肿节风三清颗粒对鸡热毒壅盛喘咳证的临床扩大疗效试验

杨善忠邓招游黄宏业唐廷崇吴文健李晓平陶卿胡庭俊何家康

(1.广西兽药制剂工程技术研究中心，广西 南宁 530007；2.广西大学动物科学技术学院，广西 南宁 530005)

鸡热毒壅盛喘咳证是以咳喘症状为主要特征的一类疾病的统称，其致病机理是由于热毒入侵肺经所致，肺气不宣，则呼吸不畅导致咳喘，肺气清肃，肺失肃降，肺气则会上逆，同样造成咳喘，从而导致脾运化受阻，肝肾气血不足，最终咳喘加重[1,2]；致病因素主要包括细菌、病毒、代谢病、饲养管理不当等[2]。临床表现为咳嗽、呼吸困难、频繁摇头伸颈、气管啰音、流鼻液等一系列症状[3]。剖检可见，上呼吸道、消化道均有出血性炎症，心包积液并伴有大量的炎性渗出，肝脏肿大，肾脏肿大有出血点，全身多处肌肉出血。该病病程长短不一，短则几天，肉鸡最长可延续至出栏，严重影响了禽类养殖的经济效益[4]。肿节风三清颗粒处方为自研方，由肿节风、射干、甘草3味药材组成，通过处方来源、处方依据及药物对鸡热毒壅盛喘咳证的处方筛选试验，经中兽医辩证施治理论组方而成[5]。前期的人工感染传染性支气管炎模型试验结果表明，肿节风三清颗粒推荐剂量对人工复制鸡热毒壅盛喘咳证具有良好的疗效[6]，为了进一步验证肿节风三清颗粒的临床治疗效果以及剂量和用药疗程的合理性，本试验使用该制剂的推荐剂量对鸡自然感染热毒壅盛喘咳证患鸡的散发病例进行了扩大临床疗效试验，以期对鸡热毒壅盛喘咳证的临床治疗提供更多理论依据及数据支持。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物

广西岑溪某鸡场散发病例，符合中兽医喘咳证热毒壅盛证型的病鸡120只。品种为广西“岑溪三黄鸡”，日龄为180日龄，体重为900～1300g。

1.1.2 受试药品

肿节风三清颗粒，广西北斗星动物保健品有限公司生产，经广西兽药监察所检验合格。规格：1g相当于原生药1.6g；250g/袋。生产批号：20101201。

麻杏石甘散，广西普大动物保健品有限公司生产，经广西兽药监察所检验合格。规格：250g/袋；生产批号：20110301。

1.1.3 试验材料

天门冬氨酸转移酶(AST)试剂盒，丙氨酸转移酶(ALT)试剂盒，白蛋白(ALB)试剂盒，总蛋白(TP)试剂盒；尿酸(UA)测定试剂盒，氯化物(Cl)测定试剂盒，肌酐(CR)测定试剂盒等，均购于四川省迈克科技有限公司；传染性支气管炎病毒(IBV)标准阳性血清，购自中国兽药监察所；蔗糖，购自北京益利精细化学品有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 鸡热毒壅盛喘咳证诊断方法的建立

1.2.1.1 流行病学调查与临床症状观察

按常规方法对鸡群进行流行病学调查。试验期间，每天观察并记录鸡的各种临床症状，如呼吸道症状、精神、饮欲、食欲等。

1.2.1.2 病理剖检

对死亡病例逐只剖检，记录内脏器官尤其是肺脏、气管、支气管、鼻窦、鼻腔和肾脏等处的病理变化。

1.2.1.3 实验室检查

微量血凝和血凝抑制(HA-HI)试验。无菌采集经过临床和病理剖检初步诊断患有热毒壅盛喘咳证病鸡的病料(鼻咽拭子)，接种于鸡胚尿囊腔培养增殖，收集尿囊液，随后将粗提病毒悬液进行蔗糖线性梯度离心进一步纯化，并通过微量(HA-HI)试验判断病毒效价。

PCR鉴定。各组随机抽取10只病鸡或者濒死状态的病鸡颈动脉放血处死，观察气管、肺脏以及肾脏病变，取气管、肺脏、肾脏冻存，参照InvitrogenTRIzol提取试剂盒说明书提取组织总RNA，按照反转录试剂盒将所提RNA反转录得到cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增，然后取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。

1.2.2 临床疗效试验

1.2.2.1 病例的选择

为蛋鸡场6月龄产蛋鸡的散发病例见热毒壅盛喘咳证候者。病鸡临床表现：大部分病鸡出现咳嗽,甩头，鼻漏，气喘,张口呼吸，气管啰音；部分鸡高热，排白色粪便，鼻窦、眼睑肿胀，眼结膜发红，精神不振，食欲、产蛋下降。依据热毒壅盛喘咳证表现的症候群以确定主症﹑次症和纳入标准。

