上海市某养鸡场禽白血病净化探索

卢春光 翁永刚 潘旭东 邱观连 刘宇慧 李宁 李守富

摘要 笔者以上海某鸡场为试验对象，采集血液和胎粪、泄殖腔拭子，利用禽白血病 P27 抗原 ELISA、禽白血病抗体 ELISA 和病毒分离技术，淘汰阳性鸡。选择上海某地方品种鸡，经过净化，下代鸡群各种样品阳性率下降明显，鸡白血病净化效果明显。

关键词 禽白血病;净化方案;净化探索

禽白血病病（avian leukosis，AL）由禽 C 型反转录病毒群的 病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，是严重危害养禽业的三 大肿瘤病之一。该病被我国列为动物疫病中长期规划优先防治的主要疫病之一，由于目前尚无有效的治疗方法，控制该病只能采取 净化。笔者综合运用禽白血病多种净化技术对某鸡场开展净化工 作，期望为白血病的净化提供一点参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验样品为鸡场血样、胎粪、泄殖腔棉拭子等。禽白血病 J 亚 群和禽白血病 A/B 亚群病毒 ELISA 抗体检测试剂盒、禽白血病病毒 p27 ELISA 抗原检测试剂盒均购自哈尔滨国生生物科技有限公司;胎牛血清（FBS）、DMEM 细胞培养液、胰酶消化液（0.25%）、青 链霉素溶液（100× ）、两性霉素 B，购自上海芮德生物技术有限公司;DF-1 细胞由山东农业大学动物科技学院禽病研究室赠送;其 他试剂均为国产分析纯。

1.2 试验方法

1）胎粪与泄殖腔试子检测 采集鸡胎粪 / 泄殖腔棉拭子，与 1mL 样品稀释液混匀后放入液氮反复冻融 3 次并恢复至室温，检 测禽白血病 P27 ELISA 抗原。具体操作按禽白血病病毒 p27 ELISA抗原检测试剂盒说明书检测。

2）禽白血病特异性抗体检测 采集血样 2mL，离心分离血清，然后按禽白血病 A/B 亚群和禽白血病 J 亚群 ELISA 抗体检测试剂 盒说明书要求检测禽白血病 A/B 和禽白血病 J 抗体。

3）病毒分离技术 采集 2mL 左右鸡全血 / 血浆，无菌接种于DF-1 细胞，置于含 5% CO2 的 37℃培养箱中培养 2h。然后换新鲜 培养基，继续培养 5～7d。收集液体，反复冻融 3 次后，用禽白血病 P27 抗原 ELISA 抗体试剂盒测试。

1.3 净化方案

1）基础群禽白血病检测情况 随机选取鸡 980 羽，做好标号，对 号采集泄殖腔棉拭子，检测禽白血病 P27 抗原;采集 196 羽鸡样本 进行禽白血病 A/B 亚群和禽白血病 J 亚群抗体检测，同时采集有 疑似禽白血病感染的 85 只鸡血样进行病毒分离。

2）阴性鸡群留种 一旦禽白血病 P27 抗原检测阳性，鸡及其蛋全部淘汰，阴性的才留种。

3）阴性鸡种蛋的孵化 禽白血病 P27 抗原检测阴性鸡种蛋须经 彻底消毒后用专门孵化器孵化。

4）后代阴性鸡群的选育 前期禽白血病 P27 抗原检测阴性鸡产 的蛋做好标记，孵育后采集胎粪，检测禽白血病 P27 抗原。一旦阳 性，则淘汰鸡及其所产蛋;阴性鸡以该只母鸡后代单独饲养。到 6 周龄育雏期，先采集泄殖腔棉拭子检测，淘汰禽白血病 P27 抗原检测阳性鸡。120 日龄时采集泄殖腔棉拭子检测，淘汰检测阳性鸡。后 世代的培育依此程序循环往复。在检测结果阳性率很低时可酌情 调整判定阳性的阈值。

