动物疫病监测抽样技术规范

刘枢清

（山东省青岛市动物疫病预防控制中心，山东 青岛 266000）

动物疫病监测工作中的抽样又称采样，是从动物群体中抽取一部分样本，根据对样本的检测来推断群体疫病情况。抽样是动物疫病监测诊断工作中的重要环节，采集样品的时机，样品的处理、保存、运送等均影响到疫病监测与诊断的准确性和可靠性。

1 抽样方法

抽样的效果取决于样本是否有充分的代表性。一般采取随机抽样的方法，按照设计好的抽样策略，从总体中抽取部分单元。随机抽样时，尽可能确保每个抽样单元被抽到的概率相等且不为零。随机抽样方法包括简单随机抽样、系统随机抽样和分层随机抽样。

简单随机抽样前，对目标总群中的所有单元进行编号、记录，形成完整列表。抽样框可以是一份名单（名单抽样框）、一张地图（区域抽样框）或数据包，具有目录的性质。分层随机抽样先将总群各个单元依据抽样目的分组，再在每一组内进行随机抽样，这种方法规定了每一组提供样本的百分比，避免了小组群代表性不足，在总群构成复杂的情况下比随机抽样更精确。

2 抽样器具

保温箱或保温瓶、酒精棉、碘酒棉、2～5 mL注射器及针头，样品容器（1.5 mL 塑料离心管、易封口样品袋、塑料包装袋等），塑料盒（1.5 mL小塑料离心管专用）、封条，冰袋，不干胶标签、签字笔、记号笔、采样单、记录本等，同时备好防护口罩、一次性手套、防护服、防护帽、脚套等。

3 抽样范围和时间

3.1 抽样范围 饲养场内饲养的同日龄的畜禽为一个群体，散养的以自然村的畜禽为一个群体。

3.2 抽样时间和数量 需检测的群体应在免疫后3～4周采样，每个群体随机抽样。散养畜禽应采自5个以上农户。

4 抽样操作

4.1 鸡翅静脉采血 每只鸡采血样1.5 mL，盛于1.5 mL离心管中，待血清析出。气温低时，在保温箱中放入热水袋，再将盛血样的离心管放入，以利血清析出。析出血清后，将血清移到其他塑料离心管中，封好口，贴好标签。不同鸡的血样不能混合。

每只鸡采集泄殖腔拭子和喉气管拭子各1个，将样品端剪下分别置于2 mL 离心管（离心管预装含10%甘油的PBS），封好口，贴好标签。泄殖腔拭子采集方法是将棉拭子插入鸡泄殖腔约1.5～2 cm 旋转后沾上粪便。喉气管拭子采集方法是将棉拭子插入鸡口腔至咽的后部，直达喉气管后，轻轻擦拭并慢慢旋转，沾上气管分泌物。

4.2 猪前腔静脉采血 选取合适的针筒和针头，针筒一般为5 mL 规格的一次性针筒。由于猪的大小不同，前腔静脉的深浅不一样，故使用的针头也不同。公母猪宜选用16号50 mm针头，30 kg以上的中大猪宜选用12号38 mm针头，10～30 kg小猪可选用9 号25 mm 针头，10 kg 以下乳猪应选择9 号20 mm 针头。找准下针部位，猪的前腔静脉越往头部越浅，但也越细，越靠胸部越粗，越深。小猪取血的部位太靠前，血管小，很难扎中，而且扎中了也很难抽到血液，所以小猪的采血部位应稍靠后。中大猪和公母猪血管较粗，往后太深，针头够不到血管，所以采血部位应略靠前。20 kg以下的小猪应采两前肢与气管交汇处，公母猪和20 kg以上中大猪可选颈部最低凹处。

4.3 牛尾静脉采血向上抬举牛尾，在尾部腹侧距肛门10～15 cm处（即第4～5 或5～6尾椎交界处）常规消毒后，用牛用一次性连试管采血器（也可用5 mL的一次性塑料注射器）在尾腹侧中部凹陷处垂直刺入1 cm 左右，待针头轻微触到尾骨时，再退回1 mm左右，见有回血即可进行抽血

4.4 羊颈静脉采血 采血者用左手拇指（或食指与中指）在采血部位稍下方压迫羊静脉血管，使之充盈、怒张。采血者右手持采血针头，与皮肤呈45°迅速刺入羊皮肤及血管内，如见回血，证明已刺入，然后近似平行地将针头刺入血管内1～2cm，再放开压迫脉管的左手后收集血液。采完血后，以干棉球压迫局部并拔出针头，再以5%碘酊进行局部消毒。

5 血液样品分离

5.1 抗凝血 采血前在试管或注射器内按比例加抗凝剂，运输时减少震荡,以免溶血。

5.2 非抗凝血 待血液凝固后，让血清自然析出。析出血清选择合适容器（玻璃试管优于塑料离心管），摆成斜面，与空气接触面要大。要控制温度，最佳温度是体温，夏天避免暴晒，冬天避免结冰。如果气温高于15 ℃，可室温静置最短2 h后放入冷藏箱过夜，第2 d 用离心机以8 000 转离心1 min。如果气温偏低，要在保温箱内放置50～60 ℃的暖水袋，室温静置2 h 左右后放到37 ℃温箱1 h，再放入冷藏箱过夜，第2 d离心分离血清。

6 样品保存和运输

6.1 样品保存 血清4～8 ℃冷藏，不超过1 周；抗凝血4～8 ℃冷藏，不超过1 周；病毒检验材料短时间可冷藏，否则须-20 ℃或-70 ℃以下保存，无条件的可置灭菌50%甘油-PBS液中冷藏，不宜反复冻融；细菌检验病料冷藏，不宜冷冻，可置灭菌的30%甘油-PBS液（盐水）中冷藏。

所有冻存样品忌反复冻融。

6.2 样品运输

6.2.1 选择符合运输要求的容器装样，容器要密封、不渗漏，以免造成环境污染或疫情扩散。

6.2.2 样品应在低温下保存和运输。拭子样品和组织样品作暂时的冷藏或冷冻处理再运送。血清样品24 h 内运达则冷藏运输，超过24 h 先冷冻再冷藏运输，运输不能超过48 h。

6.2.3 样品若能在4 h 内送到实验室，可用冰袋冷藏运输。如果超过4 h，应置于-30 ℃冷冻处理，再在保温箱内加冰袋运输，并于24 h内送到。

7 注意事项

7.1 注意预防人畜共患病发生，采样人员应做好自身防护，不直接接触采样样品。

7.2 防止人为传播疫病，采样工具和防护用品，随身带走，统一消毒。

7.3 抽样前要调查动物的健康状况（包括饮食、免疫、用药等）。

7.4 采集的病料应包装完好，防止污染环境，同时做好环境消毒和病害肉的无害化处理。