阿胶对去卵巢小鼠雌激素的影响

★ 张晓双 白璐（.陕西中医药大学 陕西 咸阳 7046；.西安市第一医院药学部 西安 7000)

阿胶是马科动物驴及其他驴皮经煎煮浓缩制成的固体胶［1］，阿胶性甘，平，归肺、肝、肾经。阿胶药理作用广泛，有抗氧化、抗疲劳、提高免疫力、促进造血、抑制癌细胞、止血等。两千多年来，阿胶作为一种保健食品和传统中药被广泛应用于养生和临床治疗，常用于治疗妇科疾病，如阴道出血、痛经、崩漏、不孕、月经先期、复发性流产、多囊卵巢综合征、宫颈癌等［2］。临床发现阿胶具有一定的雌激素样作用。本课题组研究发现阿胶能提高正常小鼠的子宫系数，提高小鼠血清E2含量，降低小鼠血清LH和FSH的含量，使小鼠子宫内膜增厚，子宫腔增大，腺体数目增多，表明阿胶对正常小鼠具有一定的雌激素样作用［3］。本实验是在前期研究基础上，考察阿胶对去卵巢小鼠雌激素的影响。

1 方法和材料

1.1 试药

阿胶（兰州佛慈制药股份有限公司，批号：19A55）；戊酸雌二醇片（补佳乐）（法国拜耳公司，批号：283A）；Mouse Elisa E2kit，96t（森贝伽生物科技有限公司生产，批号：20191025）。

1.2 动物

雌性未孕小鼠，体重（20±2）g，购自成都达硕实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（川）2015-030。

1.3 仪器

GB-204电子天平（瑞士梅特勒）；Forma-86 ℃ ULT Freezer（美国热电Forma）；KDC-160HR 高速冷冻离心机（安徽科大创新股份有限公司）；NOVAPHTHTM全波段酶标仪（美国Bio-Rad公司）。

1.4 方法

选取健康雌性未孕小鼠，将小鼠腹位固定，腹腔注射10%水合氯醛溶液0.4 mL/10 g麻醉。在躯干下1/3，离开脊柱两侧各1～2 cm 处作纵形切口，长约1 cm，用镊子拉出脂肪团，可找到一团细线状不规则呈肉色的组织即为卵巢，下接粗大管状组织为子宫角，结扎，剪去卵巢及余线，假手术组只切除卵巢附近的脂肪，不切除卵巢，将组织推回腹腔，缝合切口，肌肉注射青霉素钠注射液4×104U/只，每日1次，连续一周，预防感染。逐只进行阴道涂片检查，每天 1次，选取连续5 d为间情期小鼠供实验用。按造模成功的小鼠体重随机分成模型对照组、阿胶高剂量组（16 g/kg）、阿胶中剂量组（8 g/kg）、阿胶低剂量组（4 g/kg）和补佳乐（0.4 mg/kg）组，每组10只，灌胃体积20 mL/kg，假手术组给予等体积生理盐水，连续灌胃30 d。末次灌胃24 h后，小鼠称体质量，采取摘眼球取血，室温静置30 min后3 000 r/min离心15 min，分离血清，Elisa法测定血清雌二醇（E2）的水平。仔细分离子宫，称重计算子宫系数。子宫系数=子宫湿重（mg）/小鼠体重（g）×10×100%。取小鼠新鲜的子宫组织经4%多聚甲醛固定48 h后，常规脱水，石蜡包埋切片，行苏木精-伊红染色。在光学显微镜下进行组织病理学检查。

1.5 统计学方法

采用 SPSS 20.0 统计软件对数据进行统计分析。所有数据用（±s）表示，组间比较采用t检验。

2 结果

2.1 阿胶对去卵巢小鼠子宫系数的影响

与假手术组相比，模型组小鼠体质量明显增加，子宫重量和子宫系数显著降低（P＜0.01），与模型组相比，阿胶三个剂量组和补佳乐组小鼠体质量明显减轻（P＜0.01），阿胶高剂量组、中剂量组和补佳乐组子宫重量和子宫系数显著增加（P＜0.01），阿胶低剂量组小鼠子宫重量和子宫系数有增高的趋势，但无统计学意义。见表1。

表1 阿胶对去卵巢小鼠子宫系数的影响（±s，n=10）

表1 阿胶对去卵巢小鼠子宫系数的影响（±s，n=10）

注：与假手术组比较，##P＜0.01；与模型组比较，**P＜0.01。

组别 剂量/（g·kg-1）体质量/g子宫重量/g子宫系数/（mg·10 g-1）假手术组 - 36.6±3.66 0.16±0.01 0.44±0.06模型组 - 42.2±3.39## 0.05±0.01## 0.12±0.04##阿胶高剂量组 16 37.7±2.41** 0.09±0.02** 0.24±0.04**阿胶中剂量组 8 38.0±2.49** 0.08±0.02** 0.20±0.04**阿胶低剂量组 4 38.1±2.13**0.06±0.01 0.15±0.04补佳乐组 0.4×10-3 35.1±1.97** 0.21±0.04** 0.59±0.10**

