微柱凝胶法交叉配血技术中供血者意外抗体筛查的临床应用效果

张璐璐

（沈阳市骨科医院承基医院，辽宁 沈阳 110000）

目前，在对输血患者和手术患者备血效果十分关注的情况下，不规则抗体引起了广泛关注。不规则抗体是不属于抗-A、抗-B的血型，多归结于IgG抗体。意外抗体的发生会造成交叉配血难度增大，同时还可能发生迟发性溶血性输血反应，进一步引发弥散性血管内凝血（disseminated intravascular coagulation，DIC）[1]、少尿、无尿及肾衰竭等，甚至危害患者的生命安全。据不完全数据证实，我国因血型抗原抗体免疫要素导致的输血反应比例高达12.00%，其中溶血反应比例在2.50%以上，与国外相比占比更高[2]。目前，微柱凝胶技术（microbubes gel technology，MGT）[3]在国外发展较为普遍，而在我国的应用仍存在局限性。基于此，本研究以回顾性分析形式，评定微柱凝胶法交叉配血技术中供血者意外抗体筛查的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取医院在2017年1月至2020年2月行治疗性输血和手术备血的患者596例。596例患者中男性450例，女性146例，最小年龄19岁，最大年龄68岁。

1.2 方法

1.2.1 微柱凝胶测定 选取专用孵育设备和离心机。试剂选取抗人球蛋白微柱凝胶卡、低离子介质溶液。微柱凝胶卡A孔、B孔和D孔分别加50 μmol/L浓度0.80%的红细胞悬液，离心300 s，在A孔和B孔共加入100 μmol/L的标准红细胞，每孔50 μmol/L，再分别加入50 μmol/L血浆，离心300 s。主侧加进50 μL浓度0.80%献血者红细胞悬液和50 μL受者血浆，次侧加进50 μL献血者血浆和50 μL浓度0.80%受者红细胞悬液，37 ℃下孵育1 min，专用离心机离心5 min。不规则抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3孔分别加进50 μL 0.80%筛检红细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ再分别加进50 μL患者血浆，37 ℃孵育15 min，专用离心机离心5 min。-表示100.00%红细胞沉淀在微管底部；+/-表示100.00%红细胞沉积在微管下端1/3内；+表示80.00%红细胞沉积在微管下端2/3内；+++表示80.00%红细胞沉积在微管上端1/3内；++++：在微管顶部聚集所有细胞；d.p表示双群；Hemo表示溶血。选出的阳性标本采用1～10号谱细胞进行微柱凝胶法处理，并采用抗体特异性检测。

1.2.2 抗球蛋白检测 测定出的阳性标本采用抗球蛋白间接法检测，择取12支有标记的1-X、阳性对照、阴性对照的试管，在12支试管中分别加进5.00%筛检红细胞悬液1滴，加进测定血清2滴，将5.00%Rh（D）阳性红细胞悬液1滴和IgG抗D血清2滴加进阳性对照管中，5.00%Rh（D）阳性红细胞悬液1滴和AB血清2滴加进阴性对照管中，将每个管分别放置于37 ℃温度下，温育60 min离心处理，记录溶血和聚集状态，并对结果记录。对红细胞悬浮，洗涤生理盐水＞3次，最后1次洗涤后，将生理盐水去掉，并将生理盐水全部吸干，管中加进稀释度抗人球蛋白血清2滴，离心混合处理后，红细胞悬浮。

1.2.3 抗体筛查与交叉配血 对596例受血人员使用全自动血型鉴定及交叉配血分析仪进行抗体筛查，针对阴性的患者，在审核完成后，录入输血管理系统；针对阳性的患者，在审核完成后，使用普细胞进行抗体特异性筛查检定。抗体检测呈阴性符合交叉配血规则的受血者由输血管理系统根据所需的血液成分、数量、血量等，自动显示捐血者名单，以完成交叉配血程序。同时进行传统的血清交叉配型试验，并进行平行操作。在血清学交叉配型时，将主要一面的不相容分开处理，采用光谱细胞鉴定抗体特异性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行分析。计数资料采用[n（%）]表示，组间比较行χ2检验；P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不规则抗体筛查 596例受血人员共测定出抗体阳性240例（40.27%）。

