乳腺浸润性导管癌SLeX和Maspin表达的临床病理研究

张 伟，乔树平，尚培中，刘 冰，李 伟，南润玲

(1.中国人民解放军陆军第八十一集团军医院普通外科，河北 张家口 075000；2.河北怀来世济医院普通外科， 河北 怀来 075400；3.中国人民解放军陆军第八十一集团军医院检验病理科，河北 张家口 075000)

乳腺浸润性导管癌(breast invasive ductal carcinoma，BIDC)是女性乳腺癌常见的一种病理类型，尽管采用术前新辅助化疗、手术切除、术后化疗、放射治疗、内分泌治疗、靶向治疗、中药治疗、有氧运动等多种方法综合治疗，仍有不少病人较快出现复发转移甚至死亡[1-4]。研究表明，许多肿瘤标志物与BIDC的发生发展密切相关[5-6]。SLeX(sialyl Lewis X)是细胞表面特有的一种糖类肿瘤标志物，系与选择素发生黏附作用的配体之一；Maspin(mammary serine protease inhibitor)系乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂，在细胞外基质中可与一些参与细胞生长、侵袭的因子结合发挥抑癌作用。我们应用EliVisionTMplus免疫组织化学(IHC)染色二步法检测SLeX和Maspin在BIDC及癌旁乳腺组织中的表达，探讨其与部分临床病理指标的相关性。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2014-05-2015-12月间陆军第八十一集团军医院收治的80例BIDC患者的手术切除标本，年龄29～73岁，平均(55.0±8.7)岁；癌灶直径1.0～6.5 cm，平均(3.7±2.1)cm；根据2017年《AJCC癌症分期手册(第8版)》进行TNM分期，其中T1期11例，T2期40例，T3期21例，T4期8例。根据术前彩超乳腺影像报告和数据系统(breast imaging，reporting and data system，BI-RADS)分类及其他影像学检查、冰冻报告、纳米碳示踪情况，按照诊疗规范确定手术方式。对照组30例癌旁组织取自距癌灶3 cm处的同侧乳腺。

纳入标准：①病理判定及分类明确的BIDC(非特殊性)；②术前未接受过新辅助化疗、放疗等抗癌措施；③无严重内科系统性疾病；④凝血功能正常，无出血倾向。排除标准：①病理证实的原位癌、浸润性小叶癌、硬癌、单纯癌、浸润性特殊癌或其他少见的组织类型；②并发其他部位恶性肿瘤的多元癌；③并发各种炎症性疾病；④并发妊娠或其他严重系统性疾病。

诊疗方案经医院伦理委员会审批，病人及(或)亲属均于术前知情同意并签字。

1.2 IHC染色方法

采用EliVisionTMplus IHC染色二步法检测癌组织及癌旁乳腺组织SLeX和Maspin的表达。制备石蜡切片厚度为4μm。选取与苏木精-伊红染色相邻的切片，采用微波仪修复抗原。鼠抗人SLeX即用型单克隆抗体、Maspin浓缩型单克隆抗体(工作浓度1：150)、3，3'-二氨基联苯胺显色剂和EliVisionTMplus试剂盒均购于福州迈新公司。技术步骤及阴性对照按说明书操作，阳性对照采用SLeX和Maspin阳性染色片。

1.3 判定标准

由2位病理医师联合观察判定IHC染色结果。在清晰的背景下呈黄、棕、褐色颗粒者为阳性反应。计分方法：①染色深浅度：无染色、黄色、棕黄色、黄褐色，对应计0、1、2、3分；②染色百分比：≤5%、6%～30%、31%～69%、≥70%，对应计0、1、2、3分。①和②计分相加即为定性结果：≤2分为阴性(-)，3～6分均为阳性，其中3分、4分为弱阳性(+)，5分、6分为强阳性(++)。

1.4 观察指标

①SLeX和Maspin在BIDC组织及癌旁乳腺组织中的表达部位及阳性率；②SLeX和Maspin表达与病人年龄、TNM分期、分化等级、淋巴结宏转移、术后随访5年内复发转移等临床病理指标的相关性；③BIDC组织SLeX与Maspin表达的相关性。

1.5 统计学方法

运用SPSS 22.0分析数据。SLeX和Maspin阳性计数资料采用n(%)表示，组间比较采用χ2检验，通过χ2值计算列联系数进行相关性分析。检验水准α=0.05，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 BIDC组织及癌旁乳腺组织SLeX和Maspin表达的比较

BIDC组织及癌旁乳腺组织SLeX阳性染色多见于细胞膜和细胞质(图1A～B)，Maspin蛋白阳性染色多见于细胞质和细胞核(图2A～B)。癌组织SLeX和Maspin阳性率与癌旁乳腺组织比较差异有统计学意义(均P<0.05)(表1)。

A：SLeX在BIDC组织强阳性表达 B：SLeX在癌旁乳腺组织阴性表达

A：Maspin在BIDC组织弱阳性表达 B：Maspin在癌旁乳腺组织强阳性表达

表1 BIDC组织及癌旁乳腺组织SLeX和Maspin表达比较 n(%)

