调血降脂丸质量标准研究

闫伟亚

摘要：：目的：建立调血降脂丸质量标准。方法：采用TLC法对何首乌（制）、山楂进行定性鉴别，采用HPLC法对女贞子中特女贞苷进行含量测定。结果：何首乌（制）、山楂中熊果酸的薄层鉴别分离度好，斑点清晰、阴性无干扰，专属性强;特女贞苷的含量线性范围为0.1896-3.792μg（r=0.9999），平均回收率为99.41%，RSD为0.34%。结论：建立了调血降脂丸的质量标准，该方法操作方法简便易行、准确、灵敏度高、稳定可靠，可用于控制该制剂的质量。

关键词：调血降脂丸;TLC;何首乌（制）;熊果酸;HPLC;特女贞苷

【中图分类号】 R283 【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2022）13--02

ABSTRACT：  Objective： To establish an HPLC method for determination of Trevor privet glycosides  in TiaoXueJiangZhi pill. Method： Agilent-C18（250mm×4.6mm，5μm） column was used.The mobile  phase was consisting of methanol and water（40：60）with a flow rate of ml·min-1.The column temperature was set at 30℃.The detection wawelength  was 224 nm，and theinjecticn volume was 10μl.Result： The linear range of Trevor privet glycosides in TiaoXueJiangZhi pill was 0.1896-7.587μg （r=0.9999）. The average recovery of Trevor privet glycosides was 99.41%and RSD was 0.34%. Conclusion： The method is simple ，sensitive and accurte and can be used to determine Trevor privet glycosides  in TiaoXueJiangZhi pill and quality control of TiaoXueJiangZhi pill.

Key words： TiaoXueJiangZhi pill;Determination;HPLC;Trevor privet glycosides

调血降脂丸是由平顶山煤业（集团）有限责任公司总医院生产的医院中药制剂[1]（豫药制字Z04040039），处方由女贞子，何首乌（制）、丹参、山楂、大黄、泽泻等味药组成，具有补活血、祛湿泻浊的功效。主要用于高血脂、高血粘综合征，脂肪肝，肥胖症;防治动脉粥样硬化及冠心病等。现行质量标准简单，不能有效的控制药品质量。女贞子是处方中的主药，其有效成分是特女贞苷，因此，测定调血降脂丸制剂中特女贞苷含量对控制调血降脂丸的质量有着十分积极的意义。何首乌（制）、山楂也是调血降脂丸处方中的主要药味，何首乌（制）具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨功效，用于血虚萎黄，眩晕耳鸣，须发早白，腰膝酸软，肢体麻木，崩漏带下，久疟体虚;高血脂。主要适宜人群是脂肪肝，三高，肥胖症，失眠，脱发，少白头及亚健康人群。山楂具有消食健胃、活血化淤、收敛止痢的功效，主要应用于降血脂、血压、强心、抗心律不齐等，所以为了进一步提高标准，保证制剂的稳定可靠，我们采用TLC法对何首乌、山楂进行定性鉴别，采用HPLC法对女贞子中特女贞苷进行含量测定，以便更好地控制制剂调血降脂丸的质量。

1 仪器与试药

1.1仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪;DAD检测器;色谱柱Agilent-C18（5μm，4.6mm×250mm）;XS205DU电子分析天平 [梅特勒 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2试药

特女贞苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111926-201404，含量97.3%），甲醇为色谱纯，水为超纯化水，其他试剂均为分析纯。

调血降脂丸为平顶山煤业（集团）有限责任公司总医院提供（批号为160317，160426，160521），缺位阴性对照样品由平顶山煤业（集团）有限责任公司总医院提供。

2 方法与结果

2.1何首乌薄层鉴别

2.1.1 供试品溶液制备：取本品粉末0.5g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。

2.1.2 对照溶液制备：另取何首乌对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液。

2.1.3 阴性对照溶液的制备：除何首乌外，其他各药按供试品处方量投料按调血降脂丸的制备工艺制成阴性对照，然后按供试品的制备方法，制成阴性对照溶液的制备。

2.1.4 照薄层色谱法（2015年版中国药典通则0502）试验，吸取上述五种种溶液各2μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上使成条状，以三氣甲烷-甲醇（7：3）为展开剂，展至约3.5cm ，取出，晾干，再以三氯甲烷-甲醇（20： 1）为展开剂，展至约7cm，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下检视。

2.1.5 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

1.样品（批号：180317）2.样品（批号：180426）3.样品（批号：190221）

4.何首乌对照药材   5.缺何首乌阴性对照

2.2山楂中熊果酸薄层鉴别

2.2.1供试品溶液制备：取本品粉末lg，加乙酸乙酯40ml超声处理15分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.2.2对照品溶液制备：取熊果酸对照品，加甲醇制成每l ml含l mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备：除山楂外，其他各药按供试品处方量投料按调血降脂丸的制备工艺制成阴性对照，然后按供试品的制备方法，制成阴性对照溶液的制备。

2.2.4试验方法：照薄层色谱法（2015年版中国药典通则0502）试验，吸取上述五种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20： 4： 0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液（3-10），在80℃加热至斑点显色清晰。

