三黄固本汤对激素干预下SLE小鼠骨密度、骨矿含量及脂代谢的影响

李春霄，赖 江，郝平生，黄 莺

(1.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072 ；2.成都市第三人民医院，四川 成都 610031)

系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)是结缔组织疾病中一种较为常见的类型，可影响到多器官多脏腑。激素作为治疗SLE的首选药物，在其问世后，已经大大降低了患者的病死率。SLE患者使用激素时间长，部分患者需要终生服药，股骨头无菌性坏死(Osteonecrosis of the femoral head，ONFH)等副作用发生率越来越高。在皮肤科领域中，多种皮肤科疾病需要使用到糖皮质激素(Glucocorticoid，GC)，激素性股骨头坏死(Steroid-induced necrosis of the femoral head，SONFH)与其长期运用密切相关。SONFH是伴有进行性骨细胞和骨髓坏死，从而导致股骨头结构改变甚至塌陷的严重骨科疾病。近年来，调查发现SONFH的发病率日渐增高，占非创伤性股骨头坏死的首位，起病隐袭、病情发展较快、致残性强，已成为困扰医患的重大公共难题[1-3]。资料表明，非创伤性股骨头缺血性坏死(Ischemic necrosis of femoral head，INFH)病程中存在着血液流变学异常和脂质代谢紊乱[4]。

“三黄固本汤”系名中医钟以泽教授治疗多种免疫系统疾病慢性缓解期经验方，积钟老毕生临床经验，临床疗效甚佳。此方基于“肾主骨”“髓生骨”理论，本出“补肾填精法”，本研究通过观察其对激素干预下SLE小鼠骨密度、骨矿含量及脂代谢的相关指标的变化，进一步研究探索其防治激素性股骨头坏死的实验室微观证据，为减少激素的不良反应，探寻有效的中药预防激素引起的股骨头坏死的干预作用“靶点”，达到“治未病”的目的。现总结如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 从上海斯莱克实验动物中心购买了30只重量在35～50 g左右的，8～10周的雌性MRL/lpr小鼠。在SPF级实验动物房内进行试验，温度保持在(20±2)℃，湿度约为50%～55%。我们使用常规饲料喂养小鼠14 d，让其适应生长后，进入动物实验阶段。然后将小鼠进行随机分为模型组、对照组(泼尼松组)、治疗组(泼尼松+中药组)，每组各10只。

1.2 实验药物 三黄固本汤免煎颗粒(购买自成都中医药大学附属医院免煎药房,来源于四川新绿色药业股份有限公司)，小鼠体重每50 kg每日用量包含黄芪30 g，黄精、熟地黄、女贞子、桑椹、枸杞、菟丝子、当归各15 g。醋酸泼尼松片，由浙江仙琚制药股份有限公司提供。

1.3 实验方法 将治疗组及对照组共计20只SLE模型小鼠均予以泼尼松灌胃治疗1周，方法：泼尼松(10 mg/kg)以0.9%氯化钠稀释后按0.4 ml/只灌胃，1次/d。1周后小鼠SLE病情缓解，进入慢性缓解期，此时治疗组予以泼尼松(10 mg/kg)加三黄固本汤免煎颗粒(3 g/kg)以0.9%氯化钠稀释后按0.4 ml/只灌胃，1次/d；对照组则维持原有治疗方法继续予以泼尼松(10 mg/kg)以0.9%氯化钠稀释后按0.4 ml/只灌胃，1次/d。给药后，每周对小鼠的体重进行一次称量后据此调整受试药物的剂量。持续给药8周以后，酒精浸泡小鼠下半身消毒，对其麻醉后，用干燥管采取腹主动脉血液后，静置离心，将血清保存于-80 ℃冰箱；及时分离小鼠左侧股骨，将股骨上软组织剔除后，置于0.9%氯化钠纱布中包裹，后放入EP管中，存放于-20 ℃冰箱内。室温下解冻后方可进行检测。模型组10只直接按此方法取标本检查。

1.4 检测指标 使用小动物专用双能X线骨密度仪对各组小鼠左侧股骨进行离体骨密度(BMD)和骨矿含量(BMC)测定。血清脂代谢相关检测，选用小鼠甘油三酯(TG)、小鼠胆固醇(CH)、小鼠低密度脂蛋白(LDL)、小鼠载脂蛋白A1(APO-A1)、小鼠高密度脂蛋白(HDL)、小鼠载脂蛋白B100(APO-B100)试剂盒，测试前将血清标本置室温复融后按说明书要求进行操作，收集完所有样本后一次性完成检测，以消除批间差异。

