龙岩市部分规模化猪场四种病毒性传染病的抗体水平检测与分析

李圣元 龙岩市农业学校 福建龙岩 364000

在非洲猪瘟疫情影响下，龙岩市养猪场2019 年生猪存栏量与出栏量呈现大幅度下降的趋势， 随着各猪场生物安全意识提高， 临床上常见的几种病毒性传染病得到一定缓解， 但一些重要的病毒性传染病问题仍比较突出，并呈现出新的流行特点[1]。 猪的病毒性传染病中对养猪业造成经济损失大的主要是由病毒引起的猪繁殖障碍疾病和消化道疾病[2]，该类疫病具有传播快、流行广的特点，临床上常见的主要有猪瘟、伪狂犬病、圆环病毒病以及猪繁殖与呼吸综合征等。 这些疫病通常会引起种猪不育、 精液质量下降；母猪不发情、返情及不孕等症状；妊娠母猪发生流产、早产、木乃伊胎、弱仔胎等一系列症状，在临床上一般无特效治疗方法， 大多数可用疫苗接种来达到一定的防控效果[2]。 猪群在注射疫苗后通常会产生良好的免疫效果， 但由于不同猪场的具体情况千差万别，且疫苗在运输、保存以及注射过程中难免出现纰漏，免疫失败的现象时有发生，如接种后仍然发病，未达到预定的保护期等。 因此，猪场应主动通过抗体水平监测来确认疫苗接种后是否达到理想的免疫效果，从而减少免疫失败等情况发生[2]。

龙岩市养猪规模在几十头到几百头母猪的猪场占有较大比重， 为评估龙岩市各地区猪群中四类疫病的免疫水平，本文对龙岩市各地区10 个规模化猪场母猪进行抽血检测， 用酶联免疫吸附试验（ELISA） 方法对采集的296 份血样进行抗体检测，并对数据进行分析总结。

1 材料与方法

1.1 血清样品 2019 年 3 月 1 日至 2019 年 10 月1 日，分别采集龙岩市新罗区、连城县、武平县以及长汀县等10 个不同规模化猪场母猪血样， 合计296 份。

1.2 诊断试剂与仪器 猪伪狂犬病病毒gE 糖蛋白阻断ELISA 抗体检测试剂盒、圆环病毒2 型ELISA抗体检测试剂盒、 猪繁殖与呼吸综合征抗体ELISA检测试剂盒，由金迈诗生物科技有限公司提供；猪瘟抗体 ELISA 检测试剂盒， 由 IDEXX 公司提供；Biotek 酶标仪、 洗板机等， 均由美国伯腾仪器公司提供。

1.3 操作方法与步骤 （1）配置洗涤液。 （2）血清稀释。 （3）去除抗原包被板，在相应孔内分别加入稀释的待检血清和对照血清。（4）密封抗原包被板，孵育。（5）揭去封膜板，洗板，加入酶结合底物溶液，密封孵育。 （6）重复步骤（5），加入底物溶液。 （7）室温下避光显色 10~15 min。 （8）加入终止液，混匀，15 min 内测定结果。（9）按照说明书分别在在酶标仪测定各孔OD450nm值。

1.4 判定标准 按照各试剂盒说明将读取的OD450nm值换算成所需值， 并按表1 的判定标准来判定检测结果。

表1 试验判定标准

2 结果与分析

四种疫病抗体水平检测结果见表2。 总体上看，龙岩地区部分规模化猪场免疫效果最好的是猪瘟，抗体阳性率高且变异系数低，抗体整齐度相对良好；猪繁殖与呼吸综合征抗体S/P 平均值为1.61， 处于相对合理区间，但整齐度不佳；圆环病毒2 型抗体整体免疫效果尚可，但整齐度较差；伪狂犬病病毒gE抗体阳性率偏高， 结合发现部分猪场野毒流行较为严重，需要加强其控制和净化措施。

