维吾尔药材睡莲花的质量标准研究

赵荣梅 艾买提江·阿衣甫别克 徐鸿 于新兰 马国明

【摘要】目的：建立维吾尔药材睡莲花的质量标准。方法：采用显微鉴别、TLC法鉴别;对水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行检查;采用HPLC法测定睡莲花中山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量。色谱柱为C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸溶液，梯度洗脱;检测波长为350nm。结果：对睡莲花药材的性状、显微特征进行了描述、TLC色谱斑点清晰，水分、灰分、酸不溶灰分的含量分别不得超过12.0%，12.0%，2.0%，浸出物不得少于30.0%，山柰酚-3-O-芸香糖苷在5.11～51.07μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为98.0%，RSD为1.1%（n=9）。结论：本方法准确、简便、灵敏度高，能有效控制睡莲花药材的质量。

【关键词】睡莲花;质量标准;山柰酚-3-O-芸香糖苷;薄层色谱法;高效液相色谱法

【中图分类号】R284【文献标志码】A【文章编号】1007-8517（2022）11-0027-05

StudyonQualityStandardofUygurMedicineNymphaeaCandida

ZHAORongmeiAmatjan·Ayupbek*XUHongYUXinlanMAGuoming

XinJiangUygurAutonomousRegionInstituteforDrugControl，NMPAKeyLaboratoryfor

QualityControlofTraditionalChineseMedicine，UyghurMedicine，Urumqi830054，China

Abstract：ObjectiveToestablishthequalitystandardofUygurMedicineNymphaeaCandida.MethodsTheNymphaeaCandidawasidentifiedwiththemethodofMicroscopicidentificationandthin-layerchromatography（TLC），Thecontentofmoisture，totalash，acid-insolubleashandextractweredetermined.andtheHPLCmethodwasusedtodeterminethecontentsofkaempferol-3-O-rutinosideinNymphaeaCandidawithC18column（250mm×4.6mm，5μm）.ThemobilephaseAwasacetonitrile，ThemobilephaseBwas0.1%phosphoricacid.gradientelutionandthedetectionwavelengthwas350nm.ResultsThecharacterandmicroscopiccharacteristicsofCymbopogoncaesiusweredescribed.TLCidentificationmethodwasestablishedandthespotswereclearandwell-separated.Thecontentofmoisturecouldnotmorethan12.0%，totalashcouldnotbemorethan12.0%，acid-insolubleashcouldnotbemorethan2.0%，andextractcouldnotbelessthan30.0%，Thecalibrationcurveofkaempferol-3-O-rutinosideshowedagoodlinearintherangeof5.11～51.07μg/mL（r=0.9999）andtheaveragerecoverywas98.0%，RSDwas1.1%（n=9）.ConclusionThemethodwasaccurate，simple，andsensitive，whichcouldbeusedforthequalitycontroloftheNymphaeaCandida.

Keywords：NymphaeaCandida;QualityStandard;Kaempferol-3-O-rutinoside;TLC;HPLC

睡蓮花是睡莲科睡莲属植物雪白睡莲（Nymphaeacandida）的干燥花蕾，该植物生在池沼中，分布广泛，主产于新疆伊犁、阿勒泰和博湖地区，西伯利亚、中亚、欧洲也有分布[1]。维吾尔医认为睡莲花性质二级湿寒，具有降热止渴、益心护脑、祛乃孜来等功效，用于感冒发热、头痛咳嗽、心悸不安、咽痛解毒等[2-3]。文献[4-10]报道，睡莲花含有黄芪苷、烟花苷、紫云英苷、槲皮素3-O-木糖苷、槲皮素、槲皮素3′-O-β-D-吡喃木糖苷、异槲皮苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、芦丁等化学成分。

睡莲花作为维吾尔医的常用药材，在祖卡木颗粒、炎消迪娜儿糖浆、降热比那甫西糖浆等成药的处方中均有使用。现行质量标准现收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》维吾尔药分册中[3]，内容只有性状、粉末显微鉴别等项目。质量标准不完善导致企业无法全面控制药材质量。本研究的目的在于对其质量标准进行系统研究，保证用药安全。

1仪器与材料

1.1仪器BX-51型生物显微照相系统（OLYMPUS）;CAMAGTLCVisualizer型薄层色谱成像系统（瑞士卡玛）;KUDOSSK7210LHC型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）;CAMAGAUTOMATICTLCSAMPLER4全自动点样仪;高效液相色谱仪（Agilent1260型，DAD检测器;岛津LC-2010型，VWD检测器;ThermoUlltimate3000型;紫外检测器）;MS204S型电子天平（Mettlertoledo）;XT-1000A型高速多功能粉碎机（浙江永康市红太阳机电有限公司）。

