基于能量代谢的巴戟天盐、酒炙炮制增效作用对比研究*

吴文辉，管莉，魏玉玲，贾琳，曾敏

重庆市中医院 重庆 400021

巴戟天为茜草科巴戟天属植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根，味甘、辛，性微温，具有补肾助阳，祛风除湿的功效。本品不仅补肾助阳，还强筋骨、祛风湿，对肾阳虚兼风湿之证尤宜，且甘润而不燥。现代炮制应用多以巴戟肉、盐巴戟和制巴戟为主，认为生品味辛而温，补肝肾祛风湿力强，适用于肾虚而兼有风湿之证；盐炙后功专入肾，增强补肾助阳的作用，适用于肾中元阳不足的阳痿早泄，宫冷不孕等；甘草制后味甘，补肾益气养血，适用于脾肾亏损，气血不足等，而酒炙则甚少应用[1]。但是，巴戟天酒炙炮制历史沿革却显示，巴戟天酒制（炙）在古代，不仅常用于祛风湿，通经络，亦曾广泛用于温肾助阳，以治疗肾虚阳痿及不孕等症[2]。中医肾阳虚，是肾阳虚衰，温煦失职，气化失权所表现的一类虚寒证候，患者常有畏寒怕冷，四肢发凉（重者夏天也凉），腰背冷痛，遇寒则甚，遇热则缓等临床表现。而辅料酒味辛、甘，性大热，辛甘化阳，热者益热。因此，巴戟天酒炙亦有可能同时具有温肾助阳的炮制增效作用。本研究拟从能量代谢的角度为切入点，对比研究巴戟天酒炙与盐炙对肾阳虚大鼠模型能量代谢的影响，为巴戟天酒炙温肾助阳的科学阐释提供实验数据。

材料与方法

1 实验动物

SD大鼠，雄性，体重220～260g，SPF级，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004。

2 实验仪器

HYC-310S医用冷藏箱（海尔）、Synergy HTX全波段酶标仪（Bio-teck）、超低温冰箱（Thermo）、TGL-18C-C台式离心机（上海安亭）、RT-3100C全自动洗板机（雷杜生命科技有限公司）、AXLM1820-2超纯水机（阿修罗）、UV-2450紫外可见分光光度计（日本岛津）。

3 实验材料

巴戟天购买于重庆桐君阁股份有限公司，经重庆市中医研究院中药制剂研究所副所长杨敏主任中药师鉴定为茜草科植物巴戟天Morinda officinalisHow的干燥根。右归丸（小蜜丸，仲景宛西制药股份有限公司，批号：180901）。注射用氢化可的松琥珀酸钠（50mg×5支，天津生物化学制药有限公司，批号：011909022）。氯化钠注射液（500ml：4.5g，太极西南药业股份有限公司，批号：20084002）。Na＋-K＋-ATP酶、Ca2＋-Mg2＋-ATP酶、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、琥珀酸脱氢酶（SDH）、大鼠乳酸脱氢酶（LDH）和考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒均购自江苏晶美生物科技有限公司，批号202011。

巴戟天生品：取原药材，除去杂质，洗净，置蒸制容器内蒸透，趁热除去木心，或用水润透后除去木心，切段，干燥。筛去碎屑。盐巴戟天：取净巴戟段，用盐水拌匀，待盐水被吸尽后，置炒制容器内，用文火炒干。巴戟天每100kg用食盐2kg。酒巴戟天：取净巴戟段，用适量黄酒拌匀，闷润，待酒被吸尽后，置炒制容器内，用文火炒干。巴戟天每100kg用黄酒10kg。

4 供试品制备

4.1 右归丸阳性对照液制备 右归丸粉碎，临用时用0.5%羧甲基纤维素钠配置成2776.50mg/ml右归丸液（相当于成人日服剂量10倍）[3-7]；

4.2 巴戟天（生品、盐炙品、酒炙品）供试品制备 巴戟天（生品、盐炙品、酒炙品）剪碎，75%乙醇回流提取两次，每次10倍量，每次提取1h，后药渣水回流提取2次，每次10倍量，每次提取1h，合并4次提取液减压浓缩至无醇味，0.5%羧甲基纤维素钠分别配置成低剂量102.83 mg生药/mL（相当于成人最大日用剂量10g）、中剂量3084.90mg生药/ml（相当于成人最大日用剂量10g的30倍）、高剂量6169.80mg生药/mL（相当于成人日服剂量10g的60倍）混悬液。

