不同HIV检测试剂盒检测HIV感染的检测效能评价*

刘明丽，周静江

河北省承德市中心血站，河北承德 067000

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一种传染病，HIV主要通过性接触、输血等途径传播，可导致全身免疫系统破坏，降低机体免疫能力，诱发感染，也可累及消化、泌尿、呼吸及神经系统，早期诊断、及时治疗是防治艾滋病的重要手段[1-2]。近年来HIV检测技术不断发展，其准确性也不断提升。当前临床常用的HIV检测试剂主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白印记杂交、反转录聚合酶链反应等[3-4]。ELISA是用于HIV初筛最经济、方便的方法，在临床应用非常广泛，但临床数据显示，不同技术产次、不同厂家的试剂盒检验效果存在一定差异，寻找最有效的抗体检验试剂盒对于临床诊治工作的开展非常关键。本研究以常用的3种HIV检测试剂盒作为研究材料，对河北省承德市中心血站收集的血液标本进行HIV试剂盒检测，分析3种试剂盒的检验效能及其检测时间差异。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年3月至2020年7月送至河北省承德市中心血站的12 856份血液标本作为研究对象，所有血液标本的分离、保存均按照实验室规范进行操作。本研究经河北省承德市中心血站伦理委员会批准通过。

1.2仪器与试剂 瑞士全自动加样仪HAMILTON STAR-8CH，瑞士全自动酶免分析仪HAMILTON FAME24/30。A试剂盒为HIV抗原抗体诊断试剂盒(国药准字S20080008)、B试剂盒为HIV抗体诊断试剂盒(国药准字S20030026)、C试剂盒为HIV抗体诊断试剂盒(国药准字S20020011)；BBI公司阳转血清盘4套，每套有4～8份血清系列标本；精密度血清盘，共高、中、低3个HIV抗体滴度；核酸扩增技术(NAT)检测试剂(上海科华生物工程有限公司生产)。所有试剂盒均在有效期内进行检测。

1.3方法

1.3.1ELISA检测 所用血液标本均使用2种试剂盒进行2次检测，每批设空白对照孔、阴性对照孔、阳性对照孔、室内质控孔，检验结果若存在不同或有反应性的检测标本进行双孔复试，检测有反应性的标本采用NAT对输血相关传染病标志物检测确认。

1.3.2NAT检测 ELISA检测阴性标本采用8份份混检，检测有反应性的混检标本拆分单检。

1.4阳性判断标准 ELISA试剂盒样品A值(S)/CO≥1，视为HIV抗原抗体有反应性；S/CO<1，判为HIV抗原抗体无反应性；NAT测定值CT≥50或无数值，且标志物测定值CT<50视为阴性，标志物测定值CT<40视为阳性，单检反应性即判为阳性。若标志物测定值CT为40～50，进行复试并以复试结果为准。

1.5观察指标 BBI阳转血清盘结果分析：比较各试剂在血清盘内检出首份阳性标本的采集时间与核酸检测首份阳性时间的差值。精密度检验：采用精密度血清盘评价试剂板内精密度，评价指标为变异系数，变异系数为数据标准差与均数的比值。质量控制：本研究所有操作及结果判定均按照试剂盒说明书进行，实验人员进行美国病理家协会能力验证血清盘检测，均满足实验需求。误诊率即非HIV患者中被诊断为阳性的概率；漏诊率即HIV患者中被诊断为阴性的概率。

2 结 果

2.1不同ELISA HIV检测试剂盒对阳转血清盘检验结果分析 B试剂盒、C试剂盒检测HIV的阳转血清盘，检测相比于核酸检测的平均检测天数相当，分别为(16.25±3.04)、(16.75±3.32)d，A试剂盒对于HIV检出时间相比于核酸检测天数最短，为(13.50±3.58)d。见表1。

表1 不同HIV试剂盒的检测天数比较(d)