表2 龙岩地区部分规模化猪场四种疫病抗体检测情况

2.1 猪瘟抗体水平与分析 275 份血清中共检出阳性样品257 份，整体阳性率为93.45%，变异系数为30.69%。 由图1 可见，所检大部分猪场的猪瘟抗体阳性率达到95%以上，阳性率高且抗体水平整齐度良好，但中A、J 两家猪场抗体水平一般，整齐度较差，应针对猪瘟抗体不合格的母猪进行加强免疫。

图1 规模化猪场CSF 抗体水平检测图

猪瘟，又名猪霍乱，通常以发病快、发病率高、患病后持续高热、全身出血以及白细胞减少为特征，是世界动物卫生组织（OIE）规定的必须报告的疫病之一。 根据研究报道[3]，感染猪瘟病毒的母猪会发生所谓的“母猪带毒综合征”，其数量可以达到妊娠母猪的43%，由于母猪的持续性感染，因而导致所生仔猪出现先天性免疫耐受，一旦外界条件发生改变，将会导致疫病大面积流行。 从2011-2018 年病原学监测结果来看， 中国大陆地区猪瘟发病率和病死率一直处于下降状态， 阳性带毒率从 9.26%下降到0.70%， 说明我国C 株疫苗对现有的猪瘟流行毒株能提供有效保护， 也为我国的猪瘟净化和根除提供了坚实的技术支持[4]。 但目前部分养殖场（尤其是小型养猪场）依然存在病毒污染，猪瘟控制和净化工作仍面临不少困难和挑战。

2.2 猪繁殖与呼吸综合征抗体水平与分析 292 份血清样品中， 检出阳性样品262 份， 阳性率达到89.73%，变异系数55.30%，抗体水平整齐度不佳。结合图2-图3 可以看出，A、J 两个猪场阳性率达到100%， 且离散度较低，S/P 平均值在合理范围内，说明免疫效果较为理想。 I 猪场阳性率较低，且离散度为73.22%，抗体水平均一性较差，免疫效果不理想。由图3 可以看出，F 场阳性率虽达到100%，但其S/P均值超过2.5，超过合理区间，分析可能存在蓝耳病病毒活跃的迹象。

图2 规模化猪场PRRS 抗体水平检测图

图3 规模化猪场PRRS 抗体S/P 平均值分布图

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种猪的繁殖障碍和呼吸系统疾病[2]。 目前，高致病性猪蓝耳病（HPPRRS）毒株依然是优势流行毒株。近几年来，虽然不时也有HP-PRRS 暴发的报道， 但总体上以地方性流行为主[5]。

有研究表明， 疫苗免疫的作用可以减少临床发病和病理损伤，减少患猪排毒90%以上，改善生产性能、降低发病率和病死率，且弱毒疫苗效率要优于灭活疫苗[6-7]。 猪繁殖与呼吸综合征是免疫抑制性疾病，侵害免疫系统的同时还会造成持续性感染，并具抗体依赖增强作用以及减缓抗体产生的时间[5]。 根据江斌对近年来福建省猪蓝耳病发病统计， 当前蓝耳病发病多种基因型并存， 除经典毒株 （如V2332株、CH-1R 株）和高致病性毒株（如江西株、湖南株、天津株等）外，还有毒力介于上述两者之间的新毒株（如 NADC30 株、QYYZ 株），自然感染或注射活疫苗后，猪只会出现长期带毒和排毒的现象。 因而针对I猪场阳性但无明显临床症状的情况， 不仅要选择安全高效的疫苗进行科学免疫接种， 更要加强饲养管理， 定期在饲料或饮水中添加黄芪多糖等抗病毒药物，并进行后期的预警监测工作。

