中药复方抑菌液的体外抑菌性能研究

王佳慧 张红强 张佳美 陈 跃

（1.山西振东制药股份有限公司，山西长治，047100；2.山西振东健康生物科技股份有限公司，山西长治，047100）

化学防腐剂以其价格低廉、防腐效果好而被广泛应用。但现己发现，它们对人们的身体健康有不良影响，应严格限制其在产品中的用量。因此，开发高效、广谱、安全、稳定且便宜的新型天然防腐剂具有重要的意义[1]。

我国中草药资源丰富、历史悠久，现代研究发现，传统中草药具有显著的抗菌、抑菌作用。同现今广泛使用的抗生素以及化学防腐剂相比，中草药中所含的抗抑菌物质具有毒副作用小、安全性高等优点。因此，以中草药提取物代替化学防腐抑菌剂，已成为诸多领域研究的新热点[2]。

本文主要研究不同提取方法提取的清热解毒类、清热燥湿类药物的中药复方制剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的体外抑菌效果。以《中国药典》的相关记载为依据，选取板蓝根、牛蒡子、蒲公英、公丁香、金银花、苦参、蛇床子、甘草为中药复方进行抑菌效果研究。其抑菌作用可能是由于这些药物中富含的黄酮类、生物碱类、有机酸类、酚类等中药活性成分能协同破坏细胞膜、细胞壁，影响能量代谢，抑制菌体蛋白质和核酸的合成[3]。

本研究的目的在于筛选长效广谱高效的中药抑菌液。所用供试菌分别代表G+细菌群，G-细菌群、酵母菌和丝状真菌群，具有菌群代表性，每次试验重复3次，试验结果具有代表性和可靠性[4]。

1 材料

1.1 菌株

金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，白色念珠菌均由中国食品药品检定研究院提供。

1.2 试剂

改良马丁琼脂培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基均由北京三药科技开发公司提供，无水硫酸氢二钠由国药集团化学试剂有限公司提供，氯化钠、磷酸二氢钾由天津市永大化学试剂有限公司提供。

1.3 中药

苦参、蛇床子、金银花、丁香、蒲公英、板蓝根、牛蒡子、甘草均由山西道地中药材有限公司提供。

2 方法

2.1 中药提取液制备

2.1.1 中药组方

板蓝根20 g、牛蒡子20 g、蒲公英20 g、公丁香40 g、苦参40 g、蛇床子10 g、金银花10 g、甘草10 g。

2.1.2 中药提取

（1）水提液制备：按照配方称取中药，第一次加8倍于中药的去离子水浸泡1 h，加热至微沸，煎煮1.5h，用200目筛滤过；煎煮2次，合并所得药液，浓缩至相应体积，使其终浓度为1.00 g/ml，100 ℃30 min灭菌，装瓶并置于4 ℃冰箱保存待用。

（2）醇提液制备：按照配方称取中药，分别加入20%、40%、60%、80%的酒精溶液，加热至微沸，回流提取1.5 h，用200目筛滤过；加热回流提取2次，合并所得药液，60 ℃，-0.08 MPa条件下减压浓缩将酒精除去，使其终浓度为1 g/ml，100 ℃、30 min灭菌，装瓶并置于4 ℃冰箱保存待用。

2.2 抑菌率检测

2.2.1 菌种制备

在无菌条件下，将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌接入对应的试管斜面营养琼脂培养基上，于37 ℃恒温箱内培养48 h，然后置于0~4 ℃冰箱中冷藏备用。分别用接种环挑取少许菌体置于装有9 ml无菌生理盐水的试管内，振荡摇匀，制成菌悬液。调整菌悬液浓度，使其含菌量为106 cfu/ml[5]。

在无菌条件下，将白色念珠菌接入相对应的试管斜面改良马丁琼脂培养基上，于28 ℃恒温箱内培养72 h，然后置于0~4 ℃下冷藏备用。分别用接种环挑取少许菌体置于装有9 ml无菌生理盐水的试管内，振荡摇匀，制成菌悬液。调整菌悬液浓度，使其含菌体量为105 cfu/ml。

2.2.2 抑菌检测方法

按照《一次性使用卫生用品卫生标准》[6]GB15979-2002进行抑菌性能检测，每组实验重复3次。

2.2.3 稳定性测试方法

选取对3种菌的抑菌效果都比较好的2、3、4、5号提取液，进行抑菌稳定性测试。

取以上中药提取液各2份，一份加入0.5%的D-异抗坏血酸钠，一份不加，分别放入温度为37 ℃、湿度75%的恒温箱内3个月。最后，取出恢复至室温，再进行同样抑菌率测试。通过比较封存前后抑菌率的变化，评价其抑菌稳定性。

