5%烯效唑可湿性粉剂高效液相色谱分析方法研究

宋 朋，张保建，王 建，贾玉珠，赵广义，杨光鑫，石凯威

(1.山东威瑞信试验检测有限公司，山东 济南 250119；2.农业农村部农药检定所，北京 100125)

1 前言

烯效唑英文名称：Uniconazole，CAS号：83657-22-1，分子式：C15H18CIN3O，化学名称：(E)-(RS)-1-(4-氯苯基)-4，4-二甲基-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基)戊-1-烯-3-醇。烯效唑是一种广谱性唑类植物生长调节剂，对草本或木本的单子叶或双子叶作物具有强烈的抑制生长作用。具有矮化植株、防止倒伏、提高绿叶素含量的作用。烯效唑具有用量小、活性强，且不会使植株畸形，持效期长，对人畜安全的优点，可用于水稻、小麦、玉米、花生、大豆、棉花、果树、花卉等作物。烯效唑还具有高效、广谱、内吸的杀菌作用，对稻瘟病、小麦根腐病、玉米小斑病、水稻恶苗病、小麦赤霉病、菜豆炭疽病显示良好的抑菌作用。

目前国内有关烯效唑可湿性粉剂的分析方法未见公开报道。本文采用高效液相色谱法对5%烯效唑可湿性粉剂进行定量分析，该方法操作简便快捷，分离效果好，精密度和准确度均能达到定量分析的要求。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液 甲醇(色谱纯)；超纯水(电阻率18.2MΩ·cm，25℃)；烯效唑标样，已知质量分数99.3% ；5%烯效唑可湿性粉剂。

2.2 仪器 高效液相色谱仪：日立Primaide，具有二极管阵列检测器和自动进样器；日立色谱工作站；色谱柱：250mm×4.6mm(i.d.)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C18、5μm填充物。

2.3 液相色谱操作条件 流动相：ψ(甲醇：水)=75+25(V/V)；流量：1.0mL/min；柱温：30±2℃；检测波长：254nm；进样体积：10μL；保留时间：烯效唑约7.5min。典型的烯效唑标样和5%烯效唑可湿性粉剂的高效液相色谱图(图1、2)。

图1 烯效唑标样高效液相色谱图

图2 5%烯效唑可湿性粉剂高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制 称取0.05g烯效唑标样(精确至0.000 1g)，置于50mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超声波振荡5min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.4.2 试样溶液的配制 称取含烯效唑0.05g的试样(精确至0.000 1g)，置于50mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超声波振荡5min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤。

2.4.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中烯效唑峰面积分别进行平均。试样中烯效唑的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

(1)

式中：

A1──标样溶液中烯效唑峰面积的平均值；

A2──试样溶液中烯效唑峰面积的平均值；

m1──标样的质量，g；

m2──试样的质量，g；

P──标样中烯效唑的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择 通过日立Primaide高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得烯效唑的紫外波长扫描图(图3)。从图中可以看到烯效唑最大吸收波长在254nm处，在该波长处灵敏度较高，干扰较少，能够满足分析的要求，故将检测波长确定为254 nm。

图3 烯效唑的紫外光谱图

色谱柱选择250mm×4.6mm(i.d.)ZORBAX SB-C18、5um的不锈钢柱。根据烯效唑物化性质和溶剂的紫外吸收波长，选择甲醇作为溶剂溶解样品，并以甲醇和水作为流动相。将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，随着甲醇比例的增加，保留时间减小，当甲醇与水比例达到80： 20时，有杂质峰干扰烯效唑，峰纯度达不到试验要求，最终选择Ψ(甲醇：水)=75： 25作为流动相，流速1.0mL/min。该条件下，烯效唑色谱峰峰形较好，与杂质能完全分离，具有良好的精密度和准确度，并且分析时间较短，提高了工作效率。

3.2 分析方法的特异性试验 将2.4.1、2.4.2配制的烯效唑标样溶液和试样溶液，在上述色谱操作条件下进行全波段扫描、峰纯度分析。结果表明标样溶液和试样溶液中烯效唑峰纯度均>990，有效成分出峰处无其他物质干扰，符合定量分析要求。

3.3 分析方法的线性相关性试验 称取0.05g烯效唑标样(精确至0.000 1g)，置于50mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超声波振荡5min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。用移液管移取3、4、5、6、7mL上述溶液，分别置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配置成5个不同浓度的标准溶液。在上述色谱操作条件下进行分析，以烯效唑质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图4)，得到烯效唑线性回归方程为y=12 8446x-76 083，线性相关系数为0.999 5。

图4 烯效唑线性关系图

3.4 分析方法的精密度试验 从同一产品中准确称取5个试样，在上述色谱操作条件下进行分析，测得烯效唑的标准偏差为0.015，变异系数为0.29%(表1)。

表1 分析方法的精密度试验结果

3.5 分析方法的准确度试验 从已知质量分数(5.19%)的烯效唑可湿性粉剂中称取5个试样，分别加入一定量的烯效唑标样(99.3%)，在上述色谱操作条件下进行分析，测得烯效唑的平均回收率为99.72%(表2)。

表2 分析方法的准确度试验结果

4 结论

本文建立了烯效唑可湿性粉剂有效成分含量测定的高效液相色谱分析方法，试验结果表明，本方法分离效果好、线性关系良好，具有较高的精密度和准确度，分析操作简便快捷，是烯效唑可湿性粉剂产品质量控制较为理想的分析方法。