4种自身抗体检测在中枢神经系统脱髓鞘疾病中的鉴别诊断价值

李云珍，李 玲，苏坤华，张 玲，姚少濠

广州金域医学检验中心，广东广州 510005

中枢神经系统脱髓鞘疾病是以中枢神经系统多灶性及炎性脱髓鞘为主的一种自身免疫系统疾病，其临床特征主要包括反复发作、多次缓解及复发。临床较为常见的中枢神经系统脱髓鞘疾病包括多发性硬化症、视神经脊髓炎、急性散播性脑脊髓炎等，近年来中枢神经系统脱髓鞘疾病发病率呈逐年升高趋势，对患者生活质量产生了严重影响，对患者身心健康构成了严重威胁。中枢神经系统脱髓鞘疾病十分复杂，仅仅通过临床症状、影像学和病理检查很难准确诊断。本研究通过检测患者血清中水通道蛋白-4(AQP4)抗体、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)抗体、 髓鞘碱性蛋白(MBP)抗体和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体，分析它们在中枢神经系统脱髓鞘疾病中的鉴别诊断价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年1月1日至2021年6月22日在广州金域医学检验中心进行中枢神经系统脱髓鞘疾病鉴别诊断套餐检测的患者1 368例为研究对象，其中视神经脊髓炎263例、脊髓炎231例、脑炎167例、中枢神经系统脱髓鞘疾病151例、肌无力142例、颅内病变119例、头痛头晕101例、多发性硬化症79例、癫痫66例、周围神经病25例、脑梗死24例；男635例，女733例；年龄1～92岁，平均(39.46±20.62)岁。

1.2仪器与试剂 赛默飞EVOS M5000正置荧光显微镜，试剂为益养生物自主研发试剂。

1.3方法 4种抗体检测试剂盒均基于细胞转染的间接免疫荧光法(CBA)，4种抗体检测原理是将AQP4、MOG、MBP、GFAP基因转染到哺乳动物细胞，在哺乳动物细胞表面特异表达4种抗原，且在转染中共表达了绿色荧光蛋白作为检测的内参。4种抗体试剂盒均将转染细胞固定在96孔微板上制成抗原片，采用CBA半定量检测人血清、血浆或脑脊液样品中的抗体。结果判断：荧光显微镜下观察，先用绿光观察细胞转染情况，若质粒转染成功，则可观察到细胞有绿色荧光；然后用红光观察，若观察到标本孔中转染成功的细胞其细胞膜有较为明显的红色荧光(非转染细胞无明显红色荧光或红色荧光明显弱于转染细胞)，且细胞膜边缘轮廓清晰，则为自身抗体阳性标本；若观察到标本孔中转染成功的细胞其细胞膜无较为明显的红色荧光、有红色荧光但边缘轮廓不清，或未转染成功的细胞均有红色荧光等情况，则为阴性标本。

2 结 果

2.1不同性别及年龄抗体阳性分布情况 1 368例患者中，抗体总阳性率(任意1种抗体阳性)为24.93%(341例)。男性阳性率为18.43%(117/635)，女性阳性率为30.56%(224/733)，男女阳性率比为1.00∶1.66；平均发病年龄为 (41.10±20.61)岁，其中0～<18岁阳性率为18.63%(49/263)，18～<40岁阳性率为27.80%(114/410)，40～<60岁阳性率为25.91%(121/467)，60～92岁阳性率为25.00%(57/228)，0～<18岁与18～40岁及40～<60岁患者抗体阳性率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。其他年龄段患者抗体阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2不同抗体阳性组合模式在不同性别间差异及平均发病年龄 4种抗体在阳性患者中有5种阳性组合模式，分别为GFAP抗体阳性、MOG抗体阳性、AQP4抗体阳性、GFAP+MOG抗体阳性和GFAP+AQP4抗体阳性，未见MBP抗体阳性。男性GFAP抗体阳性率明显高于女性，差异有统计学意义(P=0.04)，男女阳性率比为1.00∶0.64；女性AQP4抗体阳性率明显高于男性，差异有统计学意义(P<0.05),男女阳性率比为1.00∶5.24；其他抗体阳性组合模式男女间阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。不同抗体阳性患者平均发病年龄从低到高依次为MOG抗体阳性、GFAP抗体阳性、AQP4抗体阳性患者，分别为(27.49±19.53)、(39.66±19.93)、(48.38±15.23)岁。见表1。

表1 不同抗体阳性组合模式在男性和女性之间阳性率比较[n(%)]

2.3不同阳性组合模式在不同临床诊断中的阳性率比较 视神经脊髓炎4种抗体的总阳性率最高，为46.77%，其次是脊髓炎(32.90%)，再次是脑炎(23.35%)。AQP4抗体阳性率居前3位的疾病分别为视神经脊髓炎、脊髓炎和多发性硬化症；GFAP抗体阳性率居前3位的疾病分别为颅内病变、脑炎和癫痫；MOG抗体阳性率居前3位的疾病分别为脑炎、中枢神经脱髓鞘疾病和视神经脊髓炎；GFAP+AQP4抗体可见于视神经脊髓炎、脊髓炎、头痛及头晕，其他疾病未见；GFAP+MOG抗体可见于视神经脊髓炎、脊髓炎、脑炎、中枢神经系统脱髓鞘疾病和肌无力，其他疾病未见；MBP抗体在所有疾病中未检测出阳性。见表2。

表2 不同阳性组合模式在不同临床诊断中的阳性率比较[n(%)]

3 讨 论

临床实践表明，通过临床症状、病理学、影像学等进行诊断常易将不同的中枢神经系统脱髓鞘疾病混淆，影响患者治疗和预后[1-2]。中枢神经系统脱髓鞘疾病特异性抗体的发现，为准确鉴别诊断中枢神经系统脱髓鞘疾病提供了重要的实验室依据。