2.2 抗体特异型测定 应用微柱凝胶法和试管间接抗人球法对240例抗体筛选阳性标本鉴定，具体见表1。

表1 240例抗体筛选阳性标本不规则抗体记录

3 讨论

意外抗体是指血清中除抗-A和抗-B以外的其他血型的抗体，是引起输血不良反应和影响血液鉴定结果的重要因素。随着医学的发展，红细胞血型鉴定水平逐步提高，以溶血性输血反应为代表的输血不良反应的发生率明显降低，但意外抗体引起的迟发性溶血反应在临床输血反应中的占比越来越大。不规则抗体引起的溶血性输血反应可引起发冷、发热，影响治疗效果，严重者甚至危及生命。因此，抗体筛查是必不可少的。基于此，为了确保临床输血的安全性与有效性，应在输血前对患者进行意外抗体筛查。

不规则抗体会造成交叉配血的难度提升，因此即便是敏感度高的红细胞抗体阳性患者，在进行了不符合标准的血液灌注时也会导致免疫溶血性输血反应发生，从而危害患者的生命安全[4]。因此，在对患者输血前均筛选意外抗体，如果抗体筛查中证实为阳性状态，则进行抗原阴性处理，同时交叉配血满足标准的红细胞输注，这也是确保科学数学的前提，特别是对于手术备血患者来说，可提前1 d做抗体筛查测定。对于进行抗体筛查的阳性患者来说，在更为充足的阶段行抗体特异性监测，并联合血液制品，从而保证手术的安全进行[5]。

通过本次数据证实，测定出240例抗体筛查阳性患者，稍微高于我国报道的需要输血住院患者的比例，这一因素的发生主要和受检人员的性别、输血情况、妊娠情况有关，通过本次研究分析存在输血史/妊娠史患者中，测定出特异性抗体86例（35.83%），未测定出特异性抗体患者104例（43.33%）。因此，对存在妊娠史患者和输血史患者做抗体筛查具有更大价值。在以上分析中，进行测定的106例抗体中，多数均属于Rh系统的特异性抗体。检查出的抗体多属于抗-E，这是由于当前Rh（D）已经作为输血、备血患者的最常规检查形式，Rh（D）血型同型输注推广较为常见，降低了因输入Rh（D）阳性血液，而出现抗-D机会，以此抗-D抗体检出率较低。除D以外的Rh血型系统的其他血型抗原，没能在血型鉴定中测定，同时在人群中的比例相当于50.00%，所以一旦Rh（E）阴性患者因输血或者妊娠进行Rh（E）抗原刺激就会出现抗-E抗体，以此因免疫要素出现不规则抗体。从本质上来看，其Rh（E）血型不配合的比例应为Rh（D）2.5倍。Rh系统抗原性的强度中，e最小，而后为C、c、E和D，Rh（E）抗原是除了Rh（D）抗原外抗原性最强的一种抗原，却未将其作为基础测定，造成近年有抗Rh（E）抗体导致溶血性输血反应的数据。根据当前得出的数据证实，除ABO系统外的一些血型抗原的关键性。所以研究判定如果有条件满足，则给受血人员作为Rh血型分型，输入相符合血液，能够降低不规则抗体发生率。

另外MNSs系统抗体比例更高，其次为抗-M抗体，抗-M抗体仅仅能够在37 ℃环境下贮存，当抗球蛋白测定为阳性时才具有合理性[6]。在一般情况下，人体内不会出现溶血状态，但如果患者处于低温下则应重点关注。此类抗体会对补体激活，当机体体温在冷抗体最适合反应温度范围区域内时，也会出现溶血反应[7]，所以应选取抗-M相符合的血液，以降低意外情况发生[8-10]。通过本文数据分析，596例受血人员共测定出抗体阳性40.27%。选取血型系统Rh-hr、MNSs、Kidd、Duffy、Kell、Lewis，其中记录比例为3.33%、14.17%、0.83%、1.67%、0.83%、14.17%、1.67%、0.83%、0.83%、0.83%、2.50%、0.83%、1.67%。测定出特异性抗体44.17%，未测定出抗体共55.83%，总计100.00%。

综合以上结论，对输血前患者予以不规则抗体测定十分关键，能够确保临床输血的安全性，降低溶血性输血。同时，微柱凝胶法测定抗体筛查能够克服常规的抗人球蛋白测定的复杂性，不需要进行洗涤，简单方便。