高效液相色谱法测定小油菜中阿维菌素的残留量

曲悠扬，勇艳华，于 洋，季 磊，陈 博，李婷婷

(大连市检验检测认证技术服务中心，辽宁 大连 116000 )

阿维菌素(Abamectin)是一种广谱杀虫剂[1]，属于大环内酯类化合物，在农业种植中应用广泛，可以杀灭小菜蛾、青虫、棉铃虫、夜蛾、蚜虫。阿维菌素残留一旦富集于食物链，容易造成人类运动失调、呼吸缓慢等症状，过量会导致昏迷甚至死亡[2～6]。

小油菜又名上海青、青江菜、瓢儿白等，属于普通白菜的一种[7]。目前，阿维菌素的检测方法主要包括酶联免疫法、高效液相色谱荧光法、高效液相色谱紫外法、液相色谱质谱法[8～12]。水果和蔬菜中阿维菌素残留量的测定液相色谱紫外法主要使用的国家标准为GB 23200.19-2016[13]，此方法提取液为丙酮，属于易制毒物品，普通实验室不以获取[14]。本方法杂质分离度、回收率较好，适合日常使用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 阿维菌素标准品；乙腈甲醇(色谱纯)；甲醇(色谱纯)；氯化钠(分析纯)； C18净化柱 3cc 200mg安捷伦；小油菜市售。

1.2 仪器与设备 超高效液相色谱(alliance e2695配UV检测器) 沃特世；纯水机(arium pro型号) 德国赛多利斯；全动力专业型旋转蒸发仪(R-300)德国步琦；天平(BSA224S)德国赛多利斯。

1.3 方法

1.3.1 标准溶液的配制 分别精确吸取10mg/L标准中间工作液20、50、100、200、500μL、分别用初始流动相定容至1mL，得到浓度为0.2、0.5、1、2、5mg/L的标准上机工作溶液。

1.3.2 实验步骤 提 取：准确称取粉碎均匀的试样20.0g于离心管，加入20mL乙腈，混合混匀之后振摇30min，加6g氯化钠，剧烈震荡，将样品放于离心机中4℃，10 000r/min离心5min，取上层溶液全部取出于磨口圆底烧瓶，于40℃水浴旋转蒸发至约2～3mL，加入5mL水混匀，待净化。

净 化：用3mL甲醇活化净化柱，再用5mL水冲洗净化柱，待液体流至筛板处，加入待净化溶液，再用5mL水淋洗，去掉淋洗液。最后用5mL甲醇洗脱，洗脱液用氮气吹至近干。准确加入1mL 50%甲醇水溶液涡旋1min，用0.22μm滤膜过滤待上机。

1.3.3 色谱条件的确定

色谱柱：迪马(Diamonsil 5μm C18， 250 × 4.6mm)； 检测器：紫外检测器； 检测波长245 nm；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：50μL。流动相：A相为水，B相为乙腈。流速采用梯度方式(表1)。

表1 流速梯度表

2 结果与分析

2.1 流动相梯度的选择 菜为基质时，小油菜中的杂质较多，目标物与杂质容易分不开，经过多次实验与调试，表1所示流动相梯度能较好地分离，同时也适用于大多数蔬菜基质[15]。阳性样品图谱(图1)所示。

图1 小油菜中阿维菌素阳性样品液相色谱图

图2 小油菜中阿维菌素加标样品液相色谱图

图3 小油菜空白样品液相色谱图

2.2 标准曲线的线性 以阿维菌素标准品的浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)做线性回归方程，得到相关系数：A： -3.162 890e+003; B： 9.648 061e+004; R2： 0.999 948。标准曲线(图4)。

图4 阿维菌素标准品线性回归曲线

阿维菌素在质量浓度在0.2 ～ 5mg/L范围内呈现出较好地线性关系。

2.3 方法定量限、回收率和精密度 经过加标回收实验，小油菜基质中阿维菌素的方法定量限为0.01mg/kg。在小油菜试样中添加0.01、0.025、0.1、0.25mg/kg 4个不同浓度水平进行添加回收试验，同时进行四组平行样品的检测，算出RSD，结果(表2)。

表2 阿维菌素的小油菜中添加回收率(n=4)

3 结论与讨论

本方法于食品安全国家标准GB 23200.19-2016相比，采用乙腈做提取液，比丙酮简单易得，同时提取率相同，前处理过程不易出错，在日常实验中不同基质中都显示出了不错的回收率和精密度。

在试样的提取过程中，振摇和混合要足够，以保证回收率。同时在旋蒸和氮吹时一定要保证近干，阿维菌素为大环内酯类物质，如果全干回收率会有所折损。