1.5 统计学方法 应用SPSS 11.0统计学软件进行分析，多个样本均数比较行q检验，多组均数比较行方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组小鼠左侧股骨离体BMC变化 见表1。对照组BMC与模型组比较，在小鼠使用激素治疗后，其BMC下降，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗组治疗后与模型组相比较，BMC变化不明显，差异无统计学意义(P>0.05)；对照组与治疗组治疗后比较，差异有统计学意义(P<0.05)；对照组BMC下降明显，治疗组变化明显，差异有统计学意义(P<0.05)。使用泼尼松治疗SLE的过程中，中药可有效防止小鼠BMC的下降，对激素性股骨头坏死具有预防作用。

表1 不同干预方法下小鼠BMC比较(g)

2.2 各组小鼠左侧股骨离体BMD变化 见表2。对照组与模型组比较，在小鼠使用激素治疗后，其BMD有明显的下降，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗组治疗后与模型组相比较，BMD变化不明显，差异无统计学意义(P>0.05)；对照组与治疗组治疗后相比较，差异有统计学意义(P<0.05)；对照组BMD下降明显，治疗组变化不明显，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。使用泼尼松治疗SLE，中药可防止小鼠BMD下降。

2.3 各组小鼠血脂代谢指标的变化 见表3。与模型组比较，在小鼠使用激素治疗后，对照组TG、CH、LDL指标明显升高而HDL明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗组治疗后与模型组相比较，脂代谢各相关指标变化不明显，差异无统计学意义(P>0.05)；对照组与治疗组治疗后相比较，差异有统计学意义(P<0.05)；对照组TG、CH、LDL指标升高明显，其HDL有明显下降，治疗组变化不明显，差异有统计学意义(P<0.05)。使用泼尼松治疗SLE的过程中，中药的有机切入，可以有效地调节脂代谢，预防股骨头坏死的发生。

表2 不同干预方法下小鼠BMD比较(g/cm2)

表3 各组小鼠血脂代谢指标的比较

3 讨 论

中医学认为股骨头坏死属“骨蚀”“骨萎”等范畴，股骨头部脉络细微，气血不足，骨络不通，经气不得以上乘养筋骨，骨失之津润而萎痹[5]。肾为先天之本，肾藏精，主骨生髓，髓藏于骨腔内，滋养骨骼，骨的生长发育依赖肾气的滋养与推动。由此我们可以清楚地知道，肾中精气是否充盛对人的生殖能力和生长发育至关重要，它影响着骨的新陈代谢，决定了骨骼的强弱。故肾精充盛，化生骨髓，滋养骨骼，故而骨骼强健；肾精虚弱，无以养骨，则髓枯骨槁，脆而易折。钟以泽教授认为：股骨头出现坏死，系患者或因年老体弱，或因多种疾病影响，久病及肾，多虚多瘀，继而出现肾精亏虚。肾主骨，充养骨髓功能失司，骨髓不能得到充养，不能滋养骨骼，继而髓枯骨稿，而发生坏死。因此，股骨头坏死与“肾”关系密切，中医防治本病时要注重从肾着手固护根本，补肾填精。

糖皮质激素作为系统性红斑狼疮患者治疗疾病的首选药物，多需要长期口服。该类药物药性偏燥，中医学认为，阳化气，阴成形，外源性糖皮质激素是辛甘纯阳之品，易致使外源性阳气偏亢[6]，长期服用激素后，患者容易出现激动、兴奋、失眠、五心烦热等阴虚内热症状。而在中医理论中，但凡积极的、光亮的、向上的等均属于阳的范畴，所以若按阴阳划分，激素则属于阳药。激素使用日久则易伤及真阴，而致阴虚内热之相；SLE目前尚无根治的办法，糖皮质激素作为治疗本病的第一首选，患者需要长时间服药，久病多虚，势必造成气阴不足，阴虚内热征象。阴阳互根，肾阳亏虚，气化功能失司，影响气血的运行，不能充骨养髓，骨骼失养；肾阴不足，肾精亏虚，骨髓生化乏源，不能滋养骨骼，久之出现坏死。由此将会在实验室检查相关指标上出现骨密度及骨矿含量的降低。钟以泽教授名方“三黄固本汤”本出“补肾填精”法，具有益气养阴解毒之功，与激素联合使用恰如其分地对抗了激素阳热偏亢的特性，较早地干预了SLE小鼠使用激素后气阴不足，阴虚阳亢的体质，让整个机体处于“阴平阳秘”的动态平衡状态，骨髓得以充养。

