H型高血压患者MTHFR基因C677T多态性与Hcy及血脂水平的关系*

邱 巍，陈素梅，刘东声

徐州医科大学附属宿迁医院检验科/江苏省宿迁市检验医学重点实验室，江苏宿迁 223800

高血压是一种与心脑血管疾病风险密切相关的疾病，血压水平与心血管风险呈连续、独立、直接的正相关关系[1]。目前，在我国高血压人群中，最主要的并发症是脑卒中，其次是冠心病、心力衰竭、左心室肥厚、心房颤动和终末期肾病等[2]。研究表明，我国心血管疾病发病率持续上升且病死率仍居首位，高于肿瘤及其他疾病，其危险因素主要包括高血压、血脂异常、糖尿病、慢性肾脏病、代谢综合征、睡眠障碍和大气污染等[3]。高血压作为心血管疾病的主要危险因素，常伴有高同型半胱氨酸(Hcy)、高血脂[4]。而高Hcy与叶酸代谢途径中的关键酶亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的基因多态性相关[5]。本研究分析H型高血压患者MTHFR基因C677T多态性与血清Hcy及血脂水平的关系，并对H型高血压患者进行年龄与性别的分组研究。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年1月至2019年12月在徐州医科大学附属宿迁医院诊断为H型高血压的患者404例，年龄22～95岁，其中男297例、平均年龄(59.52±12.95)岁，女 107 例、平均年龄(67.08± 12.99)岁。梁荣珍等[6]发现MTHFR基因突变与老年高血压患者的Hcy和血脂水平有一定相关性，故本研究将研究对象按年龄分为<65岁和≥65岁进行不同基因型间Hcy和血脂水平的比较。入选标准：符合《高血压基层诊疗指南：2019年》中高血压诊断标准[1]；符合《H型高血压诊断与治疗专家共识》中空腹Hcy≥10 μmol/L的标准[5]。排除标准：继发性高血压；合并严重的肝肾功能不全；存在严重心脑血管疾病及严重脏器疾病；正在服用会影响Hcy和血脂的药物。本研究经医院医学伦理学委员会批准，所有患者均知情同意。

1.2仪器与试剂 ABI 7500 PCR仪(美国赛默飞世尔公司生产)；Eppendorf 5424R离心机(德国艾本德公司生产)；Beckman AU5800(美国贝克曼库尔特有限公司生产)；MTHFR基因677C/T检测试剂盒(深圳泰乐德医疗有限公司生产)；血清Hcy检测试剂盒(深圳泰乐德医疗有限公司生产)；血脂四项检测试剂盒(广州科方生物技术股份有限公司生产)。

1.3方法

1.3.1血清Hcy及血脂水平检测 所有入组者禁食12 h后，空腹采集促凝静脉血5 mL及EDTA-K2抗凝的全血2 mL，促凝血经3 000 r/min离心15 min后检测血清Hcy、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。

1.3.2基因分型 按照MTHFR基因677C/T检测试剂盒说明书对EDTA-K2抗凝的全血标本进行基因分型。取25 μL全血标本放于1.5 mL离心管内，提取基因组DNA。反应体系：10 μL R5、0.25 μL R6、5.75 μL双蒸水和4 μL的阴性对照、阳性对照或待检样本DNA。程序设置如下：50 ℃ 2 min 1个循环；95 ℃ 2 min 1个循环；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，45个循环。荧光信号的收集定为FAM和VIC，数据的采集定在60 ℃，通过收集到的荧光信号进行分析。

2 结 果

2.1患者血脂、Hcy水平 404例患者血清Hcy水平为(18.13±6.09)mmol/L，TC水平为(4.65±1.00)mmol/L，TG水平为(1.89±0.41)mmol/L，HDL-C水平为(1.33±0.28)mmol/L，LDL-C水平为(2.74±0.78)mmol/L。

2.2基因型分组 对入组的404例患者进行MTHFR C677T基因分型：TT型130例，占32.18%；CT型184例，占45.54%；CC型90例，占22.28%。CC型为野生型，CT型为杂合突变型，TT型为纯合突变型。突变基因型为274例，占67.82%。不同基因型患者一般资料见表1。

