妊娠期高血压患者 HLA-Ⅰ、miR-95-5p表达及与母婴不良结局相关性

刘丽丽 刘 静

河北省唐山市妇幼保健院(063000)

妊娠期高血压未及时治疗会进展为子痫前期，严重者可出现子痫，累及胎盘、胎儿，可导致产后出血、早产等多种不良结局[1]。目前对妊娠期高血压发病机制尚不完全明确，但部分研究认为[2]，此病的发生与多种细胞因子异常表达相关。白细胞抗原Ⅰ类分子(HLA-Ⅰ)属一种受组织相容性复合体所调控的位于细胞表面的具有识别抗原、传递活性的一组免疫球蛋白，与妊娠期高血压发生相关[3]。miRNA参与细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程，其中部分miRNA参与妊娠期高血压的发生[4]。基于上述研究背景，本研究分析HLA-Ⅰ、微小RNA-95-5p(miR-95-5p)在妊娠期高血压患者中的表达及与母婴结局的相关性，为临床诊治提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2019年1月-2020年1月本院收治的妊娠期高血压患者95例作为高血压组，健康体检的正常妊娠产妇80例作为健康组。纳入标准：符合《妊娠期高血压疾病诊治指南(2015)》[5]诊断标准。正常妊娠产妇无妊娠合并症，身体健康。排除标准：合并糖尿病；胎膜早破、存在感染征象；心肺等重要脏器障碍；存在原发性肝肾合并症；精神障碍、沟通障碍。研究对象均知情同意。本研究经院伦理委员会批准。

1.2 检测方法

1.2.1 HLA-Ⅰ类分子HLA-Ⅰ类分子包括可溶性白细胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)、HLA-E、HLA-F、HLA-G蛋白。采集研究对象晨空腹静脉血，酶联免疫吸附测定法检测血清sHLA-Ⅰ水平，HLA-E、HLA-F、HLA-G蛋白水平采用Western Blot法检测。

1.2.2 miR-95-5p采集所有研究对象晨空腹静脉血分离单个核细胞，采用荧光定量PCR法(RT-PCR)检测血miR-95-5p表达量。反应体系：8μl cDNA模板、10μl SYBRP Green mix、2μl PCR Primer mix。反应条件：95℃ 10min；95℃ 10s；60℃ 1min；40个循环。以β-actin为内参，采用2-△△Ct方法计算血miR-95-5p表达量。miR-95-5p引物序列：上游：5’-ACACTCCAGCTGGGTCAATAAATGTC-3’，下游：5’-TGGTGTCGTGGAGTCG-3’；内参β-actin引物序列：上游：5’-CTGGCACCACACCTTCTACAATGAGC-3’，下游：5’-GAGGATCTTCATGAGGTAGTCAGT-3’。

1.3 母婴结局

统计不良母婴结局，包括胎盘早剥、子宫切除、产后出血、早产，围产儿结局包括新生儿窒息、胎儿窘迫、胎儿生长受限、新生儿死亡。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 基本情况

高血压组年龄(29.9±4.6)岁(25～38岁)，孕周(28.0±5.7)周(22～37周)；健康组年龄(28.5±5.2)岁(23～37岁)，孕周(28.3±5.4)周(22.5～37周)。两组比较无差异(P>0.05)。

2.2 HLA-Ⅰ、miR-95-5p水平

如表1所示，与健康组相比，高血压组sHLA-Ⅰ、HLA-E、HLA-F、HLA-G表达降低，miR-95-5p表达升高(P<0.05)。

表1 两组HLA-Ⅰ、miR-95-5p水平比较

2.3 HLA-Ⅰ、miR-95-5p与妊娠期高血压患者临床特征

如表2所示，HLA-Ⅰ、miR-95-5p表达与妊娠期高血压患者年龄、体质指数(BMI)、孕产次无关(P>0.05)，与患者有无高血压家族史、妊娠高血压史相关(P<0.05)。

表2 妊娠期高血压患者临床特征与HLA-Ⅰ、miR-95-5p水平

2.4 不良母婴结局比较

如表3所示，高血压组不良母婴结局发生率高于健康组(P<0.05)。

2.5 妊娠期高血压患者HLA-Ⅰ、miR-95-5p与母婴结局

如表4所示，妊娠期高血压患者不良母婴结局与正常母婴结局相比，孕妇的HLA-Ⅰ分子sHLA-Ⅰ、HLA-E、HLA-F、HLA-G表达降低，miR-95-5p表达升高(P<0.05)。

表4 妊娠期高血压患者HLA-Ⅰ、miR-95-5p水平与母婴结局

2.6 各指标间相关性分析

sHLA-Ⅰ、HLA-E、HLA-F、HLA-G与miR-95-5p均呈负相关(r=-0.369,P=0.001)(r=-0.267,P=0.009)(r=-0.317,P=0.002)(r=-0.829,P=0.001)。

