猪流行性腹泻的诊断和预防

李同斌/山东省滨州市无棣县畜牧兽医管理服务中心 251900

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）是仔猪的一种腹泻疾病，该病已经在欧洲和亚洲有报道。猪流行性腹泻与猪传染性胃肠炎（TEGV）的临床症状极为相似，但其病原是另一种传染性稍差的冠状病毒，猪流行性腹泻病毒（porcineepidemic diarrhea virus，PEDV）。哺乳仔猪在很多暴发的疾病中都不受感染。患病仔猪的主要临床症状是水样腹泻，有时会导致呕吐，死亡率可高达80%。该病毒也可以引起生长育肥猪的腹泻。尽管病毒感染成年猪后有时会导致腹泻，但大部分情况下不表现临床症状。可以通过在猪原代细胞培养物或Vero（非洲绿猴肾）细胞对病毒进行分离，也可以通过免疫荧光或ELSA 方法来检测小肠或粪便中的PEDV 抗原，通过 RT-PCR 来检测病毒RNA，或者通过证实康复猪体内病毒特异的抗体进行确定，通过上述方法以达到对该病的诊断。目前，在一些国家已经有针对该病的弱毒苗在使用。

1 流行情况

自上世纪80 年代初以来，我国就出现了PED 的区域性暴发。

2 病理变化

肠系膜血管淤血多见，肠系膜淋巴结水肿。肠道泌乳不足，作为吸收不良的指标之一。受感染的猪持续严重腹泻，在腹泻发生后3～5d 出现低到中度食欲，随后就死亡。

病毒复制发生在小肠和结肠的上皮细胞中。在小肠中，病毒使肠绒毛缩短。但与猪传染性胃肠炎病毒对于细胞的破坏率和严重程度相比，不太明显。

3 临床症状

潜伏期长达4d。受感染动物的年龄、相关的发病率和死亡率是可变的。一些农场中，所有年龄段的猪都会发病，1 周内仔猪的死亡率可能接近50%。水样腹泻加上之前的呕吐，为主要临床表现。偶尔有几只动物突然死亡，验尸发现其可出现背部肌肉明显坏死。该病毒可能会通过猪连续繁殖，持续污染大型养殖场。大部分受感染的猪约1 周后痊愈，死亡率通常较低。

4 传播方式

4.1 直或间接接触传播粪口途径是PEDV 直接传播的主要途径。在养殖场内部和养殖场之间也经常发生PEDV的间接接触传播，特别是在生物安全水平较低的情况下。其他受污染的器械包括：运输拖架、养殖场工人的手、靴子和衣服，饲料、饲料添加剂以及用于运输散装饲料或饲料袋。PEDV 在室温下保持35d 的传染性。饲料制造过程中也可发生PEDV 交叉污染。

4.2 气溶胶（间接接触）传播气溶胶是另一种传播途径，也是从养殖场到养殖场空气传播的另一条途径。患病仔猪将感染性PEDV 粒子气溶胶通过空气传播，使PEDV在仔猪群体中传播，并且新生仔猪对病毒高度敏感。雾化吸入的PEDV 并不只感染猪的肠道，但它也感染鼻腔里的上皮鼻黏膜固有层或淋巴组织中的树突状细胞携带PEDV并将其传递给CD3。然而，与新生仔猪相比，可能需要更高剂量的雾化吸入PEDV 来感染断奶和年龄较大的猪。

4.3 猪场间PEDV 直接接触或气溶胶传播速率的变化PEDV 感染和疾病的严重程度，以及PEDV 的传播能力，取决于猪群的整体免疫和健康状况以及养殖场的生物安全水平。尽管如此，PEDV 的传播性直接接触或气溶胶接触也取决于PEDV 基因群。2010 年10 月，一株变异株出现，PEDV 感染急剧增加，严重损害了养猪业。

5 诊断

对于急性腹泻的猪进行安乐死，取小肠样品做冷冻切片，通过直接免疫荧光法检测，灵敏而可靠，尤其是新生仔猪的标本。可以通过ELSA 法检测急性腹泻的猪的粪便、肠道内容物中的病毒抗原。已有报道，通过一种双向设计的 RT-PCR 检测并可在区分猪流行性腹泻病毒和传染性胃肠炎病毒，成对的血清样品，使用阻断ELSA 或间接免疫荧光法、PEDV 阳性肠冷冻切片法都可以检测到抗体。

由于PEDV 感染的迹象在临床症状和病理上与传染性胃肠炎引起的没有区别。PED 的诊断不能仅仅根据临床症状和组织病理学改变来进行。因此，必须在实验室进行鉴别诊断，以证明PEDV 或其抗原的存在。PEDV 检测方法，包括免疫荧光（IF）或免疫组织化学（IHC）检测、电镜、病毒分离、酶联免疫吸附试验（ELISA）和多种逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术已被广泛应用。考虑到它们的快速传播时间和敏感性，常规和实时RT-PCR 系统作为商用试剂盒被广泛用于流行病或地方病暴发期间的PEDV 检测，以及检疫或屠宰的猪。