2.2 BIDC组织SLeX和Maspin表达与病人临床病理指标的关系

SLeX和Maspin表达与年龄无关(均P>0.05)。在TNM T3+T4期、低分化、有淋巴结宏转移和5年内复发转移病人中，SLeX高表达，Maspin低表达(均P<0.05)(表2)。

表2 BIDC组织SLeX和Maspin表达与病人临床病理指标的关系 n(%)

表2(续)

2.3 BIDC组织SLeX和Maspin表达的相关性

80例病人SLeX和Maspin同时阳性者28例，共阳性率为35.0%；同时阴性者1例，共阴性率为1.2%。经相关性分析，SLeX和Maspin在BIDC的表达呈负相关(r=-0.33)(表3)。

表3 BIDC组织SLeX和Maspin表达的相关性 n(%)

3 讨 论

多种肿瘤标志物的异常表达及协同作用与乳腺癌的生物学特性密切相关。为了探讨SLeX和Maspin在乳腺癌的表达特点，提高研究的针对性及结果的客观性，我们选择临床常见的BIDC作为研究对象，结果显示，癌组织SLeX阳性率显著高于癌旁乳腺组织，而Maspin阳性率显著低于癌旁乳腺组织，表明两者均可视为判断乳腺良、恶性病变的标志物。

3.1 BIDC组织SLeX表达与病人年龄、TNM分期、分化等级及复发转移的关系

SLeX(即CD15s)是肿瘤标志物SLeA(即CA19-9)的同分异构体，作为细胞表面重要的黏附分子，可与血管内皮细胞选择素结合通过Lewis-Selectin转移途径导致癌转移[7-8]。近年研究发现，SLeX在正常上皮细胞多为不表达或低表达，但在肺癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌等许多癌瘤中呈异常的高表达[9-11]。有研究报道，SLeX表达与乳腺癌细胞浸润转移有关，可视为病人预后不良的标志物[12-14]。本研究通过对69例SLeX阳性表达病人进行分组对比分析，结果表明，SLeX表达与年龄无关(P>0.05)；在TNM T3+T4期、低分化和有复发转移病人中，SLeX表达显著高于TNM T1+T2期、高分化+中分化、无复发转移的病人(均P<0.05)，表明临床分期越高(癌灶越大)、分化等级越低、复发转移越早，SLeX阳性率越高。SLeX表达与BIDC恶性发展呈显著正相关，其表达上调预示易发生复发转移。

3.2 BIDC组织Maspin表达与病人年龄、TNM分期、分化等级及复发转移的关系

Maspin是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员，与丝氨酸蛋白酶抑制剂高度同源。研究发现，Maspin在正常上皮细胞多为高表达，但在宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌等多种癌瘤中呈异常表达，通过MKL-1/miR-142-5p/DNMT1/Maspin信号通路可调控乳腺癌细胞增殖和转移[15-18]。本研究通过对38例Maspin阳性表达病人进行分组对比分析，结果表明，Maspin表达与年龄无关(P>0.05)。在TNM T3+T4期、低分化和有复发转移病人中，Maspin表达显著低于TNM T1+T2期、高分化+中分化、无复发转移的病人(均P<0.05)，表明临床分期越高(癌灶越大)、分化等级越低、复发转移越早，Maspin阳性率越低。Maspin表达与BIDC的恶性发展呈显著负相关，其表达下调预示易发生复发转移。有研究发现，Maspin细胞质阳性率与细胞核阳性率比值也与乳腺癌恶性发展行为显著相关[19-20]。

3.3 BIDC组织SLeX和Maspin表达与淋巴结宏转移的关系

淋巴结转移是BIDC常见的转移途径，而前哨淋巴结转移与否对乳腺癌的治疗策略及预后评估具有重要指导价值[21-22]，利用纳米碳示踪、乳腔镜技术，有助于提高淋巴结清除的精准性和彻底性，从而使术后对转移淋巴结的IHC研究更全面可靠[23-24]。我们研究了SLeX和Maspin表达与淋巴结宏转移的关系，结果表明，有淋巴结宏转移与无淋巴结宏转移病人SLeX和Maspin表达阳性率差异有显著性(均P<0.05)，表明SLeX表达上调和(或)Maspin的表达下调均在BIDC淋巴结宏转移中发挥了重要作用。Umekita等[25]研究了乳腺癌转移前哨淋巴结Maspin mRNA表达，发现其阳性率不仅与原发癌灶Maspin表达水平密切相关，也是预测非前哨淋巴结转移、超过4枚淋巴结转移、淋巴管浸润及肿瘤大小的独立病理指标。

综上，SLeX高表达和(或)Maspin低表达均与BIDC的恶性发展密切相关，且两者表达呈负相关。检测SLeX和Maspin的表达对评估病人预后及临床治疗效果具有一定指导价值。当前，基于SLeX和Maspin的分子诊断和抗癌治疗为研究热点之一，譬如应用H2受体拮抗剂西咪替丁、FAK抑制剂等抑制癌细胞SLeX的表达、对ER阳性乳腺癌应用氧化锌纳米颗粒增强癌细胞Maspin的表达等。相信随着研究的不断深入，有望开发出针对BIDC的靶向治疗或化学治疗新制剂，推进精准个体化分子治疗的发展[7-8，26-27]。