3 讨论

目前临床对妊娠期高血压发病机制尚不明确，缺乏有效治疗药物。虽然已有研究显示[6-7]，妊娠期高血压的发生与免疫、血管内皮功能等障碍相关，但并未深入探究具体细胞因子的表达情况，目前对妊娠期高血压的诊治和母婴结局预后的研究仍是普遍关注热点。本研究探究与妊娠期高血压患者母婴结局相关的细胞因子(HLA-Ⅰ、miR-95-5p)，为临床诊断、治疗及母婴预后研究提供参考。

妊娠期母胎界面存在显著的免疫反应。研究显示[8-9]，当母胎界面免疫耐受被其他因素打破后可导致免疫排斥反应发生，进而引发多种妊娠期疾病，如妊娠期高血压等。研究显示[10]，滋养层细胞所表达的主要组织相容性复合体与母胎免疫耐受相关。HLA-Ⅰ包括多种分子亚型，其中HLA-A、HLA-B属经典的HLA-Ⅰ，与恶性肿瘤病理变化相关，HLA-E、HLA-F、HLA-G等属非经典HLA-Ⅰ，主要在蜕膜的人绒毛细胞滋养层细胞中表达[11-12]。研究发现[13]，母胎界面滋养细胞上特异性表达的HLA-Ⅰ属免疫耐受分子，sHLA-Ⅰ属HLA-Ⅰ可溶性形式，已证实sHLA-Ⅰ、HLA-G在病理性妊娠的发生进展中有重要调控作用，而对于HLA-E、HLA-F是否参与病理性妊娠报道较少。研究发现[14]，HLA-E主要在人绒毛外细胞滋养层细胞表面和细胞浆中表达，在妊娠中晚期合成分泌，随着含量升高使血液循环中含量增加。HLA-F表达于整个孕期，与胎儿的免疫排斥作用相关，可抑制免疫排斥作用[15]。本研究发现，HLA-Ⅰ在妊娠期高血压中低表达且与母婴结局相关，提示HLA-Ⅰ可能经不同途径参与妊娠期高血压的病理妊娠过程，最终改变妊娠结局，导致不良母婴结局发生。

目前临床上对妊娠期高血压发病所涉及的分子机制尚不明确，但已有研究显示[16-17]，妊娠期高血压发病过程中有miRNA参与，可经对多种基因、蛋白的表达产生调控作用参与细胞生物学行为，而组织细胞生物学过程与维持妊娠过程中胎盘稳态具有重要作用。近年已有多数研究表明[18-19]，miRNA参与多种生理、病理过程，包括细胞增殖分化、免疫反应、炎症反应、恶性肿瘤的发生发展、心血管疾病等，且在高血压的发生发展中具有重要意义。研究显示[20]，妊娠期高血压的发生与代谢酶、受体基因的单核苷酸多态性、DNA甲基化相关，miR-155、miR-143、miR-124等可经作用于血管紧张素受体、改变血管内皮功能、降低免疫耐受等途径参与妊娠期高血压的发生进展过程。miR-95-5p属miRNA家族成员之一，目前临床上对于miR-95-5p参与妊娠期高血压疾病的发生进展研究较少，刘侃等[21]研究认为妊娠期高血压可能与miR-95-5p的表达相关。基于此背景，本研究结果显示，miR-95-5p在妊娠期高血压高表达且与不良母婴结局相关，说明miR-95-5p参与了妊娠期高血压进展，是影响不良母婴结局发生的可能因素之一。虽然本文研究证实miR-95-5p与妊娠期高血压患者母婴结局相关，但未深入研究其作用机制，还需进一步研究以证实二者关系，并明确其作用机制，以早期预测妊娠期高血压母婴结局，改善母婴预后。

另外本研究发现，HLA-Ⅰ类分子与miR-95-5p呈负性相关，提示其可能共同参与此病的发生进展。分析其作用机制可能与在疾病发生后miR-95-5p介导机体免疫，降低免疫耐受性，此过程中HLA-Ⅰ类分子表达降低，两者相互介导促进了疾病发展。但本文未分析两者作用机制，且本次纳入样本量较少，数据统计时可能存在一定偏倚，因此本文上述结果还需后续研究进一步验证，以明确两者在此病中的作用，为临床研究提供参考。

综上所述，本研究发现，妊娠期高血压患者血清HLA-Ⅰ类分子低表达、miR-95-5p高表达，且与患者母婴结局相关，提示临床可根据其水平变化预测妊娠期高血压患者母婴结局，及早干预预防。