广州市环境禽流感病毒污染与职业暴露人群感染情况分析

陈昌明 陆剑云 刘艳慧 马钰 李魁彪

【摘要】目的：分析广州市环境禽流感病毒污染与职业暴露人员感染情况。方法：于2019年3月-2020年12月，将广州市内中心城区、城乡城区作为本次研究社区，并选择经常前往肉菜市场、几乎不去肉菜市场的人群作为纳入人群，以荧光定量RT-PCR检测800份外环境标本的A型流感病毒核酸，并进行H5、H7、H9亚型的检测;以血凝抑制试验法，对其120名暴露人群血清中的H5N6、H7N9、H9N2血凝素抗体进行检测。结果：800份标本中，A型阳性共68份，占比8.50%，H5阳性检出率为0.50%、H7阳性检出率为1.50%、H9阳性检出率为4.38%、H5/H7阳性检出率为0.13%、H9/H7阳性检出率为0.38%。120名职业暴露人员中，未检出H5N6、H7N9抗体阳性，共检出H9N2抗体阳性标本4分，阳性率为3.33%;共33份被检出抗体，但不足以将其判定为阳性。结论：广州市环境中具有H5、H7、H9亚型病毒污染情况，并且有部分职业暴露人员也具有感染病毒的风险，应加强预防与禽流感病毒监测工作，避免疫情的发生。

【关键词】禽流感病毒;职业暴露人群;血清

【中图分类号】R511.7 【文献标识码】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.13.220

禽流感主要是由A型流感病毒所引起的一种禽类传染病，若出现高致病性的禽流感，则会导致大量禽类死亡，对养禽业带来极大的危害[1-2]。此外，相关研究发现，若病毒在野生鸟类、野生鸟类与家禽间进行传播期间，极易导致出现病毒基因重组的情况，从而获得感染人体的能力，出现人感染禽流感疾病的现象，对相关职业暴露人群的身体健康与生命安全造成极大威胁[3-4]。因此，及时对此种环境相关问题进行分析，以掌握禽流感污染情况、职业暴露人员的感染情况，为下一步制定防范及相关处理措施提供依据，具有显著的研究意义。基于此，本文作者于广州市中心城区、城乡城区相关人群中，随机抽取800份样本及120名职业暴露人员，展开以下分析。

1 材料与方法

1.1样本采集

（1）于2019年3月-2020年12月，将广州市内中心城区、城乡城区的各2个社区作为本次研究社区，并选择经常前往肉菜市场（暴露组）、几乎不去肉菜市场的人群（非暴露组）作为纳入人群。由本院開展流调并采集其咽拭子标本、血清标本。所选择的纳入人群需每半年、进行一次血清标本的采集。咽拭子标本共800份;职业暴露人群共120名，其中男性75名、女性45名，年龄40-56岁，平均（48.00±2.12）岁。

社区纳入标准：人口相对比较稳定、流动人口比例比较低;社区内只有一个肉菜市场、且市场内有活禽交易;社区内医疗机构具有完善的诊疗体系，可进行相关咽拭子、血清标本的采集;社区内可招募满足研究设计的人群队列;所纳入人群均知情此研究且签署同意书。

（2）标本采样方法：采样点距离地面1.5m，于每个采样点，采样虚拟浓缩器、Biosampler液体冲击式采样器联合的方式，对流感病毒气溶胶样品进行采集，虚拟浓缩器主流量保持在每小时8升，将虚拟浓缩器与Biosampler采样器进行连接，持续采样45分钟，于Biosampler采样瓶内，放置20ml的采样吸收液，采样后将其放置于4℃的环境中进行保存，采样结束后，保证4小时之内送至实验室，行离心浓缩富集至1ml，以待检测。

（3）外环境检测：若同一种类货源相同的禽类选择3只。环境中涂抹拭主要按照笼具、饮水槽、饲料槽、粪便、地面、污水、宰杀工具、脱毛机、污物桶等部位进行采集;标本采集后进行流感A型通用引物核酸检测，并进行H5、H7、H9的分型。标本收集时，应同时记录活禽市场、档口的基本情况、消杀记录、进发货记录、每天气温、气压、湿度等情况。将所采集的咽拭子、环境涂抹拭子等，应用病毒保存液进行保存，放置于温度为0-4℃的环境下，送检。采集的人群血清标本进行离心处理，选取血清保存，以待检测。

