饲料中添加天蚕素抗菌肽对南美白对虾免疫功能、抗病力的影响

房 媛，董林娟，王 孟，张龙龙

（陕西服装工程学院，陕西西安 712046）

南美白对虾是我国海水养殖的重要对象，其肉质鲜美、营养丰富、经济价值高，深受人们的喜爱（罗智伟等，2019；张小利等，2019）。南美白对虾的生长速度快，繁殖数量高，且后代存活率高，已成为我国市场重要的水产品之一，其市场具有广阔的发展前景（沈春蕾等，2019）。近年来，由于南美白对虾养殖规模不断增大，养殖户滥用抗生素预防疾病，导致南美白对虾的耐药性增强，造成水体大量污染，严重威胁水产品安全。与抗生素相比，天蚕抗菌肽具有蛋白分子小、安全、健康、性质稳定等优势，对宿主内细胞的影响程度较小。而天蚕素抗菌肽是一种常见的抗菌肽，已作为饲料添加剂在鱼类饲料中使用，显著提高了鱼类的生长发育（董俊等，2020）。

目前，抗菌肽作为饲料添加剂被广泛应用于鱼类养殖中，发挥了良好的作用（罗阳瑞等，2020）。研究结果表明，饲料中添加抗菌肽可显著提高鱼类的生长性能，增强机体免疫功能（张耀文等，2020）。尽管抗菌肽作为饲料添加剂在鱼类中的应用比较广泛，但抗菌肽在南美白对虾养殖中的研究较少；本文主要以南美白对虾为研究对象，分析饲料中天蚕抗菌肽的添加水平对南美白对虾免疫功能、抗病力的影响，为天蚕抗菌肽在南美白对虾养殖的合理使用量提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料天蚕素抗菌肽、玉米蛋白粉、进口鱼粉、鱼油、花生粕及玉米，矿物质原料和维生素原料均购置于嘉康饲料有限公司，南美白对虾来自当地养殖场。

1.2 饲料配方设计试验饲料成分如表2所示，南美白对虾饲料配方中天蚕抗菌肽的添加水平为0%、1%、2%、3%、4%和5%。称取所有南美白对虾饲料原料后，测定其饲料配方中营养元素含量，放入饲料破碎仪破碎，并加入水混合，制成2 mm的颗粒料，放入烘干箱干燥处理，放入4℃冰箱备用。

表2 饲料中添加天蚕素抗菌肽对南美白对虾的生长性能影响

1.3 饲养管理方法试验的南美白对虾均来自于试验和教学人工养殖基地。养殖试验在教学基地室内养殖循环桶内进行，将（2.36±0.11）g的南美白对虾随机分为对照组和试验组，对照组饲喂常规饲料，试验组在常规饲料中添加天蚕素抗菌肽，每组4个重复，每组重复44尾。正式饲养试验开始之前对循环养殖桶进行消毒处理，南美白对虾放入暂养池内暂养2周。饲养期间，每天定时投喂适量饵料，每天3次，根据天气、水温、摄食状况及时调整饵料，并记录南美白对虾的养殖情况，定时检测养殖水质状况，包括溶氧（＞6 mg/L），氨氮，pH（7.9～8.5）和水温（26.8℃），盐度为25%。饲养试验期间定期换水，溶氧程度达到9～15 mg/L，养殖试验为期8周。

表1 试验饲料配方组成 %

1.4 生长性能指标饲养试验结束后，测定南美白对虾的初体重和末体重，依据相应的公式计算南美白对虾生长发育情况，具体计算公式如下：

1.5 免疫指标测定饲养试验结束后，将南美白对虾禁食24 h，静脉采血10 mL，采用相关酶联免疫吸附试剂盒测定南美白对虾血清的酸性磷酸酶（ACP），过氧化物酶（POD），超氧化物歧化酶（SOD）的浓度，检测方法参照试剂盒说明书。

1.6 肠道酶活指标测定南美白对虾饲养周期结束后，将试验组中分别取出3条健康的南美白对虾，取出南美白对虾肠道中的沉积物，采用试剂盒检测南美白对虾肠道酶活指标，包括胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。

1.7 数据分析试验数据采用Excel表格记录，用SPSS 22.0软件进行方差分析，P＜0.05表示组间差异显著。

2 试验结果

2.1 天蚕素抗菌肽对南美白对虾的生长性能影响由表2可知，随着饲料中天蚕素抗菌肽添加水平的升高，南美白对虾的增重率和特定生长率随着饲料中天蚕素抗菌肽含量的增加先升高后下降，3%组南美白对虾的增重率和特定生长率最大，为348.2%和3.06%，与对照组有显著差异（P＜0.05）；南美白对虾的饵料系数与饲料天蚕素抗菌肽呈现负相关。随着饲料中天蚕素抗菌肽的添加水平不断上升，3%组南美白对虾的蛋白质沉淀率显著高于对照组（P＜0.05），其余组南美白对虾的蛋白质效率与对照组无显著差异（P＞0.05）。饲料中不同添加水平天蚕素抗菌肽对南美白对虾摄食率和存活率无显著影响（P＞0.05）。

