎烯、龙脑、α-长叶蒎烯、长叶环烯、马兜铃烯、长叶烯、可巴烯、石竹烯、异长叶烯等,无特有萜烯类化合物。孙延军等[5]用固相微萃取的方法、刘群[23]用蒸馏法,分别从乐昌含笑的叶片中检测出28种和23种化合物,其中萜烯类化合物的相对含量分别为49.47%和15.55%,均低于本研究结果,主要包括β-石竹烯、莪术烯、β-榄香烯、顺式-β-金合欢烯和马兜铃烯、β-丁香烯、β-榄香烯等;同时刘群等的研究发现乐昌含笑叶提取物具有很高的抗肿瘤活性[23]。可见各研究结果间存在较大差异。但仅从本研究结果来看,乐昌含笑同深山含笑具有同样的改善环境及人体保健作用。尽管乐昌含笑释放5种HAPs,但相对含量仅占其VOCs总量的7.93%,萜烯类化合物的相对含量是其8.38倍,故乐昌含笑也是一个兼具景观与保健作用的观赏绿化树种。
广玉兰枝叶中共检测出24种VOCs,萜烯类化合物的相对含量为60.81%,主要包括α-长叶蒎烯、(+)-环苜蓿烯、长叶环烯、马兜铃烯、长叶烯、可巴烯、石竹烯、异长叶烯,结合各萜烯类化合物的作用分析,该树种具有清新空气、抗菌驱虫及调节人体神经系统的作用[46,50-51],这与张树祥[58]等对广玉兰叶片药用研究的结论相一致。刘艳清等用超临界萃取的方式对干燥广玉兰叶片的挥发油成分进行研究,共鉴定出28种化合物,其中萜烯类化合物的相对含量为55.22%,主要包括β-榄香烯、大根香叶D、大根香叶烯B、β-丁香烯[25],与本研究在化合物组成上有所不同,但同样含有较高含量的萜烯类化合物。HAPs分析结果表明广玉兰释放3种HAPs,相对含量占其VOCs总量的6.73%;萜烯类化合物的相对含量是其9.04倍,可见广玉兰也是营建保健型景观园林的优良绿化树种之一。
尽管玉兰枝叶释放的VOCs种类在4个树种中最为丰富(40种),但其萜烯类化合物的相对含量(32.25%)却最低,主要成分为α-长叶蒎烯、长叶环烯、佛术烯、长叶烯、可巴烯、石竹烯、龙脑等,其中佛术烯为玉兰特有。李军集等[24]用蒸馏法分别提取了玉兰的干叶及鲜叶挥发油,分别鉴定出48及40种化合物,但其主要成分均为香樟醇,单个物质相对含量在60%以上,与本研究明显不同,但也鉴定出可巴烯、石竹烯、龙脑等本研究中出现的化合物。尽管玉兰也释放出一定含量的净化环境及人体保健作用的萜烯类化合物,但同时也检测出7种HAPs,相对含量占其VOCs总量的13.01%,萜烯类化合物的相对含量仅为其2.48倍,可能对区域环境空气质量带来一定的风险影响。因此,在园林绿化营建中,特别是公园、城市道路等人口密集活动的区域,不建议配置玉兰,而是寻找具有相同景观效果的替代树种。
由上述分析可见,深山含笑、乐昌含笑、广玉兰释放的VOCs均有净化空气、抗炎解毒、调节人体神经系统的作用,深山含笑及乐昌含笑释放的VOCs还有益于心血管系统功能,且这3个树种的HAPs含量均较低,对大气质量不具有潜在风险或风险极低,是兼具景观与保健作用的优良观赏绿化树种,建议作为保健型景观园林树种应用。而玉兰释放的VOCs尽管也具有一定的保健作用,但HAPs含量相对较高,对区域环境空气质量存在潜在风险影响,不建议在人口密集活动区域作为绿化树种配置。此外,本研究还发现两个含笑属(深山含笑、乐昌含笑)排放的VOCs与两个木兰属(广玉兰、玉兰)排放的VOCs在属水平上没有明显差异,4个树种共有的VOCs仅有5种,3个树种共有的VCOs有13种,除此之外,仅深山含笑与乐昌含笑共有的物质只有1种,仅广玉兰与玉兰共有的物质有5种,说明4个树种VOCs排放在属水平没有明显的规律,在保健型园林绿地树种的筛选研究中暂不能以树种之间的科属关系作为参照对VOCs 排放进行风险评估。