黄芩苷联合紫杉醇抑制胃癌细胞增殖的研究

李梁杰 井虹苏 Byar Shubh Narayan 丁紫涵 张 迪 程 开

(1. 佳木斯大学研究生院，黑龙江 佳木斯 154007；2. 佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154000； 3. 深圳市龙岗区人民医院，广东 深圳 518111)

胃癌是一个全球性的尚未解决的临床问题，全世界的总体生存统计数据很低[1]。每年新诊断出的胃癌大多数发生在亚洲和南美国家[2]。据不完全统计，2020年美国有27 000新增病例被诊断[3]。大多数胃癌病例是在疾病晚期被诊断出来的，导致总体预后不佳。胃癌的总存活率很低，在美国为31%，全球保持在25%[4]。很明显，胃癌仍然是一种致命的疾病，但是目前的治疗方案或更早的检测策略并没有有意义的方式对其加以控制[1]。

紫杉醇作为临床一线的抗肿瘤药物，在癌症治疗方面有着独特的作用，但是近几年因为其明显的毒副作用限制了其临床应用[5]。黄芩是临床常用的一味中药材，其具有良好的抗病毒、抗菌以及解热镇痛的作用效果，在保肝、抗肿瘤等方面发挥着重要的药理作用[6]。因此，本实验着重研究紫杉醇联合黄芩素对胃癌细胞的增殖抑制作用。

1 实验方法

1.1 仪器与材料

全自动酶标仪(美国Bio-TEK公司)、紫杉醇(大连美伦生物有限公司)、黄芩苷(懋康生物科技有限公司)、CCK-8试剂盒(碧云天生物)、凝胶成像系统(上海天能科技有限公司)、PCNA(碧云天生物)。

1.3 检测紫杉醇和黄芩苷作用SGC-7901细胞的存活率

将处于对数生长期的细胞配置成细胞悬液，向96孔板的各孔中加入200 μL，细胞密度为7 000个/孔，培养箱培养24 h和48 h。配置的黄芩苷的浓度为：5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、60 μg/ml、80 μg/ml；配置紫杉醇的浓度为：0.1 μmol/L、0.5 μmol/L、2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L。将黄芩苷和紫杉醇加入96孔板中，每个浓度5个复孔，培养24和48 h。然后，在每孔内加20 μL的CCK-8溶液，放入培养箱中孵育2 h后，取出96孔板，用酶标检测仪检测每孔吸光度值。选取紫杉醇浓度为10 μmol/L，黄岑苷浓度为40 μg/ml，配比好浓度后，将紫杉醇和黄芩苷按1∶1、1∶2、1∶3 的比例对SGC-7901细胞再进行上述加药实验。

1.3 统计学处理

实验数据采取SPSS17.0软件分析出来，所有数据采用均数±标准差表示。采用单因素方差分析，P<0.05时具有统计学意义。

2 结果

2.1 紫杉醇和黄芩苷对SGC-7901细胞增殖的影响

紫杉醇和黄芩苷分别作用于SGC-7901细胞24 h 和48 h后，不同浓度的紫杉醇和黄芩苷对SGC-7901细胞的存活率具有影响显著，随着紫杉醇和黄芩苷时间浓度的增加，SGC-7901细胞的存活率明显降低。具体结果见表1，表2。

表1 不同浓度紫杉醇对SGC-7901细胞存活率的影响Tab. 1 Effects of different concentrations of Paclitaxel on the survival rate of SGC-7901 cells

表2 不同浓度黄芩苷对SGC-7901细胞存活率的影响Tab. 2 Effects of different concentrations of baicalin on the survival rate of SGC-7901cells

2.2 紫杉醇联合黄芩苷对SGC-7901细胞增殖的影响

紫杉醇与黄芩苷联用后，SGC-7901细胞的存活率在48 h时紫杉醇与黄芩苷浓度比为1∶5时最低，并随时间的延长存活率也相应的下降，不同联合浓度的紫杉醇和黄芩苷对SGC-7901细胞的存活率见表3。

表3 紫杉醇联合黄芩苷对U251细胞存活率的影响Tab. 3 The effect of Paclitaxel combined with baicalin on the survival rate of SGC-7901 cells

2.3 紫杉醇联合黄岑苷对SGC-7901细胞PCNA增殖蛋白表达的影响

如图1所示，与对照组相比，紫杉醇和黄岑苷均可降低PCNA蛋白的表达量(P<0.05)，两药联合在降低PCNA蛋白表达更为显著(P<0.05)。

3 讨论

尽管手术仍是治疗胃癌的唯一有效方法，但是术前(新辅助)、术后(辅助)或围手术期加化疗，都有利于生存期的延长[7]。根据MAGIC试验(围手术期采用ECF方案化疗：阿霉素、顺铂和持续输注5-氟尿嘧啶)的发现，与单纯手术相比，多模式方法治疗局部进展期胃癌可提高总存活率[8]。目前中西医结合的方法治疗肿瘤受到广泛的关注，本实验采取的紫杉醇联合黄芩苷治疗胃癌的方法，实验结果表明，紫杉醇和黄岑苷对SGC-7901细胞的抑制作用呈时间和浓度依赖性，并且二者联合应用具有协同抗肿瘤作用。随黄芩苷浓比例升高时，抑制率成上升趋势，且均比紫杉醇和黄岑苷单独作用的抑制率高。因此可在临床治疗中采用黄芩苷和紫杉醇联合治疗胃癌患者，有望提高胃癌患者的生存率，降低化疗的毒副作用。

注：与对照组比，#表示p<0.05,##表示p<0.01; 与单药组比，*表示p<0.05 图1 紫杉醇联合黄岑苷对SGC-7901细胞PCNA