广东省佛山市新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查与基因突变分析

袁伟曦 邵巧仪 张澎怡 刘丽雅 刘海平

广东省佛山市妇幼保健院新生儿疾病筛查中心，广东佛山 528000

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症是一种由于基因突变导致葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性降低的伴X 染色体连锁不完全显性遗传性疾病[1-2]。目前，已知的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的致病突变已达240 种，以点突变为主。全球受葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症影响的人数已超4 亿[3-5]。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者多无明显临床症状，但常因药物、食物、感染等诱发急性溶血，严重者会危及生命。因此，早筛查、早确诊是有效预防葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症发作的重要手段。我国葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的发病率呈现“南高北低”的地域特点，广东、广西、海南、云南等地是本病的高发区[6-10]。了解当地新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的分子特征，可更好地推动该地区出生缺陷防控工作的开展。本研究通过收集广东省佛山地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查数据及基因检测情况，旨在了解本地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变的分布特征，为本地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的防控提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择广东省佛山市妇幼保健院新生儿疾病筛查中心辖区内的各助产机构2019 年1 月至2020 年12 月出生的156 227 名新生儿为研究对象，其中男83 978 名，女72 249 名。

1.2 研究方法

1.2.1 主要检测试剂及仪器 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒（广州市丰华生物工程有限公司）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因检测试剂盒（PCR+导流杂交法）（广东凯普生物科技股份有限公司）、全自动荧光免疫分析仪AutoTRFIA-4（广州市丰华生物工程有限公司）、PCR 扩增仪（杭州博日科技股份有限公司）、医用核酸分子杂交仪HB-2012A（广东凯普生物科技股份有限公司）。

1.2.2 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查 收集于新生儿出生2～7 d 采集其足跟血所制作的干血片，采用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测定试剂盒（荧光分析法）和全自动荧光免疫分析仪AutoTRFIA-4 检测其葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性，所有实验操作均严格按照试剂盒及仪器操作说明书进行。样本测定值≤2.20 U/gHb，判断为初筛阳性，提示存在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏或减少的情况；样本测定值＞2.20 U/gHb，判断为初筛阴性[11]。

1.2.3 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因检测 召回初筛阳性者，经监护人同意后采集其末梢血进行基因检测。制作干血片，撕取9 mm×9 mm 干血片进行DNA 提取、PCR 扩增、杂交，读取膜条上的基因检测结果。所有操作步骤严格遵照试剂盒说明书进行。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因检测试剂盒可检测人类葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因6 个外显子的14 种突变位点：c.95A ＞G、c.392G ＞T、c.487G ＞A、c.592C ＞T、c.871G ＞A、c.1024C ＞T、c.1311C ＞T、c.1360C＞T、c.1376G＞T、c.1388G＞A、c.493A＞G、c.1387C＞T、c.1004C＞T、c.1381G＞A。若葡萄糖-6-磷酸脱氢酶初筛阳性者的导流杂交结果未见异常，则将该样本送至广东凯普生物科技股份有限公司进行一代测序（检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的外显子2、5、6、9、11、12）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 24.0 对所得数据进行统计学分析，计数资料采用例数和百分率表示，组间比较采用χ2检验。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 初筛人群特征

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症初筛阳性者6361 例，初筛阳性率为4.07%（6361/156 227）。其中男5683例，女678 例，男性人群中初筛阳性率为6.77%（5683/83 978），女性人群中初筛阳性率0.94%（678/72 249），男性初筛阳性率高于女性，差异有统计学意义（χ2=3378.22，P ＜0.05）。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症初筛阳性者中共召回2556 例，召回成功率为40.18%，其中575 例（男538 例，女37 例）同意进行葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因检测。

2.2 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症初筛阳性的基因符合情况

575 例葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症初筛阳性者共检出550 例携带葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症突变基因，25 例未检出异常；继续进行一代测序，结果显示有9 例检出试剂盒检测范围外的c.517T＞C 突变，16例未检出突变。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查试验（荧光分析法）的基因符合率为97.22%（559/575）。

2.3 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变分布特征

共检出10 种基因突变类型：c.1376G＞T、c.1388G＞A、c.95A ＞G、c.1311C ＞T、c.871G ＞A、c.1024C ＞T、c.392G＞T、c.517T＞C、c.1360C＞T、c.487G＞A。见表1。基因突变类型的检出率排前3 位的分别为c.1376G＞T（31.07%）、c.1388G＞A（30.74%）、c.95A＞G（17.36%），占总突变的79.17%。c.517T＞C 突变的检出率为1.49%。

表1 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变分布特征

3 讨论

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症是我国南方地区的高发疾病，人群患病率为4.0%～20.0%[12]，本研究数据显示本地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查阳性率为4.07%，与广东省其他地区，如广州（4.20%）、东莞（3.60%）、江门（4.14%）的筛查阳性率接近[13-15]。男性新生儿的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症初筛阳性率明显高于女性，这可能是由于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症是伴X 染色体连锁不完全显性遗传病，男性仅携带一条X 染色体，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因发生突变，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查即为阳性；女性有2 条X 染色体，且X 染色体会出现随机失活[16-17]，这使女性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症杂合突变携带者的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性可表现为异常、正常或处于临界值附近，这些酶活性表现为正常或临界值附近的女性杂合突变携带者极易被漏诊。有研究表明，女性杂合突变携带者暴露在氧化性刺激中时，也会出现急性溶血，危及生命健康[18]。

本研究通过对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症初筛阳性者进行基因检测，其基因符合率为97.22%，提示本地区选取的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性临界值在筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者时具有较高的特异性。

本地区新生儿以c.1376G＞T、c.1388G＞A、c.95A＞G 3 种突变为主，这与我国最常见的3 种突变类型一致[11，19-21]。本研究发现本地区新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症初筛阳性者携带c.1311C ＞T 突变的比例达7.27%，且携带c.1311C＞T 半合子突变的新生儿的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性异常，提示c.1311C＞T 突变可能影响其活性。虽然c.1311C＞T 是同义突变，但其常复合同义突变c.1365-13T＞C，由于这两个突变位点距离接近，可能干扰葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因的转录，从而导致葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者酶活性的降低[22-24]。提示可将c.1311C＞T 作为导向指标，即当葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性异常者检出c.1311C＞T 突变时，需对样本进行进一步测序，以验证该受检者是否复合其他类型的突变，尽可能避免漏诊葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者。此外，本研究发现本地区新生儿c.517T＞C 突变的携带率为1.49%，c.517T＞C 突变属于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的Ⅱ类致病位点，在广东省其他城市的检出率为1.00%左右[25]，因此，在对广东地区人群开展葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因检测时，需将c.517T＞C 位点纳入检测范围，避免漏诊。

近年来，我国加大了对出生缺陷防控的投入力度，部分省市已对该地区新生儿推行免费新生儿疾病筛查政策，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症作为南方地区新生儿疾病筛查的重要项目，应制订适合本地区的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性临界值及基因检测范围，以更好地推动本地区新生儿出生缺陷防控事业的发展。