采前喷施水杨酸和茉莉酸甲酯对秀珍菇产量和采后生理的影响*

李昕霖，陈国平，施乐乐，吴小平，李建芳，黄志龙**

（1.福建省食用菌技术推广总站，福建 福州 350003；2.漳州市经济作物站，福建 漳州 363000；3.福建农林大学菌物研究中心，福建 福州 350002；4.顺昌县农业农村局食用菌站，福建 顺昌 353200）

秀珍菇（Pleurotus pulmonarius），别名袖珍菇、小平菇等，属担子菌门（Basidiomycota） 伞菌目（Agaricales） 侧耳科（Pleurotaceae） 侧耳属（Pleurotus）[1]，是一种营养极丰富的珍稀食用菌，其肉质脆嫩，风味独特，味道鲜美，被誉为“菇中极品”，市场前景较好[2]。福建省是全国秀珍菇主产区，罗源县更被誉为“全国秀珍菇第一县”，早在2013年全县秀珍菇的栽培量就已突破1亿袋[3]。由于新鲜秀珍菇子实体柔软，且含水量高达90%以上[4]，在采后及运输过程中极易出现失水、腐烂等现象，极大降低了其营养价值和商品价值[5]。因此，控制秀珍菇采后劣变是提高秀珍菇产业经济效益的重要途径。

水杨酸 （salicylic acid，SA） 和茉莉酸甲酯（methyl jasmonate，MeJA） 被认为是高等植物体内普遍存在的内源信号分子和新型植物激素[6-7]，不仅参与果蔬成熟等生理生化过程，还可参与植物的抗逆反应[8]，近年来被广泛应用于果蔬的贮藏保鲜和植物抗病性研究[6-9]。研究发现，采前用SA和MeJA处理葡萄[10]、芒果[11]、甜瓜[12]等果蔬均能达到抗病保鲜的效果，目前有关SA和MeJA对秀珍菇保鲜效果方面的研究还未见报道。以金台4号秀珍菇为试材，研究采前喷施SA和MeJA对秀珍菇产量及保鲜效果的影响，以期为SA和MeJA处理应用于秀珍菇贮藏保鲜提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 菌株

秀珍菇菌株金台4号，来源于福建农林大学菌种保藏中心。

1.1.2 试剂及溶液

浓度为150 μmol·L-1的水杨酸溶液由浓度为10 mmol·L-1的母液稀释所得。母液配制方法为：称取0.21 g水杨酸，用0.9 mL无水乙醇溶解，加入0.1 g Tween 20搅拌均匀，再加入80 mL蒸馏水定容到100 mL，4℃冰箱保存备用。

浓度为50 μmol·L-1的茉莉酸甲酯的配制方法参照参考文献[13]。

1.1.3 主要培养基

PDA培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g，pH自然。

木屑培养基：木屑39%、棉籽壳39%、麸皮20%、CaCO32%，含水量60%。

1.1.4 仪器设备

ZEAL WAY G154DW型灭菌锅，苏州赛恩斯仪器有限公司；SW-CJ-1FB超净工作台，苏州净化设备有限公司；HWS26型恒温水浴锅，上海恒一科技有限公司；HITACHI RXII series高速冷冻离心机，天美科技有限公司；LEGEND MICRO 17离心机，北京丰美天合科技有限公司；Lx-100掌型离心机，上海隆拓仪器设备有限公司；Bio-Rad C1000 PCR仪，上海实维实验仪器技术有限公司；METASH UV-5型，上海元析仪器有限公司；METASH V-5型紫外/可见分光光度计，上海元析仪器有限公司；AHRP-1000A型人工气候箱，金坛区西城文武仪器厂；Tissuelyser-24型全自动样品快速研磨仪，上海净信科技；CP313型电子天平，奥豪斯仪器（常州）有限公司；奥特光学B203生物显微镜，重庆奥特光学仪器有限责任公司。

1.2 处理方法

试验栽培袋采用规格为17 cm×3 cm的聚丙烯塑料袋装料，每袋干料重500 g。123℃高压灭菌2.5 h。冷却至25℃接种，之后于20℃～24℃培养室培养，待菌丝长满栽培袋并经后熟培养后，10℃以上的温差刺激进行开袋。开袋后置于23℃，湿度85%～90%的培养箱内出菇。

依据参考文献[14-18]及预试验结果，得到水杨酸处理最适浓度为150 μmol·L-1，茉莉酸甲酯最适浓度为50 μmol·L-1。将栽培袋随机分为3组：对照组（CK）、水杨酸（SA） 处理组、茉莉酸甲酯（MeJA） 处理组。每处理50袋，3次重复，共450袋。