主症：气管啰音，气喘，张口呼吸，咳嗽，甩头，高热。

次症：鼻窦、眼睑肿胀，眼结膜发红，排白色尿酸盐粪便，精神不振，食欲下降。

纳入标准：符合主症3～4项，次症1～2项。

纳入病例还按上述1.2.1要求进行部分病例的剖检和实验室检查，综合考察、选择符合条件的病鸡作为试验鸡。

1.2.2.2 试验分组及动物处理

符合病例选择标准的6月龄试验鸡120只，采用随机原则分为2组，试验药物组和药物对照组每组各60只。具体试验分组与处理见表1。

表1 试验分组与处理

1.2.2.3 饲养条件

室内双层单笼饲养，同栏舍对照，自由采食、饮水，饲料为鸡场饲料车间自行配制且不含任何药物的蛋鸡全价料。

1.2.2.4 观察指标

临床症状：试验期间，每天观察并记录鸡的临床症状，如健康状况、站姿、呼吸、精神状态、食欲、粪便、饮食量、饮水量等。观察期从第1次给药后持续到停药后第15天。从给药后每天记录疾病发展情况，最后统计治愈率和有效率。

增重情况：于试验前1d(第1天)、试验结束第2天(第22天)分别于上午采食前逐个空腹称重，并计算各组平均增重和相对增重率。

病理剖检：对死亡病例逐只剖检，记录肺脏、气管、支气管、鼻窦和鼻腔等处的病理变化。

血液生化指标：每组病鸡随机抽取20只，分别于试验前1d(第1天)、给药结束第2天(第7天)，早晨空腹翅下静脉采血，分离血清，-20℃保存，用于谷草转氨酶(AST)、尿酸(UA)等肝肾生化指标的检测。

1.2.2.5 疗效评价标准

临床疗效主要指标为气管啰音、气喘、咳嗽、高热；次要指标为鼻窦、眼睑、眼结膜、精神、食欲、粪便等状况。按治愈、显效、有效、无效作为判定。

治愈：气喘、咳嗽、气管啰音、鼻窦肿胀等消失，体温、精神、食欲、粪便恢复正常，在停药观察期内不复发，判为治愈，计算治愈率。

显效：主要症候气管啰音消失，气喘、咳嗽明显改善，体温、精神、食欲、粪便恢复正常，在停药观察期内不加重，判为显效。

有效：气管啰音消失，咳嗽、气喘等证候有较好的改善，体温、精神、食欲明显改善，在停药观察期内不加重，判为有效，根据治愈、显效和有效，计算总有效率。

无效：在试验期间，用药后临床证候没有得到改善甚至加重或死亡，或在停药观察期内复发判为无效，无效鸡数占每组试验鸡数的百分率为无效率。

1.2.2.6 疗效综合判定

依据临床疗效、增重情况、血液生化指标等做出综合评定。

1.2.3 数据分析与处理

采用统计软件SPSS 17.0对数据进行分析，计量资料以平均值±标准差表示，计数资料用卡方(X2)统计，组内用药前后比较和组间均数比较采用单因素与方差比较(ANOVA)和多重比较(LSD)，其中LSD比较是t检验。

2 试验结果

2.1 病例诊断结果

2.1.1 临床证候及病理变化

纳入标准的试验鸡临床表现：咳嗽，气喘，气管啰音，鼻窦肿胀，鼻腔有大量分泌物，结膜炎，拉白色尿酸样稀便，部分鸡体温升高达42～43℃，精神不振，食欲、产蛋下降，具体临床资料见表2。

表2 纳入标准的试验鸡临床资料

剖检病死鸡可见鼻腔、眶下窦及气管粘膜充血，气管充满黏液，肺充血、肿大、出血，气囊有豆腐渣样分泌物，肾肿大、充血，呈花斑肾，肾小管呈白色变粗，内有尿酸盐结晶，输卵管出血，蛋膜上有白色分泌物。其它器官未见明显异常。

2.1.2 实验室诊断

2.1.2.1 微量HA-HI试验结果

试验鸡病料病毒分离物经过蔗糖密度梯度离心提纯，1μg·mL-1的磷酸酶37℃处理后，具有典型的血凝性，能够凝集鸡0.5%红细胞，血凝效价均达到27以上，而且这种血凝性可以被传染性支气管炎特异抗血清所中和，证明病料中含有传染性支气管炎病毒。