4.3 氢化可的松琥珀酸钠注射液 注射用氢化可的松琥珀酸钠临用前用生理盐水配置成25mg/ml

5 方法

5.1 分组及给药 SD大鼠，雄性，体重220～260g，SPF级，54只，随机分为空白组、模型组、阳性组、生品（低、中、高）组、盐炙（低、中、高）组，酒炙（低、中、高）组，每组8只。除空白组和模型组灌胃给与等量0.5%羧甲基纤维素钠溶液外，其余各组灌胃给与相对应的药物，1次/d，给药剂量为1mL/100g，给药前禁食不禁水 12h，持续 25d。

5.2 造模 给药第3天开始造模，除空白组给与等量生理盐水外，其余各组肌肉注射氢化可的松琥珀酸钠注射液 0.1mL/100g，1 次 /d，持续 20d[8]。

5.3 血清采集及测定 末次给药2h后，10%水合氯醛麻醉，腹主动脉采血，离心，取血清，按试剂盒要求进行测定，或-80℃保存，备用。

5.4 肝组织取样、匀浆及蛋白浓度测定[9-11]上述实验动物采血后，迅速摘取同一部位肝组织，冷生理盐水快速洗净，滤纸拭干，精确称量，按照质量（g）：体积（ml）为1∶9的比例，冰层上制成肝组织匀浆，2500r/min离心10min，取上清液按照试剂盒说明书测定 Na＋-K＋-ATP酶、Ca2＋-Mg2＋-ATP酶、SDH 和LDH。采用考马斯亮蓝法测定蛋白总量。

6 统计学方法

数据用SPSS 20.0统计软件处理，组间比较采用单因素方差分析，各组数据均以（）表示

结 果

1 巴戟天酒炙和盐炙对肾阳虚肝组织中能量代谢相关酶的影响

与空白组正常值比较，模型组大鼠肝组织中Na＋-K＋-ATP酶、Ca2＋-Mg2＋-ATP酶、SDH 和 LDH活性均有显著的下降（P＜0.01）。给药干预后，相较于模型组，生品组虽无显著差异，但趋势明显。盐炙组在中剂量和高剂量上表现出显著的改善作用，具体为中剂量组可显著升高Na＋-K＋-ATP酶（P＜0.05）和Ca2＋-Mg2＋-ATP 酶活性（P＜0.01），高剂量组 4种酶的活性均能得到显著升高（P＜0.05）。酒炙组较盐炙组改善作用则更加明显，中剂量组和高剂量组均能显著提升4种酶的活性（P＜0.05），且在Ca2＋-Mg2＋-ATP酶活性和LDH的提升上极为显著（P＜0.01）.相同剂量下，盐炙组与酒炙组比较无统计学上的显著差异，但提升率高于盐炙组。见表1。

表1 巴戟天酒炙前后对肾阳虚大鼠肝组织中能量代谢相关酶的影响（n=8，）

表1 巴戟天酒炙前后对肾阳虚大鼠肝组织中能量代谢相关酶的影响（n=8，）

注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

LDH/U·mgprot-1空白组 - 1.646±0.363 1.725±0.182 8.972±1.223 3466.0981±473.189模型组 - 0.944±0.274** 0.917±0.209** 5.613±0.853** 1976.564±327.823**阳性组 2776.50 1.467±0.186## 1.601±0.231## 7.917±1.159## 3069.571±361.189##生低组 102.83 1.005±0.239 1.069±0.189 5.771±1.117 2291.427±346.317生中组 3084.90 1.092±0.238 1.135±0.171 5.401±1.261 2327.883±389.502生高组 6169.80 1.025±0.174 1.167±0.255 6.300±1.172 2238.320±576.081盐低组 102.83 1.110±0.212 1.119±0.262 6.434±0.951 2352.688±252.851盐中组 3084.90 1.253±0.185# 1.286±0.168## 6.944±1.015 2424.429±392.348盐高组 6169.80 1.292±0.269# 1.258±0.285# 7.117±1.082# 2575.032±267.076#酒低组 102.83 1.099±0.2501 1.164±0.213 6.507±0.973 2317.112±268.890酒中组 3084.90 1.383±0.299# 1.370±0.252## 7.070±1.266# 2521.817±279.903#酒高组 6169.80 1.347±0.211# 1.352±0.253## 7.343±1.176# 2712.398±541.225##组别 生药剂量/mg·mL-1 Na＋-K＋-ATP酶/U·mgprot-1 Ca2＋-Mg2＋-ATP酶/U·mgprot-1 SDH/U·mgprot-1

