蒙药协日嘎四味汤对糖尿病大鼠肾保护作用的实验研究

摘要：为探究蒙药协日嘎四味汤对糖尿病大鼠肾保护作用。选取雄性健康Wister大鼠48只，随机分为6组，即正常组、DM模型组、协日嘎四味汤低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组。除正常组外其余各组均注射链脲佐菌素糖尿病模型。协日嘎四味汤低剂量组以0.34g/kg/d、中剂量组以0.68 g/kg/d和高剂量组以1.35g/kg/d灌胃给药，正常组和模型组给予等量20g/kg/d蒸馏水灌胃，阳性对照组依那普利1.5mg/kg/d灌胃给药，每周称体重调整用药剂量，连续用药8周。结果发现协日嘎四味汤对于DM大鼠的肾脏损伤有一定的保护作用，其中高剂量蒙药组血糖较模型组显著降低，可降低糖尿病大鼠的血糖。

【中圖分类号】  R587.1【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2022）15--02

前言

随着人们生活水平的提高，人均寿命延长，一些慢性疾病的患病率正逐年增长。糖尿病（Diabetes Mellitus，DM）是一种由胰岛素分泌及作用缺陷引起，以血糖升高为主要特征的慢性代谢性疾病[1]。2016年4月6日首次发布的全球糖尿病报告显示：在最近40年，全球范围内的糖尿病患者已达到4.22亿人，较之前增加了3倍。据世界卫生组织（World Health Organization，WHO）预测，到2030年，糖尿病将成为第七项主要死亡原因[2]。目前，糖尿病在全球范围内广泛流行，糖尿病及其并发症已成为严重危害人类健康的世界性公共卫生问题，引起了世界各国的高度重视。

氧化应激在糖尿病发病机制中发挥着非常重要作用，几乎所有糖尿病并发症相关通路的激活均与机体氧化应激反应有关[3]。机体内抗氧化与促氧化物质相互作用而处于动态平衡状态。机体各种病理因素导致抗氧化物质数量减少，或者促氧化物质数量增多，以及抗氧化应激反应不充分等，使得机体内活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）含量增加。ROS能够氧化蛋白、脂类、细胞膜等生命基本物质，使其结构和功能发生变化，导致糖尿病、肿瘤等疾病发生[4]。因此，清除体内过剩自由基、抑制体内氧化应激，已成为预防和治疗糖尿病有效途径之一。蒙药在防治糖尿病等方面有其独特优势，从天然药物中探寻抗氧剂成为目前研究热点[5]。

蒙药协日嘎四味汤是由姜黄、蒺藜、栀子、黄柏这四味中药材组成的中药方剂。蒙药协日嘎四味汤在蒙医临床治疗中常用于降血糖、利尿等的蒙药煮散制剂[6]。蒙药协日嘎四味汤又被称为勇瓦四汤、沙日嘎四汤、姜黄四味汤等，其最早记载于蒙医古籍《观者之喜》[7]。本文通过链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型，并探究蒙药协日嘎四味汤对糖尿病大鼠的保护作用，为蒙药防治糖尿病提供理论依据。

1、实验材料

1.1 动物

清洁级健康Wister大鼠，雄性，体重200±10g，由辽宁长生生物中心提供，编码SCXX（辽）2015-0001。

1.2 主要试剂与药物

蒙药协日嘎四味汤：由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供（编码：20180704）。每次3～5 g，临用时水煎煮提取后，并用蒸馏水调配至试验所需浓度。依那普利（上海鑫雅药物有限公司，编码H20083534）;链脲佐菌素（上海原叶生物有限公司）;水合氯醛（浙江福田药物有限公司）;其他试剂均为分析纯。

1.3 主要仪器

微量移液器（德国Eppendorf AG）;血糖仪（罗氏公司）;酶标仪（美国Bio-Rad公司）;全自动生化分析仪（日本日立有限公司）。

2、实验方法

2.1 模型制备及给药分组

选取体重200±10g清洁级雄性健康Wister大鼠48只，适应性喂养一周，随机分为6组，即正常组、DM模型组、协日嘎-4味汤低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组（依那普利组）。除正常组外其余各组在空腹12h状态下腹腔注射链脲佐菌素50mg/kg建立DM模型，测定模型组大鼠空腹血糖，血糖值在≥16.7 mmol/L范围者视为造模成功[8]。

协日嘎四味汤低剂量组以0.34g/kg/d、中剂量组以0.68 g/kg/d和高剂量组以1.35g/kg/d灌胃给药，正常组和模型组给予等量20g/kg/d蒸馏水灌胃，阳性对照组依那普利1.5mg/kg/d灌胃给药，每周称体重调整用药剂量，连续用药8周。在实验过程中，平均第2、4、6、8周每周测一次空腹血糖和尿糖，若出现低血糖现象，适当增加饮食次数，避免对实验结果造成不良影响。

2.2 取材

大鼠于末次给药后，单笼收集大鼠24 h尿液，离心，4 ℃保存，用于尿蛋白（ALB）检测;将大鼠禁食不禁水12 h，临处死前称重、测血糖，10 %水合氯醛腹腔注射麻醉后，腹主动脉采血，2000 rpm，低温离心10 min，取血清，-20 ℃保存，用于Scr、BUN含量测定。