2.2 阿胶对去卵巢小鼠血清E2含量的影响

与假手术组比较，模型组小鼠血清E2浓度明显降低（P＜0.01）。与模型组相比，阿胶高剂量组、中剂量组和补佳乐组小鼠血清E2浓度明显升高（P＜0.05，P＜0.01）。见表2。

表2 阿胶对去卵巢小鼠血清E2含量的影响（±s，n=10）

表2 阿胶对去卵巢小鼠血清E2含量的影响（±s，n=10）

注：与假手术组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 剂量/（g·kg-1） E2 /（ng·L-1）假手术组 - 52.20±10.57##模型组 - 20.20±4.87阿胶高剂量组 16 33.30±4.00**阿胶中剂量组 8 29.80±9.82*阿胶低剂量组 4 25.60±6.70补佳乐组 0.4×10-3 78.20±16.54**

2.3 阿胶对去卵巢小鼠子宫病理学的影响

与假手术组比较，模型组小鼠子宫明显萎缩、子宫体积变小；显微镜下观察可见小鼠子宫内膜变薄，宫腔变细，腺体减少。与模型组比较，阿胶高、中、低剂量组和补佳乐组小鼠的子宫均有不同程度的改善，子宫体积增大；阿胶高剂量组和补佳乐组小鼠的子宫内膜明显增厚，子宫腺体增多，宫腔体积明显扩大，阿胶中、低剂量组子宫内膜也有所恢复。见图1。

图1 阿胶对去卵巢小鼠子宫组织病理学的影响（HE染色，×100）

3 结论

雌激素是人体内重要的类固醇激素，雌激素主要包括雌二醇（estradiol），它的生理功效最强，其次为雌酮和雌三醇。雌激素在体内含量的变化影响生殖系统、中枢神经系统、心血管系统、免疫系统、骨骼系统等［4］。卵巢是雌激素的主要来源。妇女进入绝经期后，体内雌激素水平将会快速下降，导致更年期综合症、骨质疏松症、老年性痴呆和心血管疾病等。更年期妇女采用雌激素替代疗法（estrogen replacement therapy，ERT）来治疗或预防这些绝经期易出现的症状。但长期应用雌激素易产生高血压、水肿等副作用，并增加乳腺癌及子宫内膜癌等妇科肿瘤的发病危险。因此人们一直致力于寻求雌激素替代物，期望这种替代物既能发挥雌激素对心脑血管等系统的保护作用，缓解更年期综合症，同时又能避免上述副作用，这类物质即被称为选择性雌激素受体调节剂［5］。

阿胶始载于《神农本草经》，属于胶类中药，具有补血滋阴、润燥、止血、增强机体抗病能力等功效，可单独组方用于疾病的治疗，也可与其他药物进行配伍。众多治疗经、孕、产、杂等妇科疾病的方剂中均有配伍阿胶，阿胶补血、止血、滋阴、安胎功效被普遍应用，并获得了很好的疗效，阿胶治疗不孕症，能增加患者子宫膜厚度并改善子宫内膜容受性，有利于胚胎着床［6］；阿胶可抑制卵巢颗粒细胞凋亡，改善卵巢功能［7］；阿胶能增加诱导排卵助孕周期子宫内膜的厚度，加速子宫内膜的增长并改善子宫动脉血供［8］。本研究采用卵巢切除的方法致使小鼠体内雌激素水平急剧下降，对体重、子宫系数和子宫形态都产生影响，然后给予阿胶考察其改善作用。通过与阳性对照药补佳乐的对比观察发现，阿胶对去卵巢小鼠具有拟雌激素样作用。本研究结果表明，与模型组相比，阿胶高、中、低剂量组和补佳乐组体重明显降低，阿胶高剂量组、中剂量组和补佳乐组子宫系数、血清雌二醇（E2）的含量明显升高。阿胶各组和补佳乐组具有促进子宫生长发育的作用，子宫内膜增厚，子宫腔增大，腺体数目增多。以上研究结果表明阿胶对去卵巢小鼠具有一定的雌激素样作用。阿胶中检测和分离出来的成分主要包括氨基酸、明胶、多糖、挥发性物质、无机物等，但目前阿胶中的哪部分有效成分参与了雌激素样作用尚不清楚，阿胶调节女性体内雌激素样作用的机制及其有效成分还有待于进一步研究。