T-SPOT.TB、SHBG、MLR在涂阴肺结核诊断中的应用观察

余新华 白玛贡桑 赖京玉

1 西藏八宿县人民医院感染科 854600； 2 福建省福州肺科医院院感科

结核病是由结核分枝杆菌感染所引起的慢性传染病，可侵袭多个脏器，临床以肺实质侵袭最为多见，即肺结核病[1]。肺结核病临床一般表现为常见呼吸道症状包括咳嗽、多痰、胸闷气短，病情危重甚至出现呼吸严重受限和咯血，如果能及时诊断并进行对症治疗，绝大部分患者均可痊愈。但由于临床涂阴肺结核较多，极易出现漏诊，导致病情进一步发展，极大影响了该病的临床治疗。提高诊断涂阴肺结核的敏感度成了当下研究热点[2]，既往研究显示[3-4]，性激素结合球蛋白(SHBG)在肺结核患者血清高表达，而结核感染T淋巴细胞斑点试验(T-SPOT.TB)已被大量研究证实在诊断结核感染具有良好的敏感性和特异性。同时单核/淋巴细胞比率(MLR)水平可以一定程度反映机体病原体感染的免疫情况。因此本文分析了血清SHBG、MLR水平和T-SPOT.TB以及三者联合检测对涂阴肺结核早期诊断的价值，旨在为临床涂阴肺结核诊断提供一定的参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年1月—2020年10月本院收治的60例涂阴肺结核患者作为观察组，同期随机选取60例健康体检者作为对照组。观察组纳入标准：符合涂阴肺结核的诊断标准[5]；具有活动性肺结核病变的胸部X线的影像学表现；至少3份痰标本涂片镜检结果呈阴性；经医院医学伦理委员会通过，患者及其家属知情同意并签署知情同意书。排除标准：合并其他肺部疾病；免疫系统存在障碍者；合并恶性肿瘤以及严重脏器功能障碍者。观察组男35例，女25例，年龄20～77岁，平均年龄(37.71±8.29)岁；对照组男32例，女28例，年龄19～77岁，平均年龄(37.25±9.26)岁。两组一般资料对比无明显差异(P>0.05)。

1.2 检测方法 两组对象均于清晨采集空腹外周静脉血，离心(2 500r/min，10min)，取上清，采取酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清样品中SHBG表达水平，采取血球计数仪检测MLR的值。随后进行T-SPOT.TB检测，具体操作如下：外周静脉血样品中单个核细胞则采用Ficoll法进行分离，并将分离得到的核细胞进行重悬，调整数目为2.5×106/ml。在已经包被抗γ干扰素抗体的96孔酶标板中加入细胞培养基作为空白对照，加入50μl植物血凝素作为阳性对照，然后使用ESAT-6和CFP-10抗原作为刺激源，经过酶联显色后，通过ELISPOT进行斑点的技术。T-SPOT.TB检测结果判定标准：空白孔中斑点数<10，同时阳性对照孔内斑点数>20时具有判定意义。阳性判定：空白孔中斑点数<6， 阳性对照孔、ESAT-6孔和CFP-10孔中任意一孔内斑点数减去空白孔中斑点数后≥6；阴性判定：空白对照孔中斑点数>6，阳性对照孔、ESAT-6孔和CFP-10孔中任意一孔内斑点数大于空白孔中斑点数的2倍。

1.3 观察指标 记录T-SPOT.TB检测诊断结果；比较观察组和对照组的血清SHBG、MLR水平。

2 结果

2.1 T-SPOT.TB检测结果及血清SHBG、MLR水平 观察组T-SPOT.TB阳性检测率及血清SHBG、MLR水平均高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组T-SPOT.TB检测结果及血清SHBG、MLR水平比较

2.2 血清SHBG、MLR水平联合T-SPOT.TB以对涂阴肺结核的诊断价值 经过ROC分析显示，血清SHBG、MLR水平和T-SPOT.TB以及三者联合检测的AUC分别为0.754、0.784、0.833和0.935(P<0.001)，95%置信区间范围分别为0.666～0.842，0.700～0.867，0.756～0.911，0.894～0.976。见表2、图1。

表2 血清SHBG、MLR水平和T-SPOT.TB对涂阴肺结核对涂阴肺结核的ROC分析特征

图1 血清SHBG、MLR水平和T-SPOT.TB对涂阴肺结核对涂阴肺结核的ROC分析

3 讨论

涂阴肺结核是指经过痰菌涂片抗酸染色检查为阴性，但经过非细菌学手段确认为肺结核病[6]。据统计所有肺结核患者中有40%～60%为涂阴肺结核，并且由于缺乏特异性症状和临床体征，因此临床尚无涂阴肺结核诊断的金标准，这导致一部分未检测出的涂阴肺结核患者发展为结核杆菌传染源，对我国结核病的防控造成极大的影响[7]。目前临床诊断主要依靠病原学检验，但外界因素对其影响较大，患者排菌的间断性、结核分歧杆菌的数量等，敏感度较低、时间较长，无法满足临床需求[8]。

T-SPOT.TB作为结核感染检测的新方法得到提出，是目前最灵敏的抗原特异性T细胞检测方法之一，在全世界多个国家已获批准应用于临床[9]。本文中对60例涂阴肺结核和60例健康体检者进行T-SPOT.TB，观察组显示出较高的阳性检测率，明显高于对照组，这提示T-SPOT.TB可以给临床医师对涂阴肺结核的诊断提高有力的参考。为进一步提高涂阴肺结核诊断的准确性，血清学指标作为临床辅助诊断是极其必要的，既往研究发现[10]， SHBG蛋白经过免疫组化表明其在肺结核杆菌感染患者的血清以及组织呈高表达水平，而MLR在涂阴肺结核患者和正常人血清中表达有差异显著，而体内淋巴细胞在对抗结核分枝杆菌感染中发挥重要作用。本文结果亦显示，观察组血清SHBG、MLR水平均高于对照组，提示血清SHBG和MLR与涂阴肺结核密切相关，SHBG是由人肝细胞合成的糖蛋白，可能结核病脂联素水平的升高有关，脂联素可以调节肝细胞核因子-4A从而促进SHBG高表达，而淋巴细胞则可能与结核杆菌引起的肺部炎症反应有关[11]。本研究经ROC分析显示，血清SHBG、MLR水平和T-SPOT.TB以及三者联合检测的AUC分别为0.754、0.784、0.833、0.935，这提示这三种指标检测均可应用于临床诊断涂阴肺结核，其中血清SHBG和MLR水平与T-SPOT.TB联合检测诊断涂阴肺结核诊断价值最高。

综上所述，血清SHBG和MLR水平与涂阴肺结核密切相关，均可作为预测涂阴肺结核的指标，并且血清SHBG和MLR水平与T-SPOT.TB联合检测临床效果理想，诊断价值较高。