2.2 天蚕素抗菌肽对南美白对虾的免疫指标影响由表3可知，随着饲料中天蚕素抗菌肽添加水平的不断增加，3%组南美白对虾的ACP含量达到最大水平，为89.69 ng/L，SOD含量达到最大水平，为27.23 U/ml，与对照组有显著差异（P＜0.05），2%组和4%组南美白对虾的ACP含量无显著差异，与对照组有显著差异（P＜0.05）；随着饲料中天蚕素抗菌肽添加水平的不断增加，3%组南美白对虾的POD含量达到最大水平，为3.54 ng/L，与对照组有显著差异（P＜0.05）；2%组和4%组南美白对虾的POD含量类似，与对照组有显著差异（P＜0.05）。

表3 饲料中添加天蚕素抗菌肽对南美白对虾的免疫指标影响

2.3 天蚕素抗菌肽对南美白对虾的肠道酶活指标影响由表4可知，随着饲料中天蚕素抗菌肽添加水平的不断上升，3%组南美白对虾的淀粉酶、胃蛋白酶和脂肪酶含量最高，分别为1.99、3.34和4.54 U/mg，与对照组差异显著（P＜0.05）；4%组和5%组南美白对虾的胃蛋白酶、淀粉酶的含量无显著差异，与对照组有显著差异（P＜0.05）；1%组和2%组南美白对虾的脂肪酶与对照组有显著差异（P＜0.05）。

表4 饲料中添加天蚕素抗菌肽对南美白对虾的肠道指标影响 U/mg

3 讨论

3.1 饲料中添加天蚕素抗菌肽对南美白对虾生长性能的影响天蚕素抗菌肽是一种广谱抗菌药物，能有效抵御外界病原菌的侵袭，参与体内的免疫反应，促进淋巴细胞的分化，增强机体免疫反应，改善肠道内部酶活性，促进肠道内部食物营养物质的消化，有利于动物的生长发育（李波和韩文瑜，2014）。在本研究中，饲料添加3%的天蚕素抗菌肽可显著提高南美白对虾的特定生长率和增重率，提高南美白对虾的生长发育速度。黄小红等（2018）研究发现，饲料中天蚕素抗菌肽的添加水平为500mg/kg可显著提高草鱼的生长发育速度，显著提高草鱼的特定生长率和增重率。王自蕊等（2014）研究发现，饲料中添加150mg/kg的天蚕素抗菌肽可显著提高湘云鲫的特定生长率和增重率，有利于湘云鲫的生长发育，一旦饲料中天蚕素抗菌肽的添加水平超过150mg/kg，湘云鲫的生长发育将会受到抑制。因此，南美白对虾的特定生长率和增重率与饲料中天蚕素添加水平息息相关。

本研究中，适宜的天蚕素抗菌肽添加水平可以促进南美白对虾肠道内部消化酶的活性，促进肠道消化速度，从而降低南美白对虾的饵料系数。随着饲料中天蚕素抗菌肽添加水平的不断上升，3%组南美白对虾的蛋白质沉淀率达到最高，提示3%添加水平有利于南美白对虾的蛋白质沉积，有利于南美白对虾的营养累积，可加快对虾的生长发育速度，降低饲料成本。且饲料中抗菌肽的添加水平对南美白对虾的存活率和摄食率不存在显著影响，提示饲料中抗菌肽与南美白对虾的摄食和存活率无关联。

3.2 饲料中添加天蚕素抗菌肽对南美白对虾的免疫功能、抗病力的影响南美白对虾肠道内消化酶对南美白对虾的消化吸收有密切联系，有助于营养物质的消化、吸收，提高饲料利用率。胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶是肠道内重要的消化酶之一，可反应肠道内部的消化能力（黄小红等，2018；王自蕊等，2014）。在本研究中，随着饲料中天蚕素抗菌肽添加水平的上升，3%组南美白对虾的淀粉酶和胃蛋白酶含量最高，提示饲料中添加适量的天蚕素抗菌肽有助于刺激南美白对虾肠道消化酶的分泌，显著提高其消化酶活性，从而提高肠道内营养物质的利用率，显著促进南美白对虾的营养物质沉积，有利于南美白对虾的生长发育。

ACP是参与动物机体免疫应答的重要活性物质，POD可参与机体内部的免疫反应，超氧化物歧化酶有效清除体内自由基的作用，是反映动物健康状态的重要指标。在本研究中，随着饲料中天蚕素抗菌肽添加水平的不断增加，3%组南美白对虾的ACP、SOD、POD含量最大，且免疫水平不断增强，提示饲料中添加适量的天蚕素抗菌肽有助于提高南美白对虾的免疫力，提高南美白对虾的免疫耐受能力和环境适应能力。饲料中天蚕素抗菌肽与内部黏膜免疫发生作用，与外来病原发生作用机制，从而刺激机体的免疫反应，增强机体免疫功效，清除外来病原菌。

4 结论

饲料中添加天蚕素抗菌肽可显著提高南美白对虾的增重率和特定生长率，提高动物的生长发育速度，有利于促进肠道消化酶的分泌，促进消化吸收，增强南美白对虾的免疫活性，提高免疫抗病力。在本次试验中，饲料中添加3%的天蚕素抗菌肽有利于南美白对虾的生长发育，增强了南美白对虾的抗病力。