pH对洁身洗液中苦参碱含量测定的影响研究*

冯敏 李晓刚 张珍 李艳鹏

(1.陕西步长制药有限公司，陕西 西安 712000；2.陕西步长高新制药有限公司，陕西 西安 710119)

洁身洗液[1]是妇科外用洗剂，由苦参、蛇床子、关黄柏、苍术、土荆皮、花椒以及野菊花七味药材制备而成的中药制剂。其中，苦参具有清热解毒，燥湿杀虫的功效，适用于湿热蕴结所致湿疹，阴痒带下[2-15]。苦参碱作为其中的主要有效成分，主要采用高效液相色谱法(HPLC)对苦参碱含量进行测定[17-26]。根据洁身洗液质量标准和操作规程进行检验，发现其苦参碱含量在相邻批次及同批次稳定性中含量测定结果差异较大，且不同人员操作差异较大，趋势难以汇总。针对此问题，本文通过研究苦参碱含量测定的影响因素，进一步改进检测操作规程，提高含量测定的准确性，为该药物的质量控制提供了新的思路及方法。

1 仪器与试剂

1.1仪器及设备 电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司，HH-4型)、高效液相色谱仪(岛津，LC-2010AHT)，酸度计(美国赛多利斯科学仪器有限公司，PB-21)。

1.2试剂 盐酸、三氯甲烷、浓氨试液、磷酸、无水硫酸钠均购自国药集团化学试剂有限公司，为分析纯；无水乙醇、乙腈为色谱纯(Thermo-Fisher公司)；精密试纸(pH 8.2～10.0，pH 0.5～5.0，杭州试三科技有限公司)，B-广泛试纸(pH 1～14，上海三爱思试剂有限公司)。

1.3试药 含量测定样品(洁身洗液，批号180401，180402，180403，180404，180405，180406，180601，180602，180603，180701，180702，180703)产自陕西步长高新制药有限公司；苦参碱对照品(批号：110805-200508，购自中国食品药品检定研究院)。

2 测定方法[17]

2.1供试品溶液的制备 精密量取本品10 mL，置分液漏斗中，用盐酸调节pH值至1～2，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，弃去三氯甲烷液，水液用浓氨试液调节pH值至9～10，用三氯甲烷振摇提取4次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，加适量无水硫酸钠脱水，滤过，无水硫酸钠用三氯甲烷20 mL分数次洗涤，洗液并入滤液中，蒸干，残渣加无水乙醇溶解，转移至50 mL量瓶中，并用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.2对照品溶液的制备 准确称取苦参碱对照品，加乙腈-无水乙醇(80∶20)制成每1 mL含苦参碱0.15 mg的溶液，即得。

2.3HPLC测定含量 利用HPLC法对苦参碱进行检测，色谱条件为：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈-无水乙醇-3.5%磷酸溶液(78∶10∶12)为流动相；检测波长220 nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于3000。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。本品每1 mL含苦参以苦参碱计，不得少于0.20 mg。

3 含量测定的影响因素

由于前期检验发现其苦参碱含量在相邻批次及同批次稳定性中含量测定结果差异较大，且不同人员操作差异较大，趋势难以汇总。故参考《中国药典》2015版[17]，查找资料，对含量测定方法中的主要影响因素“酸碱度”进行了逐步考察。分别针对盐酸调pH值、浓氨试液调pH值两个步骤，连续考察三批样品180401，180402，180403。

3.1用盐酸调pH值 分别将供试品溶液调酸性至pH为0.5、1.0、1.5(分别做平行样)，用PB-21酸度计精密调节，保持后面碱性pH 9.5相同，置高效液相色谱仪进样检测，最终实验结果(见图1A)表明三个不同酸性的样品实验结果差异不大，经SPSS 20.0分析显示三组数据之间无显著性差异，因此确定调酸这一步骤为非主要影响因素。

3.2用浓氨试液调pH值 分别将供试品溶液调碱性至pH为9.0、9.5、10.0(分别做3个重复)，用PB-21酸度计精密调节，保持前面酸性pH 1.0相同，用同一高效液相色谱仪在相同条件下检测。最终实验结果(见图1B)表明：一定程度上，苦参碱含量随着溶液碱性pH的增大而增大，与pH 9.0相比，pH 9.5时含量结果经SPSS 20.0统计学分析显示P值为0.091，二者之间无显著性差异；pH 10.0时含量结果经统计学分析显示P=0.018<0.05有显著性差异。因此确定调碱这一步骤为主要影响因素。

图1 供试品分别在盐酸调pH(A)和浓氨试液调pH(B)时的含量测定

3.3精密试纸调节 对当月生产的三批洁身洗液180401、180402、180403用精密试纸对调碱这一步骤进行进一步验证。前期分别购买了三爱思、新星两个不同厂家的精密试纸，三批成品分别做平行样。用精密试纸将酸度调为1.0，后续步骤中分别将两份平行样一份调节碱性至9.0，一份调节碱性至9.7，实验过程中观察两个不同厂家精密试纸颜色反应，发现新星厂家试纸颜色较好辨认。供试品制备完毕后，测定。

如图2所示，结果表明：碱性为9.7时测定的样品含量高于碱性为9.0时的样品，经SPSS 20.0统计学分析显示P=0.001<0.01，二者之间具有较强的显著性差异。故再次确定调碱步骤为主要影响因素。通过质量风险评估，若氨水调节pH 9.0含量低，可及时发现产品质量问题，故只降低pH调节的最高值。随即修订SOP，明确规定用精密试纸将碱性pH调至9.0～9.7。

图2 精密试纸调节pH为9.0和9.7时苦参碱的

3.4优化前后含量检测数据对比 为进一步确定该操作对洁身洗液含量测定的影响，我们选取了接下来生产的数批洁身洗液用细化后的操作规程进行进一步验证，批号分别为180404，180405，180406，180601，180602，180603，180701，180702，180703。优化前后的含量结果对比，见表1。如表1所示，改进前后测定的样品中苦参碱含量均在标准范围，改进前RSD为15.15%，改进后RSD为8.33%，可以看出相邻批次之间的误差明显降低，该结果表明：细调后的操作规程可以有效地提高批间测量值的重现性，并减少人员操作带来的个体化差异，使测量结果更加地准确。

表1 洁身洗液含量测定方法优化前后比较

3.5优化后稳定性测试 取相同条件下放置的三批洁身洗液，批号分别为180701，180702，180703。按照优化后的方法分别制备放置7 d，14 d，21 d的洁身洗液供试品溶液和对照品溶液，利用HPLC进样检测含量。三批洁身洗液稳定性趋势如图3，可以看出，细化后的操作规程分别测定的三批样品，同一批样品之间的含量结果较为接近，稳定性数据较为平稳，很好的达到了预期的执行效果。

图3 三批洁身洗液分别在7、14、21 d的稳定性测试

4 结论

本文改进了现有的洁身洗液中苦参碱含量测定的标准操作规程，通过改变氨水调节pH值范围的这一步骤，进一步将原来的pH 9.0～10.0缩小至pH 9.0～9.7之间。通过HPLC检测分析苦参碱含量，发现相邻批次之间的含量差异变小，RSD变小，样品测定的精确度更高。同时，分别检测放置不同时间的样品含量的稳定性，发现检测结果数据趋于平稳。因此，该方法的改进有利于提高洁身洗液的质量控制标准，提高样品检测的精密度，降低市场风险性，同时也可以对其他含有苦参碱中药制剂的质量控制提供参考依据。