GADA、IA-2A、ZnT8A联合IGRPA检测在1型糖尿病诊断中应用研究

吕宏培

大庆龙南医院（齐齐哈尔医学院第五附属医院）检验科，黑龙江大庆 163453

糖尿病在临床的发病率较高，且近年因人们的生活结构与饮食习惯的不断转变，促使该病的发生率呈逐年上涨趋势[1-2]。1型糖尿病（type 1 diabetes,T1DM）为糖尿病的常见类型，T1DM是因胰岛素的合成与分泌减少所致[3-4]。T1DM是由于自身免疫介导的β细胞破坏，T1DM体内在出现相关症状前，存在多种自身抗体，如谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、蛋白质酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）、锌转运体8抗体（ZnT8A）联合胰岛特异的葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基相关蛋白抗体（IGRPA）[5-6]。但临床关于四者联合检测T1DM的研究报道较为罕见。基于此，本研究选取2019年6月—2021年6月大庆龙南医院收治的43例T1DM患者、以及同期于本院行正常体检的48名健康体检者为研究对象，分析四种抗体联合检测T1DM的效果。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院收治的43例T1DM患者纳为T1DM组，同期于本院行正常体检的48名健康体检者为健康对照组。健康对照组男25名，女23名；年龄52～76岁，平均（62.89±2.07）岁。T1DM组男27例，女16例；年龄53～77岁，平均（62.86±2.13）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会批准（伦理审批号K201904）。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：T1DM经实验室相关检查证实；健康对照组体检者均无重大疾病；所有研究对象纳入均遵循自愿原则，依从性较高，且签署知情同意书。排除标准：存在精神疾患者；存有恶性肿瘤者；合并凝血功能异常者；存在酒精、药物依赖史者；合并严重的脑器质性疾病者；存在免疫系统病症者。

1.3 方法

标本采集：采集两组清晨空腹5 mL静脉血于无菌容器内，以3 000 r/min的速率，离心10 min，获取血清后留存待检。检测方法：采用自动酶标洗板机（深圳中科优瑞医疗科技有限公司，型号：UR-670，批准文号：粤食药监械(准)字2012第2400986号）与自动化酶免分析仪（HAMILTON公司，型号：194000，批准文号：20182402018）测定GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA；首先分别以碳酸盐缓冲液溶解GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA抗原，包被酶联板，于4℃环境下过夜；次日以1%牛血清白蛋白室温封闭6 h，干燥备用；将待测血清稀释20倍后，于37℃环境下孵育30 min后洗版5次，加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgG，37℃孵育20 min，洗版5次，加入显色剂A、B后37℃避光孵育10 min，读取450 nm处吸光度（A）值，cutoff值为0.2，如若测定值在0.2之上则为阳性，反之为阴性。

1.4 观察指标

①两组谷氨酸脱羧酶抗体（glutamic acid decarboxylase antibody,GADA）、蛋白质酪氨酸磷酸酶抗体（protein tyrosine phosphatase antibody,IA-2A）、锌转运体8抗体（zinc transporter 8 antibody,ZnT8A）与胰岛特异的葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基相关蛋白抗体（islet-specific glucose-6-phosphatase catalytic subunit-related protein autoantibody,IGRPA）检测结果。②绘制受试者相关曲线（receiver operating characteristic curve,ROC），分析GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA单独及联合检测T1DM的诊断效能。

1.5 统计方法

采用SPSS 20.0统计学软件处理数据，符合正态分布的计量资料用（±s）表示，进行t检验；计数资料用[n(%)]表示，进行χ2检验；绘制ROC，以曲线下面积（AUC）评估，AUC≤0.5表明无诊断价值；0.5＜AUC≤0.7表明诊断价值较低；0.7＜AUC≤0.9表明诊断价值中等；AUC＞0.9则表明诊断价值较高；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA检测阳性结果比较

T1DM组的GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA阳性率均高于健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA检测阳性结果对比［n（%）］

2.2 GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA单独及联合检测T1DM的诊断效能比较

ROC曲线显示：四种抗体联合检测的AUC为0.900（95%CI：0.828～0.972），高于四种抗体单独检测。见表2、图1。

图1 GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA单独以及联合检测T1DM的ROC图

表2 GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA单独以及联合检测T1DM的诊断效能

3 讨论

糖尿病在临床的患病率处于较高水平，且近年受人们饮食习惯、生活结构等因素的影响，促使该病的患病率逐年上涨，进而促使T1DM的患病率亦随之上涨[7]。因T1DM患者早期无明显特异性症状，从而造成临床的早期诊断率较低[8-9]。相关研究表明，T1DM患者出现临床症状前的免疫破坏时期，其血清内多出现多种抗胰岛细胞自身抗体[10]。通过对此种抗体进行早期的检测，能够有效检出T1DM，从而可指导临床施行针对性的治疗，及时控制患者病情，延长其生存周期。

GADA是破坏胰岛细胞，引起T1DM的关键抗原，其在T1DM早期出现，持续时间最长，属最具特异性的自身抗体[11-12]。IA-2A表达于正常人脑、垂体、胰腺与脑力组织，其主要在脑以及胰岛组织内表达[13-14]。IA-2A广泛存在于55%～75%T1DM新发患者，为胰岛素依赖性T1DM相关自身抗体检测的主要靶标之一[15]。ZnT8A对胰岛β细胞存在高度的特异性，其可能是T1DM得到一种重要标志物，为现阶段所用诊断试剂的重要补充[16-17]。IGRPA是表达于胰岛β细胞之中得到胰岛特异蛋白质，其较少表达于α细胞。本研究结果显示，T1DM组的GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA阳性 率[65.12%（28/43）、46.51%（20/43）、79.07%（34/43）、76.74%（33/42）]均高于健康对照组（P＜0.05）。董倩等[18]研究显示，1型糖尿病组的GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA阳性检出率[53.33%（24/45/）、28.89%（13/45/）、71.11%（32/45）、77.78%（35/45）]均高于正常对照组，与本研究结果类似。由此充分的提示，在T1DM患者机体内，上述四种抗体均呈现出过高的阳性表达。本研究ROC曲线显示：四种抗体联合检测的AUC为0.900（95%CI：0.828～0.972），显著高于四种抗体单独检测，由此表明，四种抗体联合检测可更精准的检出T1DM，从而能够更精准地指导临床施行个体化治疗，以此在早期及时的对患者治疗，最大程度地确保患者的身心健康。

综上所述，GADA、IA-2A、ZnT8A与IGRPA四种抗体在T1DM患者机体内呈现出过高的阳性表达，四种抗体联合可明显提高检出精准率。