2.2不同ELISA HIV检测试剂盒对研究份群检测结果分析 12 856份血液标本中共初筛阳性32份，检出率为0.25%，A试剂盒、B试剂盒、C试剂盒初筛总份数分别为7 256份、9 152份、9 304份，有反应性份数分别为18份、22份、24份；3种试剂盒的检测误诊率及漏诊率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2、3。

表2 3种试剂盒检测阳性结果比较

表3 3种试剂盒的检测误诊率及漏诊率比较(%)

2.3板内精密度检验 与不同抗体滴度质控品进行参比，3种试剂盒平行检测结果见表4。A试剂盒变异系数S/CO为(6.55±1.88)，CV(%)为(5.18±0.40)%；B试剂盒变异系数S/CO为(4.94±1.60)，CV(%)为(7.28±1.66)%；C试剂盒变异系数S/CO为(6.03±1.39)，CV(%)为(6.33±0.50)%。

表4 各试剂盒变异系数比较

3 讨 论

ELISA原理是将待测抗原、抗体固定在固相载体表面，用酶标抗原或抗体与固定抗体或抗原进行特异性反应，加入酶底物进行显色，再用分光光度计进行显色情况的观察，是一种半定量检测技术[5]。ELISA是当前应用最为广泛的HIV初筛方法，具有操作简单、检测时间短、成本低等优点，对实验人员的技术要求较低，适用于基层实验室检测，对于ELISA有反应性的标本再进行重组免疫印迹、核酸检测进行验证[6-7]。

当前HIV检测时间长是HIV早期诊断的难题，阳转血清盘是评价HIV早期检测有效率的重要工具，本研究对商业血清阳转盘进行检测发现，A试剂盒检测平均检测天数短于C试剂盒、B试剂盒。分析3种试剂盒的特点，B、C试剂盒均由HIV1/HIV2型抗原包被的微孔板及酶标抗体组成。有研究证实，第四代抗原HIV检测试剂盒固相包被P24抗原可将检测窗口期提前至2周[8-9]；既往开展的针对献血者的临床研究也显示，血清学检验中应用HIV第四代试剂盒可缩短HIV感染检测的窗口期[10]。

尽管ELISA试剂盒为初筛工具，但其准确度及灵敏度仍关系到HIV患者的有效诊治。本研究以血清标本作为对象分析3种试剂盒的诊断效能，结果显示，3种试剂盒仍存在一定误诊。目前对于第三代及第四代试剂盒对HIV感染检测效果的评估已有一定报道，沈蕊等[11]开展的一项研究证实，第三代及第四代抗原HIV检测试剂盒均具有较高的灵敏度及特异度，两者能较为准确地进行HIV初筛；本研究3种检测试剂盒诊断效能无差异，提示3种检测试剂盒均可进行较好的评估[12]；陈明军等[13]近期针对无偿献血份群血液标本的研究结果显示，第三代及第四代HIV检测试剂盒均有较好的检测性能，第四代HIV检测检出率较高，但存在较高的假阳性率；黄秋芳等[14]也证实四代抗原抗体试剂较三代更为灵敏，但特异度较差。分析其原因可能为第四代试剂盒将两种检测放在一个实验内进行检测，比单纯进行抗原或抗体检测增加了非特异性风险，影响了检测准确性。另外，不同公司对抗原、抗体两种成分结合可能存在一定差异，这些均可能造成检测结果的差异。

本研究的创新点在于使用当前血站系统常用的3种试剂盒(2种是检测抗体，1种是检测抗原)，对检测HIV的诊断效果进行了比较，3种试剂盒诊断效能相当，对在实际工作中早期诊断HIV具有一定价值。当前临床实际应用中多选用2种试剂盒进行检测，对于有反应性的标本再进行验证检验，结合本研究，在临床中将三代及四代检测试剂联合进行检测可能为HIV检测的最佳组合，既能保证较好的检测效能，也能缩短窗口期[15-16]。

开展本研究时受科研条件所限，分析指标较少，研究内容不够深入，目前无法补充数据并增加分析指标，这是本研究的不足之处，在今后的研究中一定增加分析指标，更深入地开展相关研究。