1.2材料山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品（批号：112007-201602，含量：90.8%，中国食品药品检定研究院），硅胶G薄层预制板（批号：20200430，烟台市化学工业研究所）;甲醇、乙腈为色谱级（ThermoFisher），其他试剂均为分析纯。

睡莲花药材购自于新疆不同地区民族药材市场和民族医院，共19批次（产地为新疆的样品批号为：yfb1712004、yfb1712005、yfb1712006、Y1711021、H30134102、SLH-YP-170830、20170903;產地为巴基斯坦的样品批号为：20170905、1706018、170422;产地为河北白洋淀的样品批号为：yfb1712001、yfb1712002、yfb1712003、yfb1712007、yfb1712008、yfb1712009、Y1709009;产地为云南的样品批号为：201608;产地为成都的样品批号为：20170904）。由新疆维吾尔自治区药品检验研究院苏来曼·哈力克教授鉴定为睡莲科睡莲属雪白睡莲Nymphaeacandida。

2方法与结果

2.1性状本品呈圆锥形或长圆形，多皱缩破碎。花蕾长2.5～4.5cm，直径约2cm，花托略呈方形。残留花梗，有纵棱，表面被短绒毛。花萼4，革质，近离生，长卵状披针形，无毛，表面绿色或黄棕色。剥去花萼可见白色或黄白色花瓣。雄蕊多数，花药线形，花丝扁平，几与花药等长。子房球形或椭圆形，无花柱或极短，柱头密排成轮状，中部有凹陷。气微，味淡。如图1所示。

2.2显微鉴别分别取药材细粉适量，置载玻片上，加水合氯醛溶液透化后，置显微镜下观察，拍照记录。如图2所示。结果可见：腺毛头部类圆形，由1～3细胞组成。非腺毛海星状，或碎断，基部细胞类方形，表面附有大量草酸钙方晶。花粉粒类圆形，直径30～60μm。薄壁细胞中可见大量草酸钙结晶（砂晶、方晶或簇晶）。

2.3TLC鉴别取本品粉末1g，加甲醇10mL，超声处理20min，滤过，作为供试品溶液。另取山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品适量，加甲醇制成1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2020年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-冰醋酸-甲酸-水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。如图3所示。

2.4水分测定按照《中国药典》2020年版四部通则“0832第二法”测定水分。见表1。

2.5总灰分和酸不溶性灰分测定按照《中国药典》2020年版四部通则“2302灰分测定法”测定。见表1。

2.6浸出物测定按照《中国药典》2020年版四部通则“2201浸出物测定法”测定，以水和不同浓度的乙醇为溶剂，采用热浸法和冷浸法分别测定浸出物含量，确定提取方式为以70%乙醇溶液为溶剂，采用热浸法测定醇溶性浸出物含量。见表1。

2.7含量测定方法的建立

2.7.1色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按表2中的规定进行梯度洗脱;检测波长为350nm，流速为1.0mL/min;进样量为20μL。理论板数按山柰酚-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于4000。

2.7.2对照品溶液的制备取山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇分别制成每1mL含24μg的溶液，即可。

2.7.3供试品溶液的制备取样品粉末（过三号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.7.4系统适用性试验

2.7.4.1线性关系的考察精密量取山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品溶液（51.07μg/mL）1、2、3、4、6、8、10mL，分别置于10mL量瓶中，加70%乙醇稀释制成系列标准溶液，按“2.7.1”色谱条件测定，以对照品溶液浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=16.936×C+1.7465（r=0.9999）。结果表明，山柰酚-3-O-芸香糖苷浓度在5.11～51.07μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。

2.7.4.2重复性试验取同一批号供试品（批号：SLH-YP-170830），按照“2.7.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按照“2.7.1”项下色谱条件进样分析，测定山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量。以6次测定结果计算RSD值，结果山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的RSD值为1.76%（n=6），表明本方法的重复性良好。

2.7.4.3稳定性试验取同一批号供试品溶液（批号：SLH-YP-170830），分别于0、2、4、6、8、12、14、18、24和32h进样分析，测定山柰酚-3-O-芸香糖苷的峰面积。以10次测定的峰面积值计算RSD值，结果山柰酚-3-O-芸香糖苷峰面积的RSD值为0.32%。表明供试品溶液在室温放置32h内稳定性良好。

2.7.4.4精密度试验取同一批号供试品溶液（批号：SLH-YP-170830），按照“2.7.1”项下色谱条件连续进样6次，以6次峰面积值计算RSD值。结果山柰酚-3-O-芸香糖苷峰面积的RSD值为0.28%，表明本方法精密度良好。