2 巴戟天酒炙和盐炙对肾阳虚肝血液中能量代谢相关物质的影响

与空白组正常值比较，模型组大鼠血清TC和GLU含量均有显著的下降（P＜0.01），TG含量有显著的升高（P＜0.01）。给药干预后，相较于模型组，生品组虽在统计学上未能有显著改善，但是各项指标水平值较模型组有恢复的趋势；盐炙中剂量组能显著降低TG含量（P＜0.05），高剂量组对3个指标均能呈现显著的改善作用（P＜0.05）；酒炙中剂量组能显著升高TC水平值（P＜0.05），高剂量组亦是能3个指标均显著改善（P＜0.05），并且对TC水平值得恢复还具有极显著作用（P＜0.01）。相同剂量下，盐炙组和酒炙组比较无统计学上的显著差异，且水平值改善率大致相当。见表2。

表2 巴戟天酒炙前后对肾阳虚大鼠肝血液中能量代谢相关物质的影响（n=8，）

表2 巴戟天酒炙前后对肾阳虚大鼠肝血液中能量代谢相关物质的影响（n=8，）

注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别 生药剂量 /mg·ml-1 TC/mmol·L-1 TG/mmol·L-1 GLU/mmol·L-1空白组 - 1.508±0.077 0.682±0.133 4.726±0.849模型组 - 1.262±0.090** 0.963±0.152** 2.880±0.823**阳性组 2776.50 1.435±0.059## 0.609±0.134## 4.199±0.834#生低组 102.83 1.264±0.074 0.863±0.166 3.350±0.775生中组 3084.90 1.270±0.065 0.840±0.226 2.735±1.033生高组 6169.80 1.332±0.031 0.892±0.166 3.303±1.003盐低组 102.83 1.316±0.050 0.807±0.134 3.098±1.001盐中组 3084.90 1.346±0.091 0.741±0.147# 2.928±0.716盐高组 6169.80 1.385±0.049# 0.752±0.179# 4.035±1.322#酒低组 102.83 1.303±0.105 0.856±0.097 3.230±0.913酒中组 3084.90 1.363±0.46# 0.816±0.146 3.879±0.896酒高组 6169.80 1.387±0.103## 0.711±0.141# 4.065±0.544#

结论与讨论

巴戟天生品虽对模型组大鼠肝组织中能量代谢相关酶和血液中能量代谢相关物质水平值改善无统计学上的显著差异，但是作用趋势明显，给药后各水平值均得到一定程度上的恢复，并且会随着剂量得增加而得到提升，说明巴戟天本身既有改善肾阳虚的虚寒症状作用。盐炙组和酒炙组均能在一定程度上显著恢复异常的水平值（P＜0.01或P＜0.05），说明盐炙和酒炙均有提高巴戟天温肾助阳的炮制增效作用。相同剂量下，虽然酒炙组和盐炙组的比较无统计学上的显著差异，但是从水平值的增长率可以看出，酒炙组的提升率高于盐炙组，且起效剂量亦有一定程度上的降低，说明在肾阳虚的机体能量代谢上，酒炙的效果可能较盐炙更优。

巴戟天是临床常用温补肾阳药，现存记载最早的炮制方法为“去心”，巴戟天酒炙最早见于《雷公炮炙论》：“凡使，须用枸杞子汤浸一宿，待稍软，漉出，却，用酒浸一伏时，又漉出，用菊花同熬，令焦黄，去菊花，用布拭令干用”，是巴戟天除去心外最早的炮制记载。巴戟天盐炙最早见于《太平惠民和剂局方》：“盐汤浸打去心”。传统炮制理论认为，巴戟天心有“令人烦躁”的副作用，故应弃去；盐味咸，咸入肾，故盐炙可引药入肾经，巴戟天盐炙引药归经，增强其疗效；酒活血通络，祛风散寒，巴戟天酒炙可增强在治疗风湿方面的作用。但是，酒味辛、甘，性大热，亦有热者益热和辛甘化阳的作用，且中医肾阳虚所表现出的临床证候恰为虚寒证候。因此，从理论上，酒炙也可能具有增强巴戟天温肾助阳的炮制作用。而上述实验结果也证明了，巴戟天酒炙在肾阳虚模型大鼠机体上的能量代谢作用不弱于盐炙，且隐隐有优于盐炙的趋势。但是在其它方面，如改善生殖能力，治疗阳痿或宫冷不孕等炮制作用尚需进一步的对比研究，以期阐明酒炙在温肾助阳上是否具有与盐炙相似的炮制增效作用。