1.2血凝抑制试验

采集血液样本，以10000r/min、8cm的离心半径进行离心处理，持续2分钟，选择上层血清，进行血凝抑制试验（HI）。对于A型禽流感病毒阳性标本，再进行H5、H7、H9亚型分析。

结果判定：人血清对H5N6抗原、H7N9抗原、H9N2抗原的抑制效价≥1：80，为阳性;介于20-80之间不足以诊断为阳性[5-6]。

1.3荧光定量PT-PCR检测

将所采集的外环境标本冻融后，放置于振荡器进行充分震荡，按照说明书操作步骤，对其进行核酸RNA的提取，应用荧光定量RT-PCR方法，进行病毒的核酸检测。

1.4数据统计

采用统计学软件SPSS22.0分析数据，以[n（%）]表示定性资料，以（平均数±标准差）表示定量资料，P<0.05表示数据差异显著。

2 结果

2.1血清学监测结果

800份标本中，A型阳性共68份，占比8.50%，H5阳性检出率为0.50%、H7阳性检出率为1.50%、H9阳性检出率为4.38%、H5/H7阳性检出率为0.13%、H9/H7阳性检出率为0.38%。详见表1：

2.2禽流感病毒核酸检测结果

120名职业暴露人员中，未检出H5N6、H7N9抗体阳性，共检出H9N2抗体阳性标本4分，阳性率为3.33%;共33份被检出抗体，但不足以将其判定为阳性。详见表2：

3 讨论

种属屏障的存在，禽流感多不会出现感染人的情况，但并不完全排除人感染禽流感，目前，临床上已发现有人类感染H5N1、H7N7、H9N2等多个亚型禽流感病毒，引起了广泛的关注[7-8]。相关报道提出，H7N9为一种新型的禽流感，其病毒基因主要来自于野鸟、鸡群的基因重配，针对此种情况，及时对其禽流感病毒外环境进行监测具有必要性，可了解相应环境中病毒分布情况，并有效的掌握病毒来源、病毒传播途径等，从而可采取有效措施防控禽流感疫情[9-10]。市场外环境监测是一项重要的评估手段，可有效降低人感染禽流感的风险，此系统主要覆盖农业系统、林业系统、卫生系统等，其实施的具体内容则主要包括设计、采样、监测、数据分析等较多个环节，对于评估禽流感病毒污染情况具有显著价值[11-12]。本文研究发现，800份标本中，A型阳性共68份，占比8.50%，H5阳性检出率为0.50%、H7阳性检出率为1.50%、H9阳性检出率为4.38%、H5/H7阳性检出率为0.13%、H9/H7阳性检出率为0.38%。数据可表明城乡社区活禽市场A型的流感病毒中，以H7、H9最为常见，较其他类型场所明显较高;这可能是由于城乡活禽市场中，具有较为特殊的环境，对其进行监测过程中，市场环境中存在来源不同的活禽混合存放、对于活禽交易区的环境清洗、消毒不彻底、活禽存笼发生过夜等情况，此类情况极易导致出现禽流感病毒污染的情况[13-14]。此外，多项研究表明，活禽市场的暴露极易导致人感染H7N9禽流感[15]。本文研究数据显示，120名职业暴露人员中，未检出H5N6、H7N9抗体阳性，共检出H9N2抗体阳性标本4分，阳性率为3.33%;共33份被检出抗体，但不足以将其判定为阳性。数据可进一步证实，职业暴露人群感染H7N9禽流感的风险较高，根据此结果可见，应加强城乡社区活禽市场的相关管理工作，并提供职业暴露人群的个人防护意识，增强健康意识，以预防出现感染禽流感病毒的情况。

综上所述，广州市环境中具有H5、H7、H9亚型病毒污染情况，并且有部分职业暴露人员也具有感染病毒的风险，其中感染H7N9的风险最大，应加强预防与禽流感病毒监测工作，提升职业暴露人群的防护意识，避免疫情的发生。

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基金项目：广州市科技计划项目——基于空气中禽流感病毒载量动力学监测的社区人群感染队列研究（编号：201707010451）

*通讯作者：刘艳慧，广州市白云区疾病预防控制中心。