表1 不同基因型患者一般资料

2.3不同基因型患者Hcy和血脂水平比较 TT型患者血清Hcy水平均明显高于CT、CC型(P<0.05)，而CC型患者血清Hcy水平与CT型比较差异均无统计学意义(P>0.05)。TT型患者血清TC、TG、HDL-C、LDL-C 水平与CT、CC型比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.4按年龄、性别分组的不同基因型患者Hcy和血脂水平比较 <65岁和≥65岁TT型患者的血清Hcy水平与CT、CC型比较差异均有统计学意义(P<0.05)；≥65岁TT型患者血清HDL-C水平与CT、CC基因型比较差异均有统计学意义(P<0.05)，而≥65岁TT型患者血清TC、TG、LDL-C水平与CT、CC型比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表3。男、女TT型患者的血清Hcy水平与CT、CC型比较差异均有统计学意义(P<0.05)，而男、女TC、TG、HDL-C、LDL-C水平在不同基因型间差异均无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表2 不同基因型患者Hcy和血脂水平比较

表3 年龄分组不同基因型患者Hcy和血脂水平比较

表4 性别分组不同基因型患者Hcy和血脂水平比较

3 讨 论

Hcy是一种含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物，在血浆中主要与清蛋白以二硫键形式结合[7]。Hcy有3种代谢途径：第一，是在维生素B6参与的胱硫醚缩合酶(CBS)和胱硫醚酶催化下生成半胱氨酸；第二，是甜菜碱作为甲基供体，由甜菜碱Hcy甲基转移酶甲基化成为蛋氨酸；第三，是在5-甲基四氢叶酸和维生素B12的辅助下，由甲硫氨酸合成酶催化成蛋氨酸[5]。5-甲基四氢叶酸是MTHFR还原5，10-亚甲基四氢叶酸的产物，也是血清中叶酸的主要存在形式。因此，叶酸缺乏或MTHFR活性下降都会导致血清Hcy水平升高。

目前，对于MTHFR基因多态性与Hcy及血脂水平相关性的研究多集中在C677T位点。MTHFR基因的677位密码子胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)置换后，导致222处密码子的氨基酸丙氨酸被缬氨酸取代，携带等位基因T的突变型CT型和TT型都会导致MTHFR活性下降，引起叶酸代谢障碍和血清Hcy水平升高[7]。较多的研究认为纯合突变型TT型患者血清Hcy水平显著高于杂合突变型CT型和野生型CC型[8-11]。MTHFR基因 C677T多态性与血脂水平的相关性研究结论存在差异。梁荣珍等[6]研究显示，MTHFR基因C677T的TT型患者有较高的Hcy水平，明显高于CT型和CC型，TC、TG、LDL-C水平也明显高于CT型和CC型；而本研究的结论为MTHFR基因C677T的TT型患者Hcy水平明显高于CT、CC型，≥65岁的TT型患者血清HDL-C水平高于CT、CC型，而≥65岁的TT型患者血清TC、TG、LDL-C水平与CC、CT型间差异无统计学意义(P>0.05)，与该研究结论不一致。原因可能是前者的研究对象集中在老年患者，而本研究中研究对象各年龄段均有分布，老年人的血脂代谢异常要明显重于年轻人。有研究表明，TT型患者Hcy水平高于CT、CC型，而CT型患者Hcy水平与CC型差异无统计学意义(P>0.05)，各基因型的TC、TG、HDL-C及LDL-C水平差异均无统计学意义[12-13]。而刘爽等[14]的研究表明，MTHFR基因C677T多态性与Hcy有相关性，与血脂水平无相关性，MTHFR基因A1298C和MRTT基因A66G位点与Hcy和血脂水平均无相关性。这些研究证实了在H型高血压患者中MTHFR基因C677T基因多态性与Hcy水平相关，TT型患者有较高的Hcy水平，而MTHFR基因C677T基因多态性与血脂无关。本研究的结论与众多研究的结果保持一致，在对年龄分组的分析中发现≥65岁的TT型患者血清HDL-C水平显著高于CT和CC型，说明MTHFR基因C677T基因多态性与血脂水平的相关性可能与年龄有关，但还需要进一步扩大样本量证实该结论。