2 试验结果

2.1 基础群禽白血病检测情况

采集 980 羽鸡泄殖腔棉拭子，采用 ELISA 方法检测禽白血病 P27 抗原，阳性率为 25%。采集 196 羽鸡的血清，检测样品中禽白血病 A/B 亚群和禽白血病 J 亚群抗体，结果分别为 12.76%和 6.12%，某些个体 2 种抗体均有检出。采集有疑似禽白血病发病的85 只鸡的全血进行病毒分离，分离率为 2.35%。表明该鸡群禽白血 病有感染，并且存在禽白血病 A/B 亚群、禽白血病 -J 亚群共感染的情况。具体情况见表 1。

2.2 第 2 代鸡群禽白血病检测情况

第 2 代鸡群出雏当天用 1.5mL 离心管收集 2，250 份胎粪检 测，阳性率为 5.6%。到第 6 周时，采集 751 份鸡泄殖腔棉拭子，阳 性率 5.85%。120 日龄时，采集 1，652 份鸡泄殖腔棉拭子，阳性率 6.11%。随机采集 211 份鸡血清，检测禽白血病 -A/B 亚群和禽白血 病 -J 亚群抗体，阳性率分别为 5.70%和 2.40%。采集疑似发病的111 份鸡全血进行病毒分离，分离率为 1.80%。这字指向一个结果：该鸡群的禽白血病感染已得到初 步控制，阳性率低于 10%，具体情况见表 2。

2.3 净化效果

经过 1 次净化，第 2 世代 120 日龄鸡群各种样品抗原阳性率 均明显下降，净化效果比较明显。具体血清禽白血病 -A/B 亚群抗 体阳性率由 12.76%降为 5.7%;血清禽白血病 -J 亚群抗体由 6.12%降为 2.4%;禽白血病 P27 抗原阳性率由 25%降为 6.11%;禽 白血病病毒分离阳性率由 5.9%降为 1.8%。

3 讨论

我国对禽白血病的研究从上世纪 90 年代就开始了，崔治中[1]首次从江苏和山东的白羽肉鸡场分离到禽白血病 -J。王倩等[2]采用 ELISA 检测试剂盒对安徽省 2017—2019 年 59 个禽场的 3，275 份 血清和 2，100 份蛋清进行禽白血病检测。本试验借鉴前人的研究方法，进行该场的禽白血病检测，通过检测结果表明该鸡场存在禽 白血病感染，且抗原阳性率较高，与上述文献报道的阳性率相近。

由此可知，上海鸡场的禽白血病感染情况也不容乐观，因此开展净 化工作迫在眉睫。 2020 年，于慧茹等[3]对上海市某原种鸡场的某地方品种 核心群开展了禽白血病净化，该鸡场净化效果显著。借鉴崔治中[4]推荐的技术方案，结合该鸡场实际育种情况，选择生长阶段的 1 日龄、6 周龄和 120 日龄 3 个时间点，通过多种检测方法联合应用的方式进行禽白血病的检测。这只是一次简 单的尝试，要想获得比较理想的净化效果，需要设计更科学的净化方 案，这项工作是一个综合性系统性工程，除了净化方案的合理外，还 需要矢志不渝的坚持检测和进行严格的生物安全管控[5]。

参考文献：

[1] 崔治中.我国鸡群 J 亚群白血病流行的过去、现在和将来及其防控[J].现代畜牧兽医，2015（1）：30-32.

[2] 王倩，王维，周迎春，等.2017-2019 年安徽省部分禽場禽白血病定点监测[J].中国动物检疫 2020，37（9）：16-20.

[3] 于慧茹，陶田谷晟，杨显超，等.上海市某原种鸡场禽白血病净化效果评估[J].畜牧与兽医，2021，53（6）：135-139.

[4] 崔治中.种鸡场禽白血病防控和净化技术方案[J].中国家禽，2015，37（23）：1-7.

[5] 晏志勋，初芹，曾另超，等.母鸡蛋清混样检测禽白血病病毒 p27 抗原的应用研究[J].畜牧与兽医，2020，52（9）：116-120.