2.2.4 评价标准

（1）抑菌率≥50%～90%，产品有抑菌作用，抑菌率≥90%，产品有较强抑菌作用。

（2）样品经37 ℃加速试验，其杀菌率或抑菌率达到（1）中规定的标准值，样品抑菌作用在室温下至少保持2年。

3 结果分析

3.1 不同提取方法所得中药液的抑菌率结果

见表1～表3。

表1 对白色念珠菌的抑菌率结果

表2 对金黄色葡萄球菌的抑菌率结果

表3 对大肠杆菌的抑菌率结果

水提液对白色念珠菌无抑菌效果，醇提液对白色念珠菌的抑菌率均＞50%，表明醇提液抑菌效果优于水提液，且提取介质中酒精浓度含量越高抑菌效果越好。

本文收治的对象为80例胰腺癌患者，收治的时间为2017年9月—2018年9月，根据电脑随机的方式，将观察对象分为两组，即常规组、研究组各40例。研究组中男性观察对象20例，女性观察对象20例，年龄30～77岁，平均（53.3±5.5）岁；病程3个月～3年，平均（19.1±2.4）个月。常规组中男性观察对象22例，女性观察对象18例，年龄30～78岁，平均（53.5±5.4）岁；病程2个月～3年，平均（19.2±2.2）个月。两组资料客观对比，P值＞0.05，无差异统计学意义，可分组研究。均签署研究同意书；通过医学伦理委员会审查；经病理检查予以确定。排除精神异常、意识障碍、心脑血管严重疾病者。

水提液对金黄色葡萄球菌的抑菌率＞50%，表明有抑菌效果，其余4种醇提液抑菌率＞90%，抑菌效果较强，醇提效果优于水提。

5种提取液对大肠杆菌的抑菌率＞90%，抑菌效果较强，不同提取方法对大肠杆菌的抑菌率无明显区别。

以上实验结果表明，水提液对细菌的抑菌效果较好，是因为蒲公英、板蓝根、甘草等富含的多糖类物质对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有抑制作用，而对白色念珠菌的抑菌效果不明显。随着提取介质中酒精含量增高，黄酮类、生物碱类、酚类、有机酸类物质含量增加，这几类物质对这3种菌均有较好的抑制作用。

3.2 抑菌稳定性结果

见表4～表6。

表4 对白色念珠菌的抑菌结果

表5 对金黄色葡萄球菌的抑菌结果

表6 对大肠杆菌的抑菌率结果

不同浓度的酒精提取液对白色念珠菌的抑菌均＜50%，没有抑菌效果，抑菌稳定性差。

不同浓度的酒精提取液对金黄色葡萄球菌抑菌率均＞50%，抑菌稳定性较好。

不同浓度的酒精提取液对大肠杆菌抑菌率均＞90%，抑菌稳定性好。

由以上结果可知，不同浓度的酒精提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的稳定性较好，对白色念珠菌的抑菌稳定性与提取介质中乙醇含量成反比，乙醇含量越高抑菌稳定性越差。可能是因为多糖类物质性质较稳定，因此对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有较好的抑菌效果，而黄酮类、生物碱类、酚类、有机酸类等物质在高温条件下易被氧化、分解，破坏了原来的分子结构，因此对白色念珠菌的抑菌效果下降。

3.3 加入抗氧化剂后的抑菌稳定性结果

见表7～表9。

表7 对白色念珠菌的抑菌结果

表8 对金黄色葡萄球菌的抑菌率结果

表9 对大肠杆菌的抑菌率结果

2号、3号两个低浓度酒精提取液对白色念珠菌的抑菌率均＜50%，没有抑菌效果，稳定性较差，4号、5号两个高浓度酒精提取液对白色念珠菌的抑菌率均＞90%，抑菌稳定性明显提高。

不同浓度酒精提取液对金黄色葡萄球菌抑菌率均＞90%，抑菌稳定性好。

不同浓度酒精提取液对大肠杆菌抑菌率均＞90%，抑菌率稳定性好。

由以上结果可知，加入抗氧化剂D-异抗坏血酸钠后，对3种菌的抑菌稳定性总体上逐步提高。对白色念珠菌的影响较为明显，当溶剂为60%的酒精提取液时，抑菌稳定性最好，这可能是因为D-异抗坏血酸钠的还原性要强于黄酮类、酚类等物质，因此能够有效地减缓黄酮类、酚类等物质被氧化，延长其抑菌作用。

4 结论与探讨

用60%的酒精对复方中药提取2次所得中药提取液，对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌作用2 min，各次抑菌率均＞90%，作用效果最好。现代药理学研究证明，中草药中的黄酮、生物碱、有机酸、酚类等成分，对多种致病菌具有抑制作用，加入抗氧化剂（D-异抗坏血酸钠）后，能有效保护还原基团，使提取液对3种菌的抑菌稳定性显著增强，该提取液在室温下的抑菌效果至少可保持2年。

该中药复方抑菌液，具有抑菌效果好，且毒副作用小的优势，用于个人护理用品中不仅具有防腐的作用，同时兼具抗氧化、去皱、美白等功效。除此之外，也可开发成消毒类产品，用于疫情期间新冠病毒的防治。鉴于人们对绿色健康产品的不断追求，相信此类纯天然抑菌液将会受到越来越多的关注。