畜禽肠杆菌科细菌分离鉴定及药敏试验

魏甜甜

（青岛市即墨区畜牧业发展服务中心，山东 青岛 266200）

肠杆菌科的细菌在动物养殖方面主要可致化脓性疾病、肺炎、脑膜炎、败血症、心包炎、气囊病等疾病[1-3]。肠杆菌科中某些细菌是引起动物各种感染的重要病原[3]。随着抗菌药物广泛使用，随之很快导致细菌抗药性产生等问题。选择抗菌药物时避免同一药物连续使用。要采取交替或者轮换的药物使用方法。如用于治疗败血症、心包炎、气囊病的药物较多，如氨苄青霉素、金霉素、凝霉素、庆大霉素、及磺胺类药物[4]。大肠杆菌对庆大霉素、环丙沙星、新霉素等抗菌药敏感，可以用抗生素进行治疗[5]。

1 材料与方法

1.1 病料采集

对病死猪、鸡、鸭和鹅的病变组织进行剖检，一共采集8 份样品，包括肝脏、心脏、肺脏等器官，4 种畜禽，各采集2 份样品。组织放入灭菌的塑料包中，置4 ℃ 冰箱中保存以便备用[6]。

1.2 试验方法

无菌取病料挑菌接种于培养基做好标记，恒温环境中培养24 h，对分离菌株进行革兰氏染色后进行镜检。取4 % DE1KOH 溶液10 µl 滴于洁净的玻璃片上，接种环挑取数个菌落与KOH 溶液充分混匀，上提接种环，观察是否出现3～9 mm 的拉丝的现象。对细菌分别进行枸橼酸盐琼脂斜面接种、五糖发酵管接种以及吲哚实验、MR 实验、VP 等实验[7-9]。

2 结果与分析

2.1 菌株采集分离和培养

麦康凯培养皿上共有8 种菌生长，平板均生长黄色及红色两种颜色菌落，分别挑取这两种颜色的菌落在培养基上进行2 次划线分离。分离细菌在麦康凯培养基37 ℃ 恒温培养24 h 后，部分形成桃红色、光滑、中等大小的菌落，部分形成黄色半透明菌落，部分没有细菌生长。最终从4个养殖场，8 份样本中，分离到8 株肠杆菌。

2.2 革兰氏染色

将所有菌株进行革兰氏染色后发现，在镜下观察到短小的、淡红色的杆状细菌，确定8 株菌株均为革兰阴性菌。

2.3 拉丝实验

结果如表1 所示，除鹅1 一株菌拉丝成阳性外，其余菌株均出现拉丝情况，表明除鹅1 为革兰氏阳性菌，其余均为革兰氏阴性菌。

表1 拉丝实验结果

2.4 生化实验

试验分离培养菌株猪1-2、鸡1-2、鹅2 为大肠杆菌。分离菌株鸭2 为沙门氏菌。鹅1 不利用乳糖，I、M、V、C 为“++--”，符合志贺氏菌的特征。鸭1 利用乳糖，I、M、V、C 为“++-+”，符合变形杆菌特征。

2.5 药敏试验

药敏结果显示，8 株肠杆菌分离株对15 种抗生素耐药率在0 %～ 100 %。2 株鸡源及2 株猪源细菌对青霉素、阿莫西林素等药物的耐药率达90 % 以上。2 株鸭源细菌对青霉素、氨苄西林等药物的耐药率达90 % 以上。2 株鹅源细菌对林可霉素、阿莫西林等药物的耐药率达95 % 以上。对15 种抗生素均耐药的菌株为5 株，对12种抗生素耐药的菌株为7 株，其多重耐药率为87.5 %。

表2 革兰氏染色及生化实验结果

表3 菌株的药物敏感性（抑菌圈直径）测定 （mm）

3 讨论与结论

本试验为了解青岛地区肠杆菌耐药性，共采集4 个养殖场内8 份病料，经过生化实验等试验分离出8 株肠杆菌。试验表明鸭和鹅分离菌株抗药性以高度敏感为主，多粘菌素B 以中度敏感为主，林可霉素、青霉素、氨苄西林和阿莫西林以低度敏感为主。猪和鸡的分离菌株耐药性高，与养殖场内过度使用抗生素药物有关。15 种抗生素药物种仅有多粘菌素B 以中度敏感为主，这可能与养殖场中更少使用这类抗生素有关。多重耐药肠杆菌的出现对生物卫生造成威胁，本试验表明养殖场中87.5 % 肠杆菌呈多重耐药。

抗生素发现之前，细菌引起的疾病对畜牧业生产造成主要威胁[11-13]。由于抗生素的大量使用，动物发病和死亡率明显下降。随着抗生素大量使用，特别是越来越多抗生素滥用问题产生，细菌对抗生素敏感度越来越低，细菌对抗生素产生了抗药性[14-15]。肠杆菌科细菌是动物肠道内的常在菌，也是非常敏感的菌株。肠杆菌病的产生与养殖场内的饲养管理、合理用药等因素有密切的关系，因此，临床防治肠杆菌病，不仅要注意抗生素药物使用剂量等，养殖场还应注意饲养管理，不混群饲养，同时增强消毒意识，从而降低环境中致病菌的产生，减少致病菌对动物机体的侵害。