养阴止渴丸对糖尿病模型大鼠血糖水平的影响

王 海，张世龙，付娟芝

庆阳市第二人民医院，甘肃 庆阳745000

中医认为糖尿病（diabetes mellitus，DM）属于“消渴”“肥胖”范畴［1-3］，其发病的主要因素为禀赋异常、五脏柔弱、素体阴虚、过食肥甘、情志失调，禀赋异常为内因，饮食情志为诱因，内外因相结合而致［4-8］。现代医学认为，环境因素、肥胖、饮食结构不合理、热量摄入过多、体力活动减少、吸烟等是其主要诱发因素［9］。养阴止渴丸由黄芪、太子参等17味中药组成，具有清热生津，益气养阴的功效。本实验应用动物模型对其调节血糖作用进行研究［10-13］，现报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验动物Wistar大鼠SPF级72只，体质量180～220 g，雌雄各半，实验动物生产许可证号：SCXK（甘）2011-0004。昆明种小鼠SPF级60只，体质量（20±2）g，雌雄各半，实验动物生产许可证号：SCXK（甘）2011-0004。实验动物由甘肃中医药大学实验动物中心提供，饲喂标准饲料，温度20±2℃，相对湿度60%～70%，大鼠适应7天后开始实验，小鼠适应3天后开始实验。

1.2 药物及仪器养阴止渴丸（以下简称ZKW）（庆阳市第二人民医院制剂室制备，批号：160401，规格：60 g/瓶）；格列本脲片［上海医药（集团）有限公司信谊制药总厂，批号：160310，规格：2.5 mg/片］；四氧嘧啶（ALX，Sigma，批号：GA16908，规格：5 g/瓶），二甲双胍肠溶片（山东力诺科峰制药有限公司，批号：SC00825，规格：0.25 g/片）。HX502T型电子天平（浙江天东衡器厂）；三诺安稳血糖测试仪（长沙三诺生物传感技术股份有限公司，YZB/湘0074-2008，B1116KD1522，试纸条批号：2135/7AL-2135/7AP）。

1.3 实验方法

1.3.1 试药制备1）大鼠受试药物的制备：取养阴止渴丸40 g，研磨成粉末，加150 mL蒸馏水浸泡过夜，超声提取30 min，过滤，取上清液，蒸馏水定容至100 mL，作为高剂量受试品；取高剂量受试品减半稀释，为中剂量受试品；取中剂量受试品减半稀释，为低剂量受试品。得高、中、低剂量分别为4.0、2.0、1.0 g/kg的受试药物（相当于临床成人日用量的14、7、3.5倍）。2）小鼠受试药物的制备：取养阴止渴丸28.6 g，制备过程同大鼠受试药物，得高、中、低剂量浓度分别为5.71、2.86、1.43 g/kg的受试药物（相当于临床成人日用量的20、10、5倍）。

1.3.2 大鼠实验

1.3.2.1 分组及造模 取Wistar大鼠，雌雄兼用，禁食不禁水12 h，测定空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）为4.0～6.0 mmol/L的大鼠72只，随机分为空白对照组，模型对照组，阳性对照组（盐酸二甲双胍片0.2 g/kg，相当于临床成人日用量的7倍），ZKW高、中、低剂量组（4.0、2.0、1.0 g/kg，相当于临床成人日用量的14、7、3.5倍），每组12只。按10 mL/kg体质量容积灌胃给药，空白对照组和模型对照组灌服等量的生理盐水，每日1次，连续30天。给药第10天各组动物禁食不禁水12 h，测定各组大鼠FBG后，除空白对照组腹腔注射等容量生理盐水外，其余各组大鼠一次性腹腔注射四氧嘧啶200 mg/kg［14-15］（溶于0.9%的生理盐水），4.5～5.0 h后各组大鼠灌胃50%葡萄糖每只2.0 mL；72 h后大鼠FBG值≥11.1 mmol/L为糖尿病大鼠造模成功［9-14］。

1.3.2.2 观察指标1）于给药第0、10、20、30天称各组大鼠体质量、24 h进食量饮水量及FBG；2）于大鼠股动脉取血，室温放置6 h，离心半径20 cm，4000 r/min离心15 min，分离血清，按试剂盒说明书采用放射免疫分析法（RIA）测定各大鼠血清胰岛素，计算胰岛素敏感性指数（insulin sensitive index，ISI）［15-17］。

1.3.3 小鼠实验

1.3.3.1 分组及给药 取小鼠，雌雄兼用，禁食不禁水12 h后测定FBG为4.0～6.0 mmol/L的小鼠60只，随机分为空白对照组、阳性对照组（格列本脲片用量0.01 g/kg，相当于临床成人日用量的10倍），ZKW高、中、低剂量组分别为5.71、2.86、1.43 g/kg，每组12只。空白对照组灌服等量的生理盐水，其余各组按20 mL/kg体质量容积给予对应药物灌胃，每日1次，连续7天。

