猪弓形虫病诊断技术的研究进展

袁英，刘艳成，李广东，张涛，柴卫华，王腾，张良

（1.邯郸市动物疫病预防控制中心，河北邯郸 056000；2.兴安盟动物疫病预防控制中心；3.河北省畜牧总站，河北石家庄 050000；4.邯郸市饲料工业办公室，河北邯郸 056000）

关键字：龚地弓形虫；猪弓形虫病；诊断技术

1 概述

龚地弓形虫又称为弓形体，属于顶器门、真球虫目、肉孢子虫科、弓形虫属。 龚地弓形虫是一种具有较大公共安全危害的寄生虫， 在世界范围内广泛分布。 猫科动物为龚地弓形虫的唯一终末宿主， 人及许多脊椎动物是龚地弓形虫的中间宿主。

猫科动物感染弓形虫后， 可以通过粪便排出弓形虫的卵囊， 卵囊在适宜的外界环境中进行孢子化，从而具有感染力。 中间宿主感染弓形虫的主要途径为经口感染。 在中间宿主体内，弓形虫主要以速殖子和缓殖子两种形式存在，其中缓殖子可以在中间宿主的体内形成组织包囊。

龚地弓形虫于1908 年由法国学者Nicolle及Maneeaux 首次发现。 在我国，弓形虫病的危害仅次于疟疾和血吸虫病。 弓形虫是一种机会性致病病原体， 弓形虫感染免疫功能正常的成年人后会呈现隐性感染， 而对于免疫功能低下人群，弓形虫病是重要并发症之一，甚至可以成为致死的病因。 据相关报道， 在全世界成年人中，弓形虫的感染率约为33%，家畜的感染率可以达到10%～50%。 孕妇感染弓形虫后，会造成流产、早产、死胎、畸形胎以及婴儿先天性弓形虫病，严重妨碍了优生优育。

在畜牧业养殖中，弓形虫也是猪、牛和羊的重要寄生虫之一，其中以猪的感染率较高。 母猪感染弓形虫后，可能出现流产或早产症状；仔猪感染弓形虫后，会影响其生长发育，给养猪业带来了较大的经济损失。 由于弓形虫病会引起相关的公共卫生问题，因此，需要对弓形虫病进行相关的研究。 而临床上通常有以下几种检测方法。

2 临床检测方法

2.1 组织学诊断

可以采用病畜的体液(羊水、脑脊液或腹水等)进行涂片或做病理组织切片对弓形虫速殖子进行显微镜检查，用来诊断弓形虫的急性感染。但是， 因受体液或组织内弓形虫速殖子含量多少的影响， 此项诊断方法存在有查找速殖子较为困难的问题。

2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)

ELISA 法在临床上有着相对经济，安全性和特异性好，并且易于自动化和标准化的优点。 根据包被的抗原不同， 可以根据检测的需要进行选择，对不同的弓形虫抗体（IgM、IgA 和IgG 等）进行针对性检测。而ELIASA 法诊断弓形虫因具有易于重复、 自动化和标准化的优点在临床上应用较为广泛。

2.3 western 印迹法

Western 印迹法是一种将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，转移到硝酸纤维滤膜上， 用酶标记的特异抗体检测相应抗原的方法。 Western 印迹法主要针对弓形虫病IgM 或IgA 抗体进行检测，具有灵敏度高，特异性强的优点，但因Western 印迹法检测耗时较长， 操作较为复杂不太适用于进行弓形虫病的临床诊断。

2.4 PCR 检测法

PCR 检测法已经被广泛应用于动物及人类的各项疾病的检测， 人及动物弓形虫病的诊断也同样可以应用PCR 检测法。 PCR 检测法自1985 年被发明出来，技术水平已经非常成熟。因PCR 检测法具有灵敏度高， 特异性强等优点而易于向临床检测推广，所以应用也较为广泛。

2.5 实时荧光定量PCR 检测法

实时荧光定量PCR 检测法可以称为PCR检测技术的飞跃性进展， 实现了在扩增定性的同时对核酸进行定性及定量。 通过定量分析样本中核酸的拷贝数， 可以准确得到样本中的基因数量， 这一点对于减少假阳性的发生具有重大意义。 而且实时荧光定量PCR 检测法不存在如PCR 检测法进行开盖处理扩增产物的过程，从源头上避免了PCR 检测法进行产物分析时易造成气溶胶产生的一大问题。 因实时荧光定量PCR 检测法存在仪器较为昂贵， 操作较为复杂的不足， 不易于向基层临床进行广泛推广和应用。

3 总结

近些年来，通过各项实验研究，猪弓形虫病的诊断技术已经取得了较大的研究进展。 而对于临床检测， 我们需要根据应用场所及检测目的的不同， 合理选择相适应的猪弓形虫病诊断方法进行检测。 在众多的猪弓形虫病的诊断检测方法中，病原学诊断因高特异性、高灵敏度仍然是最为可靠的检测方法。

通过上述了解， 我们可以发现猪弓形虫病的检测方法已经非常成熟，但是，可以应用于现场， 进行快速检测的商品化检测试剂盒仍然较少。 并且现有的快速检测试剂盒存在着检出率较低的不足之处。 因此，尽快为猪弓形虫病的临床检测建立一种灵敏度高，特异性强，检测方法较为便捷，易于携带的试剂盒，应用于临床猪弓形虫病的检测便凸显出来。 可以预见，随着时代的进步，科技的发展及应用，将会给猪弓形虫病的临床检测带来质的飞跃。