2.2.5实验结果：供试品色谱中，置紫外光灯（365nm）下检视，显相同的橙黄色荧光斑点。

1.样品（批号：180317）2.样品（批号：180426）3.样品（批号：190221）

4.熊果酸对照品      5.缺山楂阴性对照

2.3 女贞子中特女贞苷含量测定

2.3.1 色谱条件

Agilent-C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-水（40：60），检测波长为224nm，柱温：30℃，流速为1.0ml·min-1，进样量10μl。

2.3.2 对照品溶液的制备

精密称取对照品特女贞苷9.48mg，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解至刻度，摇匀，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备[2]

取供试品2g，精密称定，置具塞三角瓶中，加50%甲醇50ml，称重，超声处理（功率240W，频率45kHz）30分钟，放冷，加50%甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm 微孔滤膜滤过，即得。

2.3.4 阴性对照溶液的制备

除女贞子外，其他各药按供试品处方量投料按调血降脂丸的制备工艺制成阴性对照，然后按供试品的制备方法，制成阴性对照溶液的制备。

2.3.5 系统适应性试验

分别精密吸取2.2、2.3、2.4项下溶液，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图，结果见图 1。 特女贞苷的保留时间为14.207min，与相邻杂质峰分离度均大于1.5，拖尾因子为0.72，峰形良好。阴性对照色谱图在主成分色谱峰位置处无干扰，理论塔板数按特女贞苷计，不低于4000。

2.3.6 线性关系考察

分别吸取对照品溶液（0.1896mg·ml-1）1、3、5、8、10、20μl各进样两次，记录峰面积分值，以特女贞苷峰面积积分值对进样量进行回归，得到回归曲线y=109.25x+38.702，r=0.9999。结果表明其线性关系良好，线性范围为：0.1896～3.792μg 。

2.3.7 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液10μL ，重复进样6 次，按上述色谱条件测定峰面积。结果， RSD = 0.57% ，表明仪器精密度良好。

2.3.8重复性试验

精密称取同一批（批号： 160426） 样品6 份，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定。结果，平均含量为1.202mg/g，RSD = 0.71 % ，表明本方法重复性良好。

2.3.9 稳定性试验

取供试品溶液（批号： 160426） ，分别于0 、1 、2 、4 、8 、12h 各精密吸取10μL ， 按上述色谱条件测定峰面积积分值。结果，RSD = 0.64% ，表明供试品溶液在12h 内稳定。

2.3.10 加样回收率试验

取已知含量的样品9份，分别精密加入一定量的特女贞苷对照品，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样10μL ，测定，计算回收率。结果详见表1 。

结果表明，平均回收率均介于95% ～105%，符合要求。

2.3.11 样品含量测定

按上述含量测定方法测定样品中特女贞苷含量。结果见表2 。

3 结论

采用TLC法对何首乌、山楂进行定性鉴别时，考察了不同提取溶剂（甲醇、乙腈、乙醇、乙酸乙酯）和不同的提取方法（超声提取、加热回流提取、浸渍提取）对提取效果及专属性的影响，发现以乙醇为溶剂，加热回流1小时的制何首乌提取效果最佳，山楂的最佳提取方法为乙酸乙酯为溶剂，超声提取15分钟。同时参照中国药典一部制何首乌、山楂项下的薄层色谱条件进行定性鉴别，该方法稳定可靠，操作简便，专属性较强。

根据女贞子中化学成分及性质[3]，在供试品制备的过程中，也曾考虑到其他样品对女贞提取以及含量测定的影响[4-5]，考察了用不同浓度的甲醇进行提取和处理方法，在超声、回流等方法的基础上，经反复实验，结果发现以50%甲醇和超声提取30分钟的效果最佳[6]，考虑到操作的方便性，可操作性，本实验采取了50%甲醇超声提取。

调血降脂丸是医院制剂，在长期的临床实践中证明，就有良好的疗效，但是长期以来，以薄层鉴别作为该药的标准，没有具体的质量控制标准，女贞子是调血降脂丸的主药之一，本实验通过用HPLC法对调血降脂丸中特女贞苷的含量进行测定。通过以上实验，建立了调血降脂丸制剂的质量控制方法，该方法稳定可靠，操作简便，专属性较强，可以作为调血降脂丸制剂的质量控制标准的参考。

参考文献：

[1]河南省食品药品监督管理局医疗机构制剂标准.豫药制字：Z04140004

[2]國家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社.2015：45-46

[3]郭培果.HPLC测定参茸珍宝片中特女贞苷的含量[J].中国现代应用药学，2014，31（10）：1231-1234

[4]商桂春，袁大鹏，刘海滨.HPLC测定女珍颗粒中特女贞苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（4）：153-155

[5]陈玲，鲍蕾蕾，卞俊，李文慧，王晓丽.HPLC法测定舒肝灵茶中特女贞苷的含量[J]. 解放军药学学报，2015，（3）：250-251，271

[6]林伟鑫，李勇，吉国辉，江斌，何伟.HPLC法测定调脂胶囊中特女贞苷的含量[J].辽宁中医杂志，2015，（3）：564-565.