萘丁美酮凝胶中透皮促进剂配方研究

曾明辉，彭颖，邱建平，黄娟，李旭

(邛崃市医疗中心医院药学部，四川 成都 611530)

萘丁美酮(nabumetone，NBT)又称萘普酮，是由英国Beecham公司开发的一种非酸性、非离子型长效抗炎镇痛药，临床上用于治疗急、慢性炎性关节炎、强直性脊椎炎及肌肉损伤等疾病，口服易出现胃肠道、恶心、呕吐、消化不良、头痛、头晕、耳鸣、皮疹及瘙痒等不良反应，不良反应的发生率约为7.5%[1-2]。与口服给药比较，经皮给药制剂可避免胃肠道反应，并能在较长时间内维持恒定的释药速率和稳定持久的血药浓度[3]。因此，研发NBT经皮给药制剂具有重要意义。凝胶剂是应用于皮肤和粘膜的常用剂型之一，可提高制剂的组织相溶性和生物利用度，降低对皮肤的刺激性[4]。卡波姆是以季戊四醇等与丙烯酸交联得到的丙烯酸交联树脂，是一类非常重要的流变调节剂，也是目前制剂制备中常用的高分子材料，具水溶性基质的特点，无油腻性，对皮肤无刺激性，与皮肤耦合性好，为一种优良的凝胶基质，广泛应用于乳液、膏霜、凝胶中，常用浓度为0.1%～2%[5]。由于药物本身的性质及皮肤结构的限制，外用制剂在皮肤局部使用时，透过皮肤的量是非常有限的，为增加药物的透皮渗透量，常需在其基质中添加一定量的经皮渗透促进剂。氮酮是最常用的一类透皮渗透促进剂[6]。有研究证明，川芎挥发油可增加皮肤血流，具有促渗作用。本课题选用卡波姆为凝胶基质，以适量的氮酮和川芎挥发油为复合透皮促进剂，研究NBT凝胶剂中氮酮和川芎挥发油联用时的最佳配方。

1 材料与方法

1.1 一般材料

1.1.1 主要仪器 JY1003型电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；HJ-6A型恒温磁力搅拌器(常州市江南实验仪器厂)；TGL-16M型高速冷冻离心机(山东博科科学仪器有限公司)；JD-4B型离体器官恒温装置(上海继德教学实验器械厂)；UPST-11-10T型优普超纯水机(四川优普超纯科技有限公司)；DHG-9053A型电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；Waters2690型高效液相分析仪、Waters996型紫外检测器(美国Waters公司)。

1.1.2 试剂 NBT对照品(中国生物制品检定研究，批号：101003-200801，纯度100.0%)；NBT原料药(上海抚生实业有限公司，批号：A22588-25G，纯度98%)；卡波姆(湖北兴银河化工有限公司，批号：20171102)川芎挥发油(吉安市青原东方天然香料油提炼厂，批号：20171101，含川芎蒿本内酯50.36%)；氮酮(湖北科捷制药有限公司，批号：170802)；丙二醇(江西易普生药业有限公司，批号：20180604)；薇婷脱毛膏(中国利洁时家化有限公司，批号：20171257)；甲醇(HPLC/Spectro，批号：2017021301)；冰醋酸(AR，成都长联化工试剂有限公司，批号：20180726)；四氢呋喃(AR，成都科隆化学品有限公司，批号：2018020201)；氢氧化钠(AR，成都市科龙化工试剂厂，批号：20180401)；磷酸二氢钾(AR，成都市科隆化学品有限公司，批号：2017012101)；乙腈(HPLC/Spectro，批号：2018010508)。

1.1.3 实验动物 SPF级KM种雄性小鼠，体重18～22 g。由四川省医学科学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证为SCXK(川)2018-19，实验动物环境使用许可证号SYXK(川)2018-100。

1.2 方法

1.2.1 NBT凝胶剂的制备 NBT凝胶剂处方组成为：2.0%NBT、1.0%卡波姆、15%丙二醇以及适量的氮酮、川芎挥发油和纯净水。所有实验用样品均由邛崃市医疗中心医院，按照凝胶剂的制备方法配制而得[5]。见表1。

表1 样品分组及氮酮和川芎挥发油含量(%)

