T淋巴细胞亚群及NLR、EOS在慢性阻塞性肺疾病急性加重患者中的临床意义

刘 宁，余玲玲，刘 冬，辛雯艳，何小双，李皖豫，李明磊，许西琳

(1.石河子大学医学院，新疆 石河子 832000；2.石河子大学第一附属医院呼吸内科，新疆 石河子 832000)

慢性阻塞性肺病(COPD)简称慢阻肺，是一种常见的呼吸道慢性疾病，在我国有较高水平的患病率和死亡率，常常合并多种全身性疾病[1]，带来了巨大的经济和社会负担[2]。慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)是绝大多数慢阻肺患者死亡的独立危险因素，其防治水平直接影响患者的生存，因此早期监测AECOPD的炎性指标十分重要。慢阻肺的发生发展与慢性炎性机制相关，主要影响肺实质、肺血管及外周气道，导致在很大程度上发生不可逆性和进行性气流受限，最终引起肺功能呈进行性下降。全身性慢性炎性反应强烈影响着慢阻肺患者的生活质量，增加了死亡率，导致慢阻肺患者的体重减轻、肌肉消瘦和组织耗竭[3]。这一过程涉及多种炎性细胞的参与及炎性介质的激活。本研究探讨AECOPD患者外周血T淋巴细胞亚群表达水平的变化，为临床免疫治疗提供参考。中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)是一个新兴的、可反映全身炎性反应的指标，它快速、易获得且经济适用，已成为预测某些慢性疾病加重期、活动期及不良事件的标志物[4]。外周血嗜酸性粒细胞(EOS)可用来预测慢阻肺急性加重风险和评价吸入皮质类固醇的治疗反应性[5]。本研究通过分析AECOPD患者淋巴细胞亚群及NLR、EOS水平，进而探讨T淋巴细胞监测及NLR、EOS在AECOPD患者临床诊疗中的应用价值。

1 资料与方法

1.1研究对象：根据《慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)诊治中国专家共识》的诊断标准[6]筛选AECOPD患者，选取2020年10月～2021年5月石河子大学第一附属医院收治且明确诊断为AECOPD的患者41例为研究对象，其中男27例，女14例，平均(75±1.56)岁。在标本采集之前，详细了解入选人群相关疾病资料，排除患有免疫功能性疾病(艾滋病、血液系统疾病、肿瘤)和原发慢性疾病(高血压、糖尿病)，以及长期服用激素、免疫抑制剂等人群。另选取同期本院体检中心38例健康体检者为对照组，其中男19例，女19例，平均(73.92±1.00)岁。两组年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经过本院医学伦理委员会同意。

1.2方法：用带有EDTA抗凝管收集AECOPD患者入院第1天外周血及经抗感染、止咳祛痰等常规治疗进入稳定期后出院前1 d外周血，并放入全血流式细胞仪分析。采用流式细胞方法，仪器为BD FACSLyric流式细胞仪，试剂为BD MultitestTM IMK试剂盒。 收集对照组体检当日和AECOPD组入院第1天及经过常规抗感染、解痉祛痰7～9 d的血液标本，标本为清晨空腹外周血2 ml，注入EDTA抗凝管，实验过程中严格按照试剂说明书操作和判读结果。

2 结果

2.1研究组治疗前后及与对照组T淋巴细胞亚群比较：研究组治疗前CD3+总T细胞百分比、CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+T细胞比值明显低于治疗后，差异有统计学意义(P<0.05)；研究组治疗前CD3+T细胞百分比、CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+T细胞比值明显低于对照组，CD8+T细胞百分比明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 研究组治疗前、后及与对照组T淋巴细胞亚群比较

2.2研究组治疗前后及与对照组NLR、EOS、PCT比较：研究组治疗前NLR、EOS显著高于对照组，NLR、EOS及PCT明显高于研究组治疗后，研究组治疗后NLR明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 研究组治疗前、后及与对照组NLR、EOS、PCT比较