1.3.3.2 观察指标 第7天各组动物禁食不禁水12 h，进行糖耐量试验（灌服葡萄糖水溶液1.5 g/kg），测定小鼠血糖值［18］。

1.4 统计学方法采用SPSS 17.0统计软件处理，计量资料采用±s表示，多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），两组间比较采用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠实验结果实验过程中，模型对照组死亡3只，阳性对照组死亡1只，ZKW高剂量组死亡2只，ZKW中剂量组死亡2只，ZKW低剂量组死亡3只。

2.1.1 大鼠体质量 给药第10天，各组大鼠体质量正常增加，组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）；给药第20天，模型对照组、ZKW各剂量组大鼠体质量明显减少，与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；给药第30天，阳性对照组和ZKW高、中、低剂量组大鼠体质量降低，与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；阳性对照组、ZKW高剂量组与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组大鼠不同时间点体质量比较（±s）

表1 各组大鼠不同时间点体质量比较（±s）

注：与空白对照组比较，**表示P＜0.01；与模型对照组比较，#表示P＜0.05；-表示无数值

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2.1.2 大鼠饮食量 给药第20天，模型对照组，ZKW中、低剂量组与空白对照组比较，日进食量和日饮水量均明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；阳性对照组、ZKW高剂量组大鼠日进食量和饮水量相对减少，与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。给药第30天，模型对照组和ZKW各剂量组大鼠进食量均增大，与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；ZKW高剂量组大鼠的饮水量较少，与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2—3。

表2 各组大鼠日进食量比较（±s）

表2 各组大鼠日进食量比较（±s）

注：与空白对照组比较，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05；与模型对照组比较，##表示P＜0.01，＃表示P＜0.05；-表示无数值

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2.1.3 大鼠FBG给药第20天，模型对照组、ZKW各剂量组大鼠血糖明显升高，与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；ZKW各剂量组与模型对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。给药第30天，阳性对照组、ZKW各剂量组大鼠血糖明显降低，与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 各组大鼠不同时间点FBG比较（±s）

表4 各组大鼠不同时间点FBG比较（±s）

注：与空白对照组比较，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05；与模型对照组比较，##表示P＜0.01，＃表示P＜0.05；-表示无数值

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2.1.4 大鼠血清胰岛素及ISI给药第30天各组大鼠血清胰岛素水平明显降低，模型对照组大鼠ISI明显升高，与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；阳性对照组ZKW高、中剂量组大鼠ISI明显降低，与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表5。

表5 各组大鼠血清胰岛素和ISI比较（±s）

表5 各组大鼠血清胰岛素和ISI比较（±s）

注：与空白对照组比较，**表示P＜0.01；与模型对照组比较，#表示P＜0.05；-表示无数值

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2.2 小鼠糖耐量实验给药第7天，ZKW各剂量组小鼠空腹血糖均降低的趋势，呈量-效关系，但与空白对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。给药第7天进行糖耐量试验，在30、60、120 min各组血糖均明显升高；ZKW高、中剂量组小鼠在各时间点血糖有降低的趋势，与空白对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表6。

表3 各组大鼠日饮水量比较（±s）

表3 各组大鼠日饮水量比较（±s）

注：与空白对照组比较，*表示P＜0.05；与模型对照组比较，#表示P＜0.05；-表示无数值

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表6 各组小鼠不同时间点血糖比较（±s）

表6 各组小鼠不同时间点血糖比较（±s）

注：与空白对照组比较，*表示P＜0.05

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3 讨论

中医认为消渴病的病因病机主要有以下4个方面：一是禀赋不足；二是饮食失节；三是情志失调；四是劳欲过度。养阴止渴丸是庆阳市第二人民医院内分泌科张世龙主任医师临床经验方。方中黄芪、生地黄、太子参益气养阴，生津止渴；葛根、桑白皮、夏枯草、地骨皮清泄三焦之火，养阴润燥；苦瓜、黄连、知母、玄参清热泻火，生津润燥；丹参、荔枝核、鬼箭羽疏肝理气，活血化瘀；苍术健脾化湿、和胃；仙鹤草解毒补虚。诸药合用使阴液得复、脉络通利、燥热自消。

本研究结果表明，养阴止渴丸对DM模型大鼠、小鼠有一定的治疗作用，能降低模型大鼠空腹血糖、改善ISI，但对正常血糖无明显影响，且增加正常小鼠的糖耐量。