2.3肾组织病理变化

取大鼠肾组织，4%多聚甲醛溶液固定肾脏组织，经乙醇脱水，石蜡包埋、切片，HE染色，光镜下观察肾脏形态学改变。

2.4 数据分析

所有数据均采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析，计量资料数据结果用均数±标准差（x±s）表示，P<0.05为差异具有统计学意义。

3、结果

3.1各组大鼠一般情况比较

研究过程中，正常对照组大鼠精神状况良好，毛发有光泽，动作自如、反应灵敏;模型组大鼠精神萎靡，反应迟钝，活动倦怠，毛发杂乱泛黄无光泽偶有脱毛，尿量明显增多，大便稀;协日嘎-四味汤高剂量组大鼠反应较灵敏，毛色可，尿多、大便尚可;阳性对照组与协日嘎-四味汤低、中剂量组大鼠反应较为迟钝，毛发尚可，尿量多，大便稀释。874A93C3-A243-42D9-AB06-06265A1C55B2

3.2各组大鼠血糖、体重的比较

如表1所示，模型组大鼠的血糖在造模成功后一直处于高血糖状态，且逐渐上升，与正常组比较差异显著（P <0.01）;协日嘎-四味汤低、中、高剂量组中，在药物干预后与模型组比较，血糖均有显著性差异（P <0.05）;协日嘎-四味汤低、中剂量组间无明显变化;协日嘎-四味汤高剂量组与模型组比较，血糖有显著性差异（P <0.01）;阳性对照组与模型组比较无显著性差异。正常组大鼠的体重持续增长;其他各组大鼠的体重均有所增长，实验结束时，模型组大鼠体重与正常组比较已有显著性差异（P <0.01），其中协日嘎-四味汤低、中、高剂量组与模型组比较均有显著性差异（P<0.05）。

3.3各组大鼠生化指标的比较

如表2所示，与正常组大鼠比较，模型组的BUN、SCr 、ALB均明显升高（P<0.01）;经药物干预后，协日嘎-四味汤高剂量组大鼠BUN、SCr、ALB含量较模型组均明显减少（P <0.05），阳性对照组和协日嘎-四味汤低剂量组中BUN、SCr的含量与模型组比较无显著性差异;阳性对照组和协日嘎-四味汤低、中剂量组中ALB的含量与模型组比较无显著性差异;协日嘎-四味汤中、高剂量组中BUN、SCr的含量相比于模型组均明显减少（P <0.05），且阳性药物对BUN、SCr、ALB未表现出明显作用。

3.4各组大鼠肾脏病理切片的比较

如图1所示，正常组大鼠肾组织形态正常，肾小球形态规则，肾小管排列紧密整齐。与正常组相比，模型组肾小球未见明显病变，肾小管可见上皮细胞较多空化空泡变性坏死，肾小管管腔可见蛋白管型和细胞管型。阳性对照组部分肾小管可见上皮细胞空化空泡变性坏死。蒙药高剂量组偶见肾小管可见上皮细胞空化空泡变性。蒙药低剂量组部分肾小管可见上皮细胞空化空泡变性坏死，较阳性药物组差。蒙药中剂量组较多肾小管可见上皮细胞空化空泡变性，较低剂量组差。可得出结论，蒙药协日嘎-四味汤干预DM大鼠肾脏病理损伤较模型组得到了明显改善，尤其高剂量协日嘎-四味汤对于DM大鼠肾脏病理损伤有明显改善作用。

4.討论

4.1 正常大鼠喂养普通饲料，注射一定剂量STZ可造成胰岛β细胞某些功能的损伤，胰岛素分泌量降低，从而建立II型糖尿病模型。

4.2诸多研究已证实蒙药协日嘎四味汤单味药都具有良好的降血糖及降血脂、抗炎、抗氧化等作用，在治疗糖尿病及并发症方面均有良好的运用前景[9]。且蒙药协日嘎四味汤的处方成分价格低廉、不良反应少，具有给药方便等优势，蒙药协日嘎四味汤具有很大的开发利用价值和潜力。本研究发现协日嘎四味汤对糖尿病大鼠肾脏病理损伤有明显改善作用，但其降糖机制及有效成分仍未研究透彻，药物之间的配伍应用也有待探索。

参考文献：

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[8] 王军， 鲁盈. 大黄素防治糖尿病大鼠早期肾损伤的实验研究[J]. 浙江医学， 2000， 22（12）：723-726.

[9] 杨婷， 贾鑫， 董玉. 蒙药复方协日嘎四味的研究进展[J]. 内蒙古医科大学学报， 2010（s3）：13-16.

【作者简介】

姓名：房私日吉 出生年月—：1993.06.02 性别：女 民族：蒙古族 籍贯：内蒙古自治区通辽市 职务/职称：住院医师 学历：硕士研究生  研究方向：内科874A93C3-A243-42D9-AB06-06265A1C55B2