489例听障儿童HCMV-DNA载量及抗体水平分析

2022-02-12 01:49:22关会
中国听力语言康复科学杂志 2022年1期
关键词:尿液听力标本

关会

听力障碍是临床常见的出生缺陷,约1/800~1/1000的新生儿在出生时有严重的听力丧失[1]。正常新生儿中,双侧听力障碍的发生率约0.1%~0.3%[2]。听障儿童的听觉中枢缺乏有效声音刺激,若不及时进行有效干预,可能导致患儿语言、情绪、智力等方面产生严重缺陷[2]。遗传、创伤、发热、炎症、病毒感染、中枢性疾病均可以影响听力。人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是一种含双链DNA的疱疹病毒,对人体的组织细胞具有普遍嗜性,且人群普遍易感。40%以上原因不明的听力障碍病例与HCMV感染相关[3]。本文对2010年9月~2020年12月我中心门诊489例听障儿童进行HCMV核酸和HCMV IgG抗体检测,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

观察组为2010年9月~2020年12月吉林省聋儿语言听力康复中心接受康复训练听障儿童489例。年龄3~6岁,年龄中位数为4.21岁;男性237例,女性252例。同时选取129例健康体检儿童作为对照组。观察组与对照组性别、年龄经卡方检验无明显差异。

1.2 标本采集

在知情同意前提下留取标本。观察组听障儿童在门诊就诊时采集尿液标本,对照组在健康体检时,每人留尿液约2 ml,每周1次,共计3次。观察组与对照组分别在就诊和体检时采集血液标本1~2 ml。

1.3 HCMV -DNA检测

1.3.1 尿液HCMV-DNA提取 取1.5 ml尿液标本12000 rpm离心5分钟,沉淀加50 μl DNA提取液混匀,100 ℃保存10分钟,12000 rpm离心5分钟,上清中含有HCMVDNA模板待进行PCR。

1.3.2 PCR扩增 反应体系包括PCR反应液40μl、Taq酶3μl和HCMV-DNA模板2 μl;循环条件:93 ℃→2分钟预变性,然后按93℃ 5秒→57 ℃ 45秒,40个循环,37 ℃保温1秒。每次实验均设置阴性对照和定量阳性对照(阳参范围2.5×102~4.0×107)。

1.3.3 检验结果分析 扩增曲线呈典型的S曲线且Ct值<27,则实验结果判为阳性,与阳性对照比对得出扩增标本的DNA拷贝数。尿液DNA提取及PCR扩增试剂均为广州中山大学达安基因股份有限公司产品。

1.4 HCMV-IgG抗体检测

试剂为北京贝尔生物工程股份有限公司HCMV 抗体(IgG)酶联免疫法检测试剂,实验操作严格按试剂说明书进行。<1 u/ml 为阴性;≥1 u/ml为阳性,其中1~200 u/ml为低浓度组;201~500 u/ml为中浓度组;>500 u/ml为高浓度组。

1.5 统计分析

2 结果

2.1 HCMV-DNA拷贝数

两组被试每人3份标本,3份均阳性,取3次检测的平均值,2份阳性,取2次平均值,1份阳性,1月后再次留尿液,重新检测,取阳性拷贝数的均值。结果489例听障儿童尿液HCMV-DNA阳性检出率38.24%(187/489)。187例阳性标本病毒平均浓度为3.65×105(1.34×103~2.79×107)拷贝/ml,见表1。

表1 听障儿童尿液HCMV-DNA 阳性检出率及水平

2.2 HCMV-IgG阳性检出率及水平

489例听障儿童血液HCMV-IgG抗体阳性检测率为78.32%(383/489),健康对照组儿童血液HCMV IgG抗体阳性检测率为28.68%(37/129)。听障儿童血液HCMV IgG抗体阳性检测率高,并且中高浓度例数明显高于低浓度组;两组比较HCMV IgG阳性检出率和水平均存在显著差异,见表2。

表2 听障儿童血液HCMV-IgG 抗体阳性检测率及水平

3 讨论

人群中HCMV感染率在不同国家和地区存在明显差异。欧洲国家的成年女性HCMV血清阳性率为40%,非洲和亚洲国家血清阳性率高达90%[4,5];我国育龄期妇女血清HCMV-IgG阳性率高达95%[6]。孕妇尿液HCMVDNA检出率为3.41%[7]。HCMV在人群中感染非常广泛,多为潜伏感染,当机体免疫状态发生改变时,体内病毒可被激活,刺激机体产生IgG抗体,IgG抗体可终身持续性存在。约10%婴幼儿会出现HCMV感染的相关症状[8];但HCMV原发感染后常引起终身潜伏或持续性感染[9],并对宿主的多个系统造成广泛性损伤;HCMV先天性感染可导致长期的后遗症。

本研究结果听障儿童尿液HCMV-DNA阳性检出率38.24%,与对照组比较明显增高。在儿童中有相当一部分感音神经性耳聋(sensorineural hearing loss,SNHL)与HCMV感染相关,尽管在一些患者中观察到内耳异常,HCMV可能诱发SNHL,然而,先天性HCMV感染的确切机制和听力障碍的原因尚不清楚[10]。先天性巨细胞病毒感染患儿SNHL发生率较高,且多表现为中重度及以上听力损失[11];HCMV感染会加重全面性发育迟缓婴幼儿听力障碍、智力发育障碍及粗大运动功能发育障碍程度[12]。血液HCMV IgG抗体阳性检测率观察组明显高于对照组,并且中高浓度例数明显高于低浓度组;两组比较HCMV IgG阳性检出率和水平均存在明显差异。儿童听力障碍的发生发展是否与HCMV感染相关,HCMV 感染导致听力障碍的确切机制尚不清楚。Mona等[13]早期使用标准细胞遗传学图谱的研究表明,人成纤维细胞感染HCMV可导致1q21和1q42的染色体断裂,包括基因座分别参与显性遗传和隐性遗传听力障碍。本文研究对象为已经明确诊断听力障碍儿童,年龄均大于3岁。SNHL儿童听力受损的风险与出生后第一个月尿液和血液中的病毒载量有关[10]。可能HCMV引起的听力障碍发生在生命早期,3岁后听障儿童HCMV IgM抗体可能均为阴性,本研究未进行HCMV IgM检测。听力障碍病因及发病机理尚不清楚,在听力障碍发生发展过程中是否存在HCMV持续感染,还有待进一步研究。

听力障碍约占全部新生儿出生缺陷的20%,听力障碍是新生儿常见的先天性缺陷之一[14]。HCMV感染是一个重要的公共卫生问题[15]。HCMV感染引起的听力损失程度可以发生变化,表现为波动性或渐进性听力下降[11]。早期对HCMV进行筛查,及时发现感染,对感染的控制和预后有重要意义。

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