3 讨论

近年来，随着人们对慢阻肺研究的深入，虽然在该疾病诊断及治疗上取得了很大进展，但关于COPD发生发展仍有许多潜在机制，特征尚未被确定。众所周知，慢性炎性是慢阻肺的主要发病机制之一，炎性反应是由多种炎性细胞参与，比如肺巨噬细胞、中性粒细胞、T淋巴细胞等，当然也涉及上皮细胞、成纤维细胞及内皮细胞等；这些细胞通过分泌多种促炎介质来进一步介导炎性反应的发生。炎性反应是许多细胞和不同分子复杂连接的结果，慢阻肺的慢性炎性反应不仅涉及气道炎性反应，更是全身性炎性反应。T淋巴细胞在机体免疫反应中发挥重要作用，是机体调控细胞免疫的主要细胞，环境中的炎性水平极大地影响了 T 淋巴细胞亚群的分化和活性[7]，而CD3+总T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞以及CD4+T细胞与CD8+T细胞比值可在一定程度上可反映机体的免疫功能，其中CD3+代表总的成熟T淋巴细胞水平，可与T细胞受体(TCR)结合从而传递抗原信号；CD4+T细胞主要通过释放多种细胞因子从而增强免疫反应，发挥着针对病原微生物的保护性宿主免疫反应[8]，确保能有效消灭病原体，另一方面又能在微环境中多种细胞因子的作用下防止CD4+T细胞产生过度的自我损伤；而CD8+T细胞主要针对受感染的细胞，即通过杀伤靶细胞来抑制机体免疫功能，进一步维持免疫稳态；CD4+与CD8+比值在一定程度上反映细胞免疫状态[9]，较高的 CD4+/CD8+比值表明 T淋巴细胞免疫反应性更强[10]。

有研究在AECOPD患者的外周血中发现CD4+/CD8+比值降低，而在稳定期COPD中比值增加[11]，并且与白细胞介素(IL)-13、IL-17、IL-6、IL-2、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达呈正相关[12]。有学者在探究COPD患者循环T淋巴细胞亚群与CAT关系时发现，CAT评分越高(>20)COPD患者CD4+/CD8+比值越不平衡，特别是在CAT评分>30组中越明显，由此表明COPD患者中不只有CD4+T细胞参与了免疫反应，CD8+T细胞也参与了慢阻肺发生发展的免疫机制[13]。Urboniene等人[14]的研究表明，对比不吸烟或已戒烟的COPD患者，吸烟组的COPD患者气道中的 CD8+T细胞数量显著增加，提示吸烟可能激活了COPD患者T淋巴细胞免疫。在吸烟的COPD患者支气管活检中发现，无论是否存在气流阻塞，CD4+T细胞均减少。Roos-Engstrand等人[15]亦在COPD患者的支气管肺泡灌洗液(BALF)中进一步证实存在CD4+T细胞与CD8+T细胞比值失衡，且CD4+T细胞所占淋巴细胞百分比明显降低，而CD8+T细胞所占淋巴细胞百分比显著增加。在本次研究中发现：研究组治疗前循环T淋巴细胞亚群中CD4+T细胞所占比例降低，CD8+T细胞所占比例增大，CD4+/CD8+T细胞比值降低。提示CD4+T细胞与CD8+T细胞均参与了慢阻肺的慢性炎性机制。然而有关CD4+T细胞与CD8+T细胞在慢阻肺发生发展的机制，目前尚无明确定论，可能的猜测有：①T淋巴细胞参与了COPD患者内皮细胞形态变化和血管重塑[16]；②CD8+T细胞通过分泌或释放细胞毒性蛋白(穿孔素、颗粒酶等)裂解靶细胞，或通过Fas配体-Fas途径诱导细胞凋亡[17]，来进一步破坏肺实质。

NLR是一种临床上简单易获取的标记物，可从血常规计数中得出。近年来，NLR越来越多的用于识别慢阻肺急性加重炎性的严重程度，能够帮助临床医生更好地评估患者炎性状态，并且与CRP、ESR等相比较，NLR更快速，更适用于急诊判断病情。有研究表明在慢阻肺急性加重期NLR值显著高于稳定期，且与血清CRP水平及红细胞分布宽度(RDW)呈正相关[18]，且识别慢阻肺急性加重的最佳截点是3.29，其敏感性及特异性分别为80.8%及77.7%[19]。本研究中也发现在慢阻肺急性加重患者中NLR比值显著增高，并且差异有统计学意义(P<0.05)，这与先前的研究结果一致。

外周血嗜酸性粒细胞简称EOS，是气道中嗜酸性粒细胞浓度的可靠标志物[20]，但比气道样本更容易获得，被广泛应用于临床工作中，可通过释放炎性因子来促进炎性反应[21]，破坏气道上皮屏障、诱导气道上皮细胞凋亡，其嗜酸性过氧化物酶也可引起组织损伤，可作为慢阻肺患者预后的潜在标志物。越来越多的证据表明EOS可作为反映COPD患者对ICS治疗受益及风险的标记物[22-23]。有人通过十项试验中10 861名COPD患者的嗜酸性粒细胞计数得出，当嗜酸性粒细胞阈值为2%时，血嗜酸性粒细胞计数越低发生肺炎风险越大，对吸入性皮质类固醇的反应性越差[24]。

综上所述，AECOPD患者外周血T淋巴细胞亚群存在失衡，调节慢阻肺患者的免疫功能可能有助于延缓或控制病情，为慢阻肺的免疫治疗提供新的靶点和方向。