2.7.4.5回收率试验精密称取已知含量的供试品（批号：SLH-YP-170830）0.1g，9份，分别置于置具塞锥形瓶中，精密加入对照品溶液适量，按照“2.7.3”项下方法制备得到高、中、低浓度的加标溶液。按照“2.7.1”色谱条件进样分析，计算山柰酚-3-O-芸香糖苷回收率。结果见表3。

2.7.4.6灵敏度当S/N为3时，溶液浓度为检出限，即为0.145μg/mL，RSD为1.9%;当S/N为10时，溶液浓度为定量限，即为1.146μg/mL，RSD为1.8%。

2.7.5供试品的测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照“2.7.1”色谱条件测定，即得，按干燥品以外标法计算含量。如图4所示及表4。

3讨论

3.1含量测定方法的考察在考察样品前处理方法时，采用50%、70%、100%的甲醇和乙醇溶液作为提取溶剂，以1∶100、1∶125、1∶250、1∶500作为料理比，超声时间分别为15、20、25和30min提取，对同一批次睡莲花样品中的山柰酚-3-O-芸香糖苷含量进行测定，选择含量最高的提取方式为70%乙醇溶液为溶剂，超声功率为250W，超声时间为30min。在考察方法耐用性时，分别考察了不同品牌高效液相色谱仪、不同品牌及批号的同类型色谱柱、仪器流速、仪器柱温对含量测定结果的影响。实验结果表明，这些影响因素均未对测定结果有明显的影响。

3.2检验项目限度的初步探索本研究收集的样品具有代表性，水分含量为8.12%～10.39%，平均值为9.35%;总灰分含量为8.22%～11.76%，平均值为9.83%;酸不溶性灰分为0.11%～2.30%，平均值为1.18%;浸出物含量为31.47%～40.79%，平均含量为35.63%。与药材生长环境、产地的大陆性气候、炮制等相结合，拟定药材水分限度为不得过12.0%;总灰分限度为不得过12.0%;酸不溶性灰分限度为不得过2.0%;浸出物含量限度为不得低于30.0%。山柰酚-3-O-芸香糖苷含量（%）为0.22%±0.035%（n=19），按照国家药典委员会中药质量标准研究制定技术要求，按其平均值的±20%作为限度的制定幅度，以干燥品来计算含量，拟定含量限度为不得少于0.17%，并列入该品种质量标准草案正文内容。

《中国植物志》中记载标准规定的雪白睡莲在国内产于新疆，本课题组在收集样品时发现我国云南、成都、河北等地也生长雪白睡莲。因此，本课题组将这些产地的雪白睡莲也纳入研究范围，通过数据分析得知，河北白洋淀产的水分、总灰分和酸不溶性灰分含量最高，新疆和巴基斯坦进口的次之，成都和云南产的最低;但成都和云南产的浸出物和烟花苷含量最高，新疆和巴基斯坦进口的次之，河北白洋淀产的最低。此次对睡莲花药材进行了系统研究，修订了质量标准，该标准较全面反应睡莲花药材的质量。通過此次对雪白睡莲花的初步探索，对药材流通和质量监管方面具有一定的意义。

参考文献

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京：科学出版社，1979（27）：9.

[2]刘勇民，沙吾提·伊克木.维吾尔药志：上册[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：541-544.

[3]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：维吾尔药分册[S].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1998：111.

[4]赵军，贺金华，闫明，等.维药睡莲花化学成分研究[J].中国中药杂志，2007，32（12）：1232-1234.

[5]赵军，闫明，贺金华，等.维药睡莲花中的黄酮醇苷类成分分析[J].中国现代应用药学杂志，2008，25（2）：115-117.

[6]赵军，徐芳，吉腾飞，等.雪白睡莲花酚类成分研究[J].天然产物研究与开发，2013（25）：916-918

[7]宋敏，李晨阳.雪白睡莲花中烟花苷的提取工艺研究[J].食品研究与开发，2016，37（9）：129-131.

[8]李洁，张雪洁，李柯翱，等.HPLC测定维药睡莲花中没食子酸和烟花苷含量[J].中国中医药信息杂志，2014，21（8）：92-94.

[9]李晨阳，赵军，徐芳，等.维药睡莲花没食子酸的含量测定[J].中国民族民间医药，2014，23（24）：6-9.

[10]盛萍，帕丽达·阿不力孜，张煊，等.维吾尔药材睡莲花中烟花苷的含量测定[J].中药材，2006，29（12）：1313-1314.

（收稿日期：2021-10-12编辑：陶希睿）

作者简介：赵荣梅（1981-），女，汉族，硕士，副高级实验师，研究方向为中药、民族药标准与质量评价。E-mail：409083921@qq.com

通信作者：艾买提江·阿衣甫别克（1973-），男，柯尔克孜族，博士，副主任药师，研究方向为中药、民族药标准与质量评价。E-mail：1009235058@qq.com