1.2.2 NBT含量测定 色谱条件[7]：色谱柱为DiamonsilC18(4.6×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈-四氢呋喃-0.1%冰醋酸(38∶8∶54)；流速为1.0 mL/min；柱温为30 ℃；检测波长为254 nm；进样量为20 μL。(1)标准曲线的制备：取NBT 对照品适量，精密称定，用甲醇定容于100 mL容量瓶中，摇匀即得NBT 对照品储备液。精密吸取储备液适量，用流动相配制成质量浓度分别为1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 和50.0 μg/mL的NBT系列工作溶液。分别取上述工作液20 μL，按上述色谱条件测定NBT峰面积，结果NBT浓度在1.0～50.0 μg/mL范围内，质量浓度(X)与峰面积(Y)线性关系良好，其回归方程为Y=8 799.8X-3 264.2，r2=0.999 8。(2)回收率和精密度实验：分别取NBT对照品储备液适量，加适量NBT空白凝胶剂，加入甲醇搅拌并定容，即得3种不同浓度的NBT凝胶剂实验样品，按上述色谱条件，分别进样3次。NBT样品溶液的批内精密度<0.84%，批间精密度<1.92%，回收率为96.7%～103.1%。见图1及表2。

表2 精密度与回收率结果(n=3)

1.2.3 NBT经离体鼠皮渗透特性实验 (1)实验用鼠皮的制备：用脱毛膏脱去小鼠腹部被毛，24 h后脱颈处死，剥取皮肤，剔除皮下组织和脂肪，选择无肉眼可见损伤的皮肤，用生理盐水漂洗并浸泡，置4 ℃冰箱保存，24 h内使用。(2)NBT渗透特性测定：取Franz皮肤渗透实验池[8]，上下两室固定，将实验用鼠皮固定在给药室与接收室之间，其真皮层面向接收室，角质层面向给药室，鼠皮的有效扩散面积为4.5 cm2。将含30%甲醇的磷酸缓冲液(pH6.5)注入接收室内，排除气泡，使液面恰与鼠皮接触。开动磁力搅拌器，持续搅拌(400 rpm)，37 ℃恒温。分别取样品，均匀涂于鼠皮上。于给药1、3、6、9和12 h抽取接收液[9]，立即补充等体积接收液。分别将抽取的接收液真空冷冻干燥，用流动相溶解残留物，定容置5 mL容量瓶中，溶液用0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液按1.2.2项下方法测定NBT浓度。按以下公式分别计算Q值、J值及Kp值[9-10]。

以上公式中，A=4.5 cm2，V=20 mL。Q：累积渗透量，dQ/dt：稳态时的斜率，J：稳态流量，单位时间通过单位面积的药量，Kp：渗透系数。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 氮酮和川芎挥发油浓度对NBT累积渗透量的影响

各组样品中NBT的渗透量，随着时间的推移均逐渐增加。在12 h内，含氮酮、川芎挥发油样品组NBT的渗透量比不含氮酮、川芎挥发油的对照样品组增加>1倍，且以样品3(含2%氮酮+1%川芎油挥发油)的NBT的累积渗透量最大，为709.51 μg/cm2。见表3。

表3 样品中NBT经离体鼠皮的累积渗透量

2.2 氮酮、川芎挥发油浓度对NBT透皮渗透参数的影响

实验各样品中NBT经离体鼠皮的渗透量Q与时间t相关性较好，符合Higuchi方程，NBT经离体鼠皮渗透均符合零级动力学过程。在12 h内，含氮酮、川芎挥发油的样品组的NBT的J值和Kp值与不含氮酮、川芎挥发油的对照样品组比较，均显著增大，且样品3(含2%氮酮+1%川芎挥发油)的J值及Kp值最大，分别为1 118.12 μg·cm-2·h-1和2.282 μg·cm-4·h-1。见表4。

表4 样品中NBT经离体鼠皮的透皮吸收参数

2.3 样品经离体鼠皮累积渗透量的极差分析

以12 h内NBT经离体鼠皮的累积渗透量计算其K1、K2值，K值大的配方比例为最佳配方比例，极差分析结果显示，氮酮、川芎挥发油的K1值分别为1 165.99和1 310.84，K2值分别为1 233.45和1 088.60，R值分别为230.83和249.09。可见氮酮的K2值>K1值，川芎挥发油的K1值>K2值，即在NBT凝胶中氮酮、川芎挥发油的最佳配方比例为2%氮酮+1%川芎挥发油。见表5。