开袋后，每天早晚将150 μmol·L-1水杨酸和50 μmol·L-1茉莉酸甲酯以30 mL·m-2均匀喷施于秀珍菇表面，对照组喷施相同体积的蒸馏水。

1.3 指标测定

1.3.1 产量的测定

随机各采收7袋不同处理的子实体，计算平均每袋产量。

1.3.2 失重率的测定

以子实体采收时的质量和贮藏期间测定时的质量变化、计算各处理的失重率（Y，%），每个处理3个重复，其公式为：

式中：M0为采收时不同处理子实体的质量（g）；Mi为之后每天同一时间子实体的称量质量（g）。

1.3.3 硬度的测定

采用质构仪测定采收后经不同处理的子实体菌盖的硬度，每个处理3个重复，测定菌盖中心位置。

1.3.4 乙烯受体基因表达检测

1） RNA提取和cDNA的合成

使用OMEGA植物RNA提取试剂盒提取采收后经不同处理的子实体RNA，所有步骤按试剂盒操作说明进行。采用北京全式金生物技术有限公司的TransScript All-in-One First-Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR试剂盒进行RNA反转录，将反转录后得到的cDNA用于之后的荧光定量。

反转录体系共20 μL，扩增程序为42℃，15 min；80℃，5 s；反转录结束后产物保存于4℃中。

2） 荧光定量PCR检测

荧光定量PCR检测使用北京全式金生物技术有限公司试剂盒，在BIO-RAD CFX96 PCR仪上运行，每个处理设置3个重复。

PCR反应体系含2 μL cDNA、10 μL 2× SybrGreen qPCR Master Mix、7.2 μL RNase-free 水、0.4 μL 引物F、0.4 μL引物 R。反应条件：94℃预变性150 s；94℃变性5 s，60℃退火30 s，40次循环；60℃延伸5 s。

秀珍菇乙烯受体基因引物见表1。

表1 秀珍菇乙烯受体基因引物Tab.1 The primers used for expression analysis of Pleurotus pulmonarius ethylene receptor gene

1.3.5 营养成分的测定

对采收后经不同处理的子实体营养成分进行测定。依据SN/T 4260-20155出口植物源食品中粗多糖的测定苯酚-硫酸法[19]的方法测定粗多糖，依据GB 5009.124-2016食品安全国家标准食品中氨基酸的测定[20]的方法测定氨基酸，依据GB 5009.268-2016食品安全国家标准食品中多元素的测定[21]的方法测定微量元素。

2 结果与分析

2.1 采前水杨酸和茉莉酸甲酯处理对秀珍菇产量的影响

不同处理组秀珍菇的产量见表2。

由表2可知，MeJA和SA处理组产量均高于对照组。MeJA处理组秀珍菇的产量提高了8.34%，且MeJA处理组与SA处理组、对照组比较，差异显著。SA处理组与对照组比较，差异不显著。可能是外源MeJA诱导了秀珍菇防御反应基因的表达，提高秀珍菇对病虫害的防御能力。

表2 喷施水杨酸和茉莉酸甲酯对秀珍菇产量的影响Tab.2 Effects of spraying salicylic acid and methyl jasmonate on the yield of Pleurotus pulmonarius

2.2 采前水杨酸和茉莉酸甲酯处理对秀珍菇失重率的影响

采前SA、MeJA处理对秀珍菇失重率的影响见图1。

图1 秀珍菇失重率测定结果Fig.1 Results of weight loss rate of Pleurotus pulmonarius

如图1所示，采前SA、MeJA处理组和对照组的秀珍菇失重率均随着放置时间的延长而逐渐升高，且失重率的斜率随着放置时间的延长逐渐降低。整个试验过程中，采前SA、MeJA处理组的失重率均低于对照组，与对照组之间差异显著（P＜0.05）。由此可知，采前SA、MeJA处理可以延缓秀珍菇子实体失重率的上升，且SA处理组上升更缓慢。

2.3 采前水杨酸和茉莉酸甲酯处理对秀珍菇菌盖硬度的影响

硬度下降是子实体衰老的重要标志之一，采前水杨酸和茉莉酸甲酯处理对秀珍菇菌盖硬度影响结果见图2。

图2 不同处理方式对秀珍菇菌盖硬度的影响Fig.2 Effects of different treatments on the hardness of Pleurotus pulmonarius cap