2.3 圆环病毒病抗体水平与分析 294 份血清中检出阳性样品280 份，阳性率为95.24%。 由图4 可以看出， 所检大部分规模化猪场的抗体阳性率达到100%，且变异系数处于合理范围内，抗体水平比较整齐。 其中A 场阳性率仅60%，变异系数超过合理范围，S/P 平均值较低，怀疑猪场可能存在圆环病毒野毒感染， 应结合猪场猪群健康度进行评估， 必要时采取有效的生物安全措施， 降低圆环病毒野毒的威胁。

图4 规模化猪场PCV2 抗体水平检测图

猪圆环病毒病（PCVD）是由猪圆环病毒（PCV）引起的一系列相关疾病的总称，临床上具体表现为：断乳仔猪多系统衰竭综合征 （Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）、皮炎与肾病综合征（Porcine dermatitis nephropathy syndrome）、自主先天性震颤（Congenital tremors，CT）等。 PCV 属于圆环病毒科圆环病毒属，是当前发现最小的动物病毒之一，按血清学及其基因组差异可分为 PCV1、PCV2、PCV3 三种血清型，其中PCV1 被认为是猪肾细胞系中一种污染物， 已证实无致病性；PCV2 是引起PMWS 等圆环病毒相关病的主要病原之一；PCV3 于2016 年由Phan 等[8]发现并命名，多发现于患有皮炎与肾病综合征（PDNS）的患猪体内，其致病性以及现有商品化PCV2 疫苗对其免疫效力等当前尚无定论[9-10]。 2016 年 Xiao 等[11]研究表明，PCV2d 已成为在美国流行的主要基因型。

根据江斌[1]调查研究，福建省当前主要流行的圆环病毒为PCV2，但仍存在PCV3 感染；我国近几年相继报道部分省市检测出PCV3[9]，刘建奎等[12]通过对福建省猪场的圆环病毒病血清学调查发现， 近年来PCV3 感染率近12.5%。 圆环病毒病是典型的免疫抑制病，感染后会降低机体自身的免疫力，并通过免疫抑制作用影响疫苗的免疫效果。 其中PCV3 对母猪的影响较大，会引发母猪的多种繁殖疾病，如流产、木乃伊胎等。虽然当前市面上的圆环病毒病疫苗均可达到理想的免疫效果， 但猪场仍需加强饲养管理，规范引种，并做好生物安全工作以防止圆环病毒野毒感染。

2.4 伪狂犬病抗体水平与分析 伪狂犬病病毒又称猪疱疹病毒Ⅰ型、奥叶兹基氏病病毒，属于疱疹病毒科、猪疱疹病毒属[2]。 临床上可致母猪流产、不发情、返情、屡配不孕等症状；新生仔猪感染后病死率可达100%， 并伴有严重的神经症状； 保育仔猪瘦弱、“掉队”；育肥猪发病后常继发细菌感染（如传染性胸膜肺炎等）导致死亡。 当前，龙岩地区猪场所使用的疫苗主要以Bartha K61 株、HB2000 株以及上市不久的C 株为主，其中PRV 的主要毒力基因（gE基因）均缺失，可以确保疫苗的安全性且可以辨别野毒与疫苗产生的抗体，因此，使用ELISA 诊断试剂盒检测gE 抗体可以直接反映野毒的感染情况。

在292 份所检血清中检出阳性90 份，伪狂犬病野毒的平均阳性率为30.82%， 与笔者2018 年对福建省龙岩市猪伪狂犬病血清学调查的结果30.41%相近。在10 个场中，阴性场有3 个，野毒感染较为严重的为C 场，其阳性率高达91.89%，建议每年“一刀切”免疫6 次，即每2 个月1 次，并定期对猪群进行监测，最终建立新的阴性群。 整体来看，龙岩地区的伪狂犬病控制与净化仍任重而道远。

本次所检的10 个规模化猪场，猪瘟的免疫效果较好，圆环病毒病、猪繁殖与呼吸综合征的免疫阳性率较高，但各场之间抗体水平差异较大，仍需引起一定的重视。