表5 样品经离体鼠皮累积渗透量的极差分析

2.4 样品经离体鼠皮累积渗透量的方差分析

NBT在12 h内经离体鼠皮累积渗透量的方差分析显示，氮酮和川芎挥发油F值分别为7.224(P<0.05)和9.412(P<0.05)，氮酮和川芎挥发油按一定比列联合使用时F值为11.628(P<0.05)。在以卡波姆为基质的NBT凝胶剂中，氮酮和川芎挥发油均具有促进NBT透皮渗透的作用，且氮酮与川芎挥发油联合使用对NBT透皮渗透亦有协同增效的作用。见表6。

表6 样品经离体鼠皮的累积渗透量方差分析

3 讨论

在经皮给药制剂中，药物经皮渗透达到作用部位是药物发挥治疗作用的前提。大部分药物由于药物本身理化性质的限制，不易透过人体皮肤到达治疗部位。同时人体皮肤，特别是皮肤角质层在阻止有害物质的侵入时，也使得药物难以透过人体皮肤达到治疗要求。在药剂学中，除可通过改变药物剂型、制剂工艺等方法来增加药物的经皮渗透量外，在制剂组方时，添加适宜的透皮渗透促进剂也是增加药物经皮渗透量的常用方法[11-12]。有报道[13-16]认为，某些药物可增加皮肤组织的血流，提高药物在皮肤组织中的消除速率，在皮肤组织中形成漏槽效应，从而实现促进药物渗透作用。张立超等[17]报道，川芎挥发油能显著增强氟比洛芬的透皮吸收，但透皮流量的增加未呈浓度-效应依赖性，常用量为1%～3%。

目前，常用的经皮渗透促进剂有二甲基亚砜、油酸和氮酮等药物，由于氮酮与川芎挥发油的透皮促渗机制存在差异，若两者联用，可呈现协同增效作用。有文献[18]报道，分别在皮肤角质层滴加含30 g/L的氮酮、100 g/L川芎挥发油以及30 g/L的氮酮和100 g/L川芎挥发油的混合物，观察氮酮和川芎挥发油对丹皮酚饱和水溶液体外透皮的影响，结果氮酮或川芎挥发油单用时均对丹皮酚的经皮渗透有促进作用，而两者联用时能进一步促进丹皮酚的经皮渗透。

本实验采用2×2析因设计法[19]，分别以1%氮酮和2%氮酮与1%川芎挥发油和3%川芎挥发油为研究水平，探讨氮酮和川芎挥发油联用时，对以卡波姆为凝胶基质的NBT凝胶剂中NBT透皮渗透作用的影响；同时通过对氮酮和川芎挥发油在NBT凝胶剂中交互作用的分析，优选两者的最佳配方比例。实验结果显示以卡波姆为凝胶基质时，在实验浓度范围内氮酮对NBT透皮渗透有显著的促进作用，川芎挥发油同样亦有显著的促进作用，且氮酮与川芎挥发油之间存在显著的协同交互作用。综合考虑累积渗透量、稳态流量及渗透系数，在NBT凝胶剂中透皮促进剂的配方以2%氮酮+1%川芎挥发油为最优。

本研究显示，以卡波姆为凝胶基质，氮酮与川芎挥发油作为透皮促进剂联用时，与空白样品比较，对萘丁美酮透皮特性具有协同增效作用。川芎挥发油不仅具有活血行气、祛风止痛的药理作用，而且其以一定浓度外用时，也具有较明显的经皮渗透促进作用，该作用与有关文献报道[14,17-18,20]相吻合。NBT渗透特性测定时，于给药1、3、6、9 和12 h抽取接收液的确定是基于NBT凝胶剂每日两次的用药方法，并参照文献报道[9]的结果。在本实验建立的高效液相色谱条件下，NBT的检测限为0.03 μg/mL、定量限为0.12 μg/mL。

综上，以高效液相色谱法测定NBT凝胶剂中NBT在12 h内的累积渗透量，并计算其稳态流量和渗透系数，实验方法稳定、可靠、易行。