如图2所示，在整个放置时间内，采前SA、MeJA处理组和对照组的秀珍菇的菌盖的硬度均呈下降趋势，这可能与子实体中游离水的流失速度有关。在起始至1 d时，及2 d～3 d时，对照组硬度下降幅度最大，SA处理和MeJA处理下降幅度显著低于对照组（P＜0.05），说明SA处理和MeJA处理对秀珍菇有一定的保鲜作用。室温放置1 d～2 d，3种处理后的菌盖硬度下降幅度差异不显著（P＞0.05）。由此可见，采前MeJA处理不会影响秀珍菇采收时的硬度，还可以减缓秀珍菇常温放置过程中硬度的下降速度，但采前SA处理会降低秀珍菇采收时的硬度。

2.4 采前水杨酸和茉莉酸甲酯处理对秀珍菇乙烯受体基因表达量的影响

提取秀珍菇子实体RNA进行乙烯受体相关基因表达量的分析，见图3。

图3 不同处理对秀珍菇乙烯受体基因表达量的影响Fig.3 Effects of different treatments on ethylene receptor gene expression of Pleurotus pulmonarius

如图3所示，与对照组相比，SA处理组乙烯受体基因PpuETR1表达水平显著降低，MeJA处理组乙烯受体基因PPACC2表达水平显著降低，说明采前SA、MeJA处理在不同程度上抑制了乙烯受体基因PpuETR1或PPACC2的表达水平，减缓了乙烯信号通路对秀珍菇成熟衰老的作用。由此，可以从分子水平上判断采前SA处理和MeJA处理对秀珍菇有一定的保鲜作用。

2.5 采前水杨酸和茉莉酸甲酯处理对秀珍菇营养成分的影响

2.5.1 粗多糖含量分析

不同处理组粗多糖含量的统计结果见图4。

图4 不同处理组粗多糖含量Fig.4 Crude polysaccharide content in different treatment groups

由图4可知，SA处理组、MeJA处理组和对照组的粗多糖含量无显著性差异，且对照组略高于其他2组。

2.5.2 氨基酸含量分析

氨基酸是秀珍菇营养评价的重要指标，不同处理组氨基酸含量统计见图5。

图5 不同处理组氨基酸含量Fig.5 Amino acid content in different treatment groups

由图5可知，对照组秀珍菇子实体氨基酸含量最高，与MeJA处理后的子实体氨基酸含量无显著差异，而经过SA处理后的子实体氨基酸含量显著降低。

2.5.3 微量元素含量分析

秀珍菇富含多种微量元素，不同处理组钙含量统计见图6，不同处理组铁含量统计见图7。

图6 不同处理组钙含量Fig.6 Calcium content in different treatment groups

图7 不同处理组铁含量Fig.7 Iron content in different treatment groups

由图6、图7可知，MeJA处理组的秀珍菇子实体钙、铁含量显著高于SA处理组和对照组；SA处理组的子实体中钙含量与对照组无显著差异，铁含量显著高于对照组。

3 讨论

秀珍菇子实体的成熟和衰老与菌类的品质和贮藏保鲜息息相关。宋媛等[18]研究发现，采前喷施50 μmol·L-1MeJA可能使双孢蘑菇生长过程中一些酶活力、基因的表达以及生长代谢活动受到调控，促进双孢蘑菇的个体增大。弓德强等[22]研究发现，采前SA处理可以提高芒果采后果实品质，抑制芒果乙烯合成和软化基因的表达。何庆等[23]研究发现，采前MeJA处理能够通过诱导提高葡萄酶活性来提高果实采后抗病性，从而提高葡萄贮藏保鲜效果。刘庆安等[24]研究发现，外源MeJA和SA混合处理能有效防止黄瓜病害发生，使产量增加27.85%。本研究中，采前喷施SA和MeJA可以有效延缓秀珍菇子实体失重率的上升和硬度的下降，且不同程度抑制秀珍菇乙烯受体基因PpuETR1或PPACC2的表达水平。说明采前用SA、MeJA处理可以提高秀珍菇子实体的贮藏期商品品质，有一定的保鲜效果，与前人的研究结果基本一致[10-12]，且MeJA处理组秀珍菇的产量提高了8.34%。

秀珍菇富含18种氨基酸及多种矿物质、微量元素[25]。研究发现，与对照组相比，采前经MeJA处理，秀珍菇子实体中钙、铁等微量元素含量均显著提高，粗多糖、氨基酸等营养成分含量无显著差别；采前经SA处理，秀珍菇子实体中铁含量显著提高，氨基酸含量显著降低，粗多糖、钙等营养成分含量无显著差别。

研究结果表明，秀珍菇采前用150 μmol·L-1SA和50 μmol·L-1MeJA处理可以提高子实体的贮藏期商品品质，MeJA处理还可提升秀珍菇产量，但是SA处理对秀珍菇采收时的硬度、氨基酸含量等均有不利影响。综上，MeJA处理更适合用于秀珍菇的采前保鲜。