视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)是一组主要由体液免疫参与的抗原-抗体介导的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病。AQP4-IgG自身抗体是NMOSD特有的一种生物免疫标志物，具有高度特异性[3]。MOG-IgG相关疾病(MOGAD)是近年来提出的一种免疫介导的中枢神经系统脱髓鞘疾病，国际上提出的《MOG脑脊髓炎诊断和抗体检测专家共识》[4]和《MOG-IgG相关疾病的拟诊断标准》[5]建议把MOGAD定义为一种独立疾病谱。2020年《中国神经免疫学和神经病学杂志》发表了《抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白免疫球蛋白G抗体相关疾病诊断和治疗中国专家共识》[6]，专家共识指出MOG-IgG是MOGAD的重要生物学诊断标志物，MOG-IgG滴度与MOGAD病情严重程度相关。胶质纤维酸性蛋白星形细胞病(GFAP-A)是一种自身免疫性炎症性中枢神经系统疾病，主要累及脑膜、脑、脊髓和视神经，以发热、头痛、脑炎、脊髓炎、视力异常为主要临床特征，2016年美国梅奥医院的Lennon团队首次报道了该疾病，确认了GFAP-A是不同于多发性硬化症和NMOSD的独立疾病，并指出特异性GFAP抗体是该类疾病的生物学标志物[7]。髓鞘碱性蛋白(MBP)是构成神经髓鞘的主要成分之一，约占髓鞘蛋白总量的30%，是髓鞘中抗原性最强的蛋白质，是在中枢神经系统由少突细胞和周围神经系统雪旺细胞合成的一种强碱性膜蛋白，具有神经组织特异性[8]。当中枢神经系统病变累及髓鞘时，MBP可以进入脑脊液及血液中，通过免疫反应而产生MBP抗体，导致中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病的发生。本研究通过对中枢神经系统脱髓鞘疾病患者的血清进行AQP4、MOG、MBP、GFAP抗体检测，并分析该4种抗体在该类疾病中的鉴别诊断价值。

本研究发现1 368例患者血清中4种自身抗体检测的总阳性率为24.93%，因MOGAD和GFAP-A近年才被发现，以往的研究以AQP4抗体、MOG抗体、GFAP抗体或者两种抗体同时报道为主[2，9-12]，关于AQP4、MOG、MBP、GFAP这4种抗体同时报道的研究少有。女性总阳性率高于男性，男女阳性率比为1.00∶1.66。阳性抗体以AQP4抗体阳性率最高，女性AQP4抗体阳性率明显高于男性，男女阳性率比为1.00∶5.24；男女MOG抗体阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)，男性GFAP阳性率高于女性，男女阳性率比为1.00∶0.64。MOG抗体阳性患者平均发病年龄最小，为(27.49±19.53)岁；GFAP抗体阳性患者平均发病年龄为(39.66±19.93)岁；AQP4抗体阳性患者平均发病年龄最大，为(48.38±15.23)岁。可见MOGAD和GFAP-A好发于青年人，NMOSD好发于中年人。王倩雯等[9]和康新梅等[10]也报道，MOG抗体阳性患者中男女比例相当，未见较大差异，而在AQP4抗体阳性的患者中女性则明显多于男性。康新梅等[10]、武国良等[2]和杨华才[11]报道AQP4-IgG阳性患者平均发病年龄分别为(41.7±14.9)、(42.15±15.78)和(42.55±13.15)岁，均好发于中年人，本文研究与以上研究结论一致。另外康新梅等[10]还报道MOG-IgG 阳性患者平均发病年龄为(27.0±17.7)岁，本研究结果与之接近。杨华才[11]报道的GFAP抗体阳性率与本研究结果一致，也是男性高于女性，但该研究报道的平均发病年龄为(44.50±16.08)岁，大于本研究中报道的平均发病年龄。GFAP-A为罕见病，是一种新型的神经免疫系统疾病，目前研究数据还尚少，未来还需更多的研究数据补充。

在4种自身抗体检测中，诊断为视神经脊髓炎的患者阳性率最高，为46.77%，其次是脊髓炎(32.90%)，再次是脑炎(23.35%)。视神经脊髓炎、脊髓炎和多发性硬化症以AQP4抗体阳性为主。脑炎中抗体以GFAP抗体和MOG抗体阳性为主。AQP4抗体少见于脑炎、中枢神经系统脱髓鞘疾病、肌无力、头痛及头晕、周围神经病，在颅内病变、癫痫、脑梗死患者中未发现AQP4阳性；MOG抗体阳性率最高的是脑炎，其次是中枢神经系统脱髓鞘疾病和视神经脊髓炎；GFAP抗体在本研究所有疾病中均可以检测到。出现双抗体阳性最多的是视神经脊髓炎和脊髓炎，均伴GFAP抗体阳性，抗体阳性与GFAP-A一致[12]。本研究还发现，1 368例中枢神经系统脱髓鞘疾病患者中，无1例患者检测出MBP抗体，本研究中检测方法为CBA，以往关于MBP抗体的研究报道均采用酶联免疫吸附试验检测[13-14]，并且文献多数在2016年以前，之后显有对MBP抗体的报道，可见MBP抗体可能与中枢神经系统脱髓鞘疾病的相关性不大，或者临床并不认同MBP的诊断价值。

综上所述，AQP4抗体、MOG抗体和GFAP抗体检测可为中枢神经系统脱髓鞘疾病诊断和鉴别提供重要实验室依据，MBP抗体检测价值不大，建议取消该项检测。