2.1.2.2 PCR诊断结果

部分病死鸡的PCR鉴定如图1所示，病料在740bp附近出现了1条明显的核苷酸条带，与设计的引物大小一致，表明病鸡感染了传染性支气管炎病毒。

图1 病死鸡病料病毒基因组N基因的PCR鉴定

2.1.3 中兽医辩证

主症：呼吸困难，气喘，咳嗽，鼻窦肿胀，气管啰音或高热，拉白色尿酸盐样稀便，眼结膜发红。

证候分析：疫疠之邪侵入机体，故见高热；热毒壅盛阻于肺，痰热互结，故见气喘，咳嗽，气管啰音；痰浊阻滞致气滞血瘀，故见鼻窦肿胀，结膜发红；若热毒之邪，深入血分，即见脏腑器官喉充血、出血。

辩证：根据主症及病理解剖中实质器官肿大、充血、出血，辩证为热毒壅盛型喘咳证。

综合流行病学调查、临床症状、病理剖检﹑实验室诊断以及结合中兽医辩证，确诊病鸡所患疾病为鸡传染性支气管炎，属热毒壅盛喘咳证范畴。

2.2 临床疗效试验结果

2.2.1 药物组临床疗效测定

由表3可知，试验药物组和对照药物组的治愈率分别为61.7%和50.0%，两者差异不显著(P>0.05)，两药的总有效率分别为91.7%和86.7%，差异不显著(P>0.05)，试验药物和对照药物麻杏石甘散给药48h后，病情得到有效控制，连续用药5d，使鸡群得以恢复健康，表明肿节风三清颗粒和麻杏石甘散对鸡热毒壅盛喘咳证均具有良好的治疗作用。

表3 肿节风三清颗粒对鸡热毒壅盛型喘咳证的治疗效果(N=60)

2.2.2 试验鸡血液生化指标

由表4可知，给予肿节风三清颗粒和麻杏石甘散后均使试验鸡血液中的UA、ALB、TP、ALT、AST、Cl、CR的含量水平发生一定程度的降低，且肿节风三清颗粒极显著(P<0.01)地降低血中UA的水平，表明肿节肿节风三清颗粒可以防止尿酸盐的沉积，对肾脏具有一定的保护作用。

表4 不同时间段试验鸡血液生化指标的变化(M±S d=20)

2.2.3 平均增重

试验药物组与对照药物组的平均增重率分别为14.65%、13.04%，表明肿节风三清颗粒和麻杏石甘散对患有热毒壅盛喘咳证病鸡的增重均有一定的促进作用，且肿节风三清颗粒的增重效果略优于麻杏石甘散。

3 讨论

热毒壅盛喘咳证多因温热之邪由口鼻而入，或风寒、风热之邪入里化热，邪化热内陷壅迫于肺，肺失宣降，则见喘息[7,8]。肺主气、司呼吸，主宣降，可通过宣发作用将体内的代谢废气呼出体外，将脾传至肺的水谷精微之气散发至全身，外达皮毛；通过肃降作用吸入新鲜空气，将津液和水谷精微向下散布全身，并将代谢产物和多余液体下输于肾和膀胱[9]。肺宣发肃降不畅则会引起咳嗽、气喘等症状。因此，对于热毒壅盛喘咳证应以清宣肺热、止咳平喘原则加以治疗，麻杏石甘散治疗该病便是基于此原则[10,11]。肿节风三清颗粒复方中肿节风清热解毒，凉血化瘀，利咽和祛痰平喘的功能为针对治疗主症而设，故作为君药；射干清热解毒，降气化痰、平喘为臣药；甘草调和诸药，兼具清热解毒，化痰止咳之功，为使药。3药合用，共奏清热解毒，凉血化瘀，止咳平喘之功。本试验结果显示，肿节风三清颗粒对鸡热毒壅盛喘咳证的治愈率有效率分别为91.7%和61.7%，明显优于麻杏石甘散86.7%和50.0%；肿节风三清颗粒可显著降低血液中UA的含量(p<0.01%)，可以防止尿酸盐的形成和在肾脏及肾小管中的沉积，从而发挥保护肾功能的作用。

4 结论

综合临床疗效，试验前后血液生化指标中的尿酸含量变化及试验鸡增重情况可得以下结论：肿节风三清颗粒和麻杏石甘散对自然感染鸡热毒壅盛喘咳证均具有良好的疗效，但肿节风三清颗粒的临床总体疗效要优于对照药物麻杏石甘散；肿节风三清颗粒临床推荐用药方案，混饮，每天1.2g·kg-1体重，连用5d，是合理的。