分光光度法与酶标仪微量法测量菌液浓度的比较

石冬月 辽宁省抚顺市望花区疾病预防控制中心 （辽宁 抚顺 113001）

内容提要： 目的：比较分析分光光度法与酶标仪微量法测量菌液浓度的效果。方法：2019年10月～2019年11月选取本中心保存的大肠杆菌作为研究对象，分别使用紫外-可见分光光度计、ANTHOS READER 2010酶标仪对大肠杆菌进行检测，对比两种检测方法获得的菌液浓度。结果：以重量法检测结果为准，按照一系列比例稀释后测量吸光度，绘制相应的校准曲线，获得相应的回归方程。回归方程y=0.0095+0.7115x，其中r2=0.9982。从四个样品的菌液浓度检测结果可以看出，分光光度法与酶标仪微量法测出的菌液浓度比较，并无明显差异（P＞0.05）。两种检测方法的测量相对标准偏差均比3%小，但相较于分光光度法，酶标仪微量法的相对标准偏差更小（P＜0.05）。酶标仪微量法测量菌液浓度的精密度比分光光度法更好（P＜0.05）。结论：酶标仪微量法、分光光度法均可有效检测菌液浓度，但酶标仪微量法所测定的菌液浓度结果相对标准偏差更小，精密度更高，更具应用价值。

有研究[1]指出，分光光度法可通过对物质的定性与定量，达到动态监测菌液浓度的目的。现今，这种方法在临床广泛应用，获得大量好评。但也有研究[2]指出，分光光度法测定菌液浓度，存在检测时间长、检测工作量过大等缺点。随着酶标仪（酶联免疫法）在临床的广泛应用，有研究[3]指出，在菌液浓度监测过程中采用酶标仪，可获得理想效果。基于此，本研究对比分析分光光度法与酶标仪微量法测量菌液浓度的效果，报告如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

2019年10月～2019年11月选取本中心保存的大肠杆菌作为研究对象，进行相关检测。

1.2 仪器

本研究所用分光光度法所用仪器是上海仪电分析仪器有限公司生产的752N型紫外-可见分光光度计，所用酶标仪是奥地利Anthos公司生产的ANTHOS READER 2010型酶标仪。

1.3 方法

分光光度法：取样5mL，加热煮沸，煮沸10min后，按照1:2比例、1:4比例、1:8比例、1:16比例、1:32比例、1:64比例用纯水将样本稀释成一定浓度，然后在625nm处使用紫外-可见分光光度计检测吸光度，并在相应的校准曲线上查询吸光度对应的浓度，并将浓度与稀释比例相乘，从而获得所选样本的菌液浓度。

酶标仪微量法：取样5mL，加热煮沸，煮沸10min后，按照1:2比例、1:4比例、1:8比例、1:16比例、1:32比例、1:64比例用纯水将样本稀释成一定浓度，将不同浓度的稀释液加入未经过任何处理的酶标板孔洞中，每一孔洞添加250μL稀释液。然后在酶标仪625nm处测定其吸光度值，并在相应的校准曲线上查询吸光度对应的浓度，并将浓度与稀释比例相乘，从而获得所选样本的菌液浓度。

1.4 观察指标

以重量法测出的大肠杆菌菌体浓度结果为检测结果标准，对比两种检测方法获得的菌体浓度，并分析两种方法的检测准确度。选取4个不同样品应用两种检测方法检测，确定两种方法的精密度。

1.5 统计学分析

采用SPSS 22.0统计学软件对数据进行分析。

2.结果

2.1 绘制校准曲线

将重量法获取的菌液浓度检测结果作为基准数据，按照一系列比例稀释后测量吸光度，并绘制相应的校准曲线，获得相应的回归方程。回归方程y=0.0095+0.7115x，其中r2=0.9982。从回归方程可看出，校准曲线的线性关系良好。

2.2 两种检测方法获得的菌液浓度

从四个样品的菌液浓度检测结果可以看出，分光光度法与酶标仪微量法测出的菌液浓度比较，并无明显差异（P＞0.05），详情见表1。

表1. 两种检测方法获得的菌液浓度(g·l)

2.3 两种检测方法测量菌液浓度的精密度

从四个样品菌液浓度检测结果精密度试验可以看出，两种检测方法的测量相对标准偏差均比3%小，但相较于分光光度法，酶标仪微量法的相对标准偏差更小（P＜0.05）。主要是因为酶标仪应用垂直光路，分光光度法应用水平光路，使用垂直光路，样本吸光度不容易被稀释液、液体浓缩等因素影响。因此，酶标仪微量法测量菌液浓度的精密度比分光光度法更好（P＜0.05），详情见表2。

表2. 两种检测方法测量菌液浓度的精密度

3.讨论

微生物发酵期间，必须加强监测，动态分析发酵菌液的浓度，才能有效控制发酵工艺，保证微生物如预期目标发酵，发酵后可获得预期结果。但如何监测发酵菌液成为了临床的热点与难点。随着我国临床检测手段的发展和进步，各种检测方法均在菌液浓度检测中得以应用，如比浊法、重量法、稀释平板计数法、电导率法、分光光度法等。但是有研究[4]指出，比浊法与重量法在菌液浓度的测定中的应用，存在较大误差，检测步骤繁琐，检测时间漫长，无法满足临床实时、动态监测细菌浓度的要求。

分光光度法以分子吸收光谱为检测基础，所用检测设备简单好操作，还具有检测准确度高、检测精密度好、适用性刚等优点。现今在医学、食品、地质、能源、环境等诸多领域中广泛应用，可发挥重要作用。再者，分光光度法随着有机试剂、多元络合物等发展，如今已经成为临床应用最广的一种检测分析手段。最早分光光度法主要在化合物、无机离子的定性分析、定量测定中应用。但随着光谱学的发展，现今分光光度法在医学、细菌的检测中广泛应用，但该方法本身的操作比较繁琐、测量耗时长、对试剂量的需求比较大、难以更为精准的检测微量物质。

酶标仪微量法随着酶联免疫吸附试验的发展而发展，该方法主要在医学领域中应用，不少医疗机构、疾控机构、采血站用该方法检测HIV抗体、梅毒、各种肝炎等。有研究指出，酶标仪微量法用于细菌检测，也可获得理想效果。本研究赞成这一观点，本研究结果显示，分光光度法与酶标仪微量法测出的菌液浓度比较，并无明显差异；但酶标仪微量法测量菌液浓度的精密度比分光光度法更好。

由上可知，酶标仪微量法、分光光度法均可有效检测菌液浓度，但酶标仪微量法的精密度更好，更值得应用。