系统性红斑狼疮患者多存在脂质代谢紊乱，部分血脂成分可能参与了系统性红斑狼疮的发生、发展，持续脂质代谢紊乱不仅导致血管病变，还导致肾小球疾病、神经系统病变的发展，已成为系统性红斑狼疮患者病情恶化的原因之一[7]。红斑狼疮患者多伴有血脂异常，可导致小动脉管壁内膜及中层纤维化增厚，导致管腔狭窄，进而影响患者局部组织及器官供血，导致局部组织或脏器的功能障碍。血脂水平异常升高可能加重患者的自身免疫反应，导致患者炎症因子增加，从而加重患者病情[8]。股骨头坏死为股骨头血供中断或受损，引起骨细胞及骨髓成分死亡及随后的修复，继而导致股骨头结构改变、股骨头塌陷、关节功能障碍的疾病[9]。股骨头坏死为渐进性病程，未经有效治疗，约80%会在发病后1～4年内进展至股骨头塌陷[10-12]。发病机制有血液凝滞学说、骨质疏松学说、脂质代谢紊乱学说、骨髓基质干细胞向脂肪细胞异常分化学说、骨细胞凋亡等学说，但他们共同的最终结果均是导致供应股骨头的重要血管因管外压迫或血管内血栓栓塞机械性阻断，最终出现骨细胞坏死[13-14]。相关研究已经证实糖皮质激素是诱发股骨头坏死的首要原因，而脂质代谢紊乱又是其发病机制中的重要环节[15]，临床应用降脂西药预防激素性股骨头坏死的有效性亦证明了这一观点[16]。

“治未病”思想是对中医预防医学理论的高度概括，是中医养生和防治疾病的重要原则，亦是中医“防重于治”理念的重要体现，中医“治未病”包括“未病先防”“既病防变”“瘥后防复”三部分，激素性股骨头坏死防重于治，属于“治未病”之“未病先防”。中医历来强调肾精对人体生命活动的重要性，因精能化气，气能生神，神能御气，故精是形气神的基础，“治未病”尤要注意“固护肾精”，从中医角度看，“肾精”在激素性股骨头坏死发生发展过程中，肾精同样具有重要作用。肾藏精是肾最基本的机能，肾的其他机能均由此延伸。中医认为肾藏精，精化气，肾精足则肾气充，肾精亏则肾气衰，而肾气含有肾阴及肾阳：肾阳又称为“元阳”“真阳”具有温煦、推动、兴奋等作用，肾阴又称为“元阴”“真阴”具有凉润、宁静、抑制等作用。肾阴与肾阳对立统一，相反相成，平衡协调，则肾气冲和。

研究发现越早进行激素性股骨头坏死的治疗，对股骨头的修复效果越好[17]。 然而早期激素性股骨头坏死的临床症状并不明显[18]，患者不能及时发现自己的病情，导致病情的加重。三黄固本汤是全国名中医钟以泽教授集毕生经验方，在治疗皮肌炎、结节性红斑、硬皮病等自身免疫性疾病，疗效确切[19]。三黄固本汤[20]由黄芪、黄精、熟地黄、当归、女贞子、枸杞子、菟丝子、桑椹 8 味药组成。我们在SLE小鼠使用激素的同时，基于“肾主骨”“髓生骨”理论，选用名中医钟以泽教授对慢性缓解期气阴不足证代表方——三黄固本汤进行干预，了解其对小鼠股骨骨密度、骨矿含量及脂代谢相关指标的影响。本研究基于“肾主骨”“髓生骨”理论，借助微观实验室指标探究三黄固本汤防治SLE小鼠激素性股骨头坏死的作用机制，探寻有效的中药预防激素性股骨头坏死的干预作用“靶点”，达到“治未病”的目的。