许多血清学检测方法已经被用于PEDV 抗体的检测，包括间接荧光抗体（IFA）染色、ELISA 和病毒中和（VN）试验。由于新生仔猪对PEDV 的被动免疫，是否存在抗PEDV 抗体在母猪群中需要测量抗PEDV 中和抗体的数量（或滴度），特别是抗血清和初乳中S 蛋白的中和抗体，以监测母猪免疫后的免疫水平。在这方面，VN 检测对于评估仔猪从母猪身上获得的保护性抗体水平是必不可少的。然而，这种方法费时费力，不能选择性地检测代表黏膜免疫的分泌型IgA 抗体。相反，IFA 和间接ELISA 检测抗体的方法与VN 检测方法相比，具有同样的特异性，是耗时更短和更容易执行的方法。可通过监测PEDV 流行情况确定养殖场的感染状况。

6 治疗和控制

该病没有特效疗法。一般使用疫苗进行预防，一种口服的减毒活疫苗已在韩国被报道。农场里动物之间的适当的卫生控制措施是预防疾病所必需的。种猪场内如果发生疫情，良好的卫生措施有助于减缓感染的传播。

7 预防和控制

7.1 传统疫苗

1993 年，Wang 等人研制了PEDV组织灭活疫苗。通过对仔猪口服强毒PEDV，收集其肠道内容物和组织，样品经灭活后制成乳剂，注入尾底。Ma等人（1994 年）研制了一种氢氧化铝佐剂灭活疫苗，对Vero 细胞中的CV 777 株进行了减毒，猪尾部接种疫苗后，仔猪主动和被动免疫率均在85%以上。

虽然自2010 年底以来，已经试验了各种方法，包括自体疫苗、商业化疫苗和肠道内容物喂养，以控制PED的暴发，但它们的效果一直很差。一些猪场仍有反复腹泻疫情的报道。对PEDV 变异体的致病机制及其免疫应答的认识不足，限制了所使用的预防方法的有效性。在2013 年美国暴发PED 之后，Collin 等人开发了一种灭活疫苗。以分离的美国变异型PEDV株系为基础，对4 周龄仔猪进行免疫接种，灭活疫苗可激发足够的体液免疫，以防止感染。2015 年3 月，由减毒的TEGV（H 株）、PEDV（CV 777 株、GI 亚组）和PoRV（NX 株）研制的三价疫苗在中国获得批准。2015 年1 1 月，由TGEV（HB08 株）和PEDV（ZJ 08 株，GI-b 亚组）组成的双弱毒疫苗也正式投放市场。考虑到疫苗商品化（GI 基因群）与现场流行株（GII 基因群）的差异，应研制新一代疫苗，以控制PED。近年来，国内研究人员在GII基因群中根据现场流行的PEDV 株研制了二价（PEDV）和TGEV（TGEV）灭活疫苗，实验和临床资料表明，该疫苗对GII 流行的PEDV 有较好的保护作用。以GII 基因群内PEDV 变异株为基础的灭活疫苗免疫猪，其抗PEDV变异株（GII 基因群）的中和抗体滴度（GII 基因群）明显高于商业化疫苗（GI基因群）。目前，以流行的PEDV（GII基因群）为基础的疫苗在我国正处于临床复检阶段。

7.2 PEDV 灭活消毒剂及受污染拖车清理用消毒药可降低PEDV RNA 的含量，对粪便中PEDV 进行灭活。超氧化水（pH6.0）经10～90 min 接触后，在室温下也能有效地灭活PEDV。使用高压动力清洗拖车，然后进行消毒和干燥，对其去污是有效的。过氧化氢或高氧消毒剂30 min 后，在20℃的污染金属（拖车）表面有效地灭活PEDV。

7.3 畜牧管理加强生物安全，如运输拖车和其他可能受污染的器材的去污和消毒，供应安全饲料或饲料添加剂及维持猪场及猪场工人的卫生措施，是防止PEDV 直接或间接接触传播的关键。在2013～2017 年流行期间，运输拖车（19/72群；26.4%）或饲料（21/72群；29.2%）被认为是美国养猪场的主要污染动物（共计55.6%）。感染PEDV 的猪场对其他人或野生动物的蔓延也应通过高度隔离协议加以控制，在腹泻结束和疾病得到控制之前不应进行生猪贸易。

8 结语

流行病PED 的消失和再次出现表明，PEDV 能够有效地摆脱现有的疫苗接种、生物安全和控制系统。地方性PED 是一个严重的问题，由于多个PEDV 变异体出现或可能输入各国，这一问题更加严重。流行的PEDV 毒株迅速传播，造成大量的猪死亡和巨大的经济损失，以便在受影响地区预防和控制这种疾病，并研制出有效的疫苗。

高死亡率的PEDV 感染，血清阴性哺乳仔猪最可能与广泛脱水，造成严重的绒毛萎缩。在感染的哺乳仔猪中，隐窝细胞增殖增加，受损的肠上皮细胞重组，成熟的肠细胞迁移到绒毛尖端，可能不足以防止仔猪严重脱水。