高效液相色谱法同时检测降糖中成药中的盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮

刘舜慧，吴丽萍

（漳州卫生职业学院药学系，福建 漳州 363000）

少数生产企业片面追求药物疗效、期望获取更多利益，不按标准规定处方生产，在中成药及保健品中非法添加化学药物的事件屡有发生。据文献报道，被检测出存在非法添加的药物有补肾壮阳药［1-4］、降压药［5-8］、减肥药［9-15］、降糖药［16-20］、安神药［21-23］、抗风湿药［24-25］、抗癫痫药［26］、止咳平喘药［27-28］等。

糖尿病是一种病情较复杂且难治愈的慢性疾病。传统中药在降糖药物中具有重要地位，其具有调理和治疗的双重功效且不良反应小等特点，但其治疗周期相对较长，起效较慢。因此，不法分子利用患者对中药的信赖，同时为了满足他们用药后急于见效的心理，在降糖中成药、保健品中非法添加化学药物。降糖化学药物主要有磺酰脲类、双胍类、噻唑烷二酮类等，对于前两者的检测技术日趋成熟，但检测降糖中成药中噻唑烷二酮类未见报道，本实验以盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮作为筛查目标，建立了HPLC检测方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器Agilent-1200高效液相色谱仪。

1.2 试药盐酸罗格列酮（含量为91.3%批号：100673-200401）、盐酸吡格列酮（批号：100634-200401）均由中国药品生物制品检定所提供；甲醇、乙酸铵为色谱纯；水为超纯水；降糖中成药的试验样品有降糖宁胶囊、参芪降糖胶囊、糖脉康颗粒、玉泉丸、消渴宁片、消渴降糖片。

2 实验方法

2.1 高效液相色谱法

2.1.1 对照品溶液的制备精密称取常温减压干燥12 h的盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮对照品适量，置10 mL量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得含盐酸罗格列酮18μg·mL-1、盐酸吡格列酮80μg·mL-1的混合溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备若供试品为胶囊剂，倾出胶囊内容物碾成细粉，称取约0.1 g；若供试品为颗粒剂、片剂或丸剂，碾成细粉后称取约0.5 g，置25 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理15 min后，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液用0.45μm滤膜滤过即得。

2.1.3 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙酸铵（0.01 mol·L-1）溶液（62∶38）为流动相，流速：1 mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10μL；二极管阵列检测器，检测波长为246 nm及200～400 nm。此色谱条件下，盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮2种对照成分分离良好。色谱图见图1；光谱图见图2、图3。

图1 对照品色谱图

图2 盐酸罗格列酮光谱图

图3 盐酸吡格列酮光谱图

2.1.4 标准曲线的制备配制对照品混合溶液，含盐酸罗格列酮0.46 mg·mL-1、盐酸吡格列酮2.05 mg·mL-1。精密吸取上述溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1、2、5 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以峰面积Y对进样量X（μg）进行线性分析，得回归方程。结果见表1、图4、图5。

图4 盐酸罗格列酮线性关系图

图5 盐酸吡格列酮线性关系图

表1 对照品溶液的线性结果

2.1.5 精密度试验取对照品混合溶液重复连续进样6次，每次10μL，测得盐酸罗格列酮各次峰面积RSD的平均值为0.22%，盐酸吡格列酮的RSD为0.20%。

2.1.6 稳定性试验取对照品混合溶液，放置0、4、6、8、10、12、24 h测定峰面积，盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮的RSD分别为0.19%和0.18%，见表2。

表2 稳定性试验结果

2.1.7 各种剂型的加样回收率取已确定不含盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮的4种不同剂型（胶囊剂、颗粒剂、丸剂、片剂）的样品作为背景，每种剂型6份，每份加入对照品混合溶液（盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮的浓度分别为0.451 9 mg·mL-1、2.050 0 mg·mL-1）1 mL，按“供试品溶液的制备”项下处理后，进样分析，计算回收率，结果见表3。

表3 各种剂型的加样回收率/n＝6

2.1.8 检测限取对照品混合溶液，以不同比例稀释，在2.1.3项下的高效液相色谱条件下测定，取4～10 min范围的基线进行噪声检测，结果见表4。

表4 HPLC检测限

2.2 样品测定分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按2.1.3项下的高效液相色谱条件测定，同时记录二极管阵列紫外光谱。经过HPLC分析，所得供试品溶液不含有盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮。样品色谱图见图6。

图6 供试样品色谱图

3 小结

3.1同时检测降糖中成药中的盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮还未见报道，在高效液相色谱方法的摸索过程中，当流动相中甲醇的比例＞70%时，二者完全叠加在一起，色谱图中只出现一个色谱峰。逐渐降低甲醇的比例，二者的分离度加大。确定的液相色谱流动相，除了确保二者的分离度，还能跟样品中的杂质峰分离。

3.2盐酸罗格列酮和盐酸吡格列酮的分子结构中均含有N原子，因此，可向流动相中加入乙酸铵改性剂，且乙酸铵的浓度大小对二者的峰形和出峰时间的影响不大，只需采用0.01 mol·L-1乙酸铵即可保证二者色谱峰形对称，不拖尾。

3.3从光电二极管阵列检测器所得到的190～400 nm这一范围内2种对照品的光谱图来看，盐酸罗格列酮的λmax为246 nm，盐酸吡格列酮的λmax为267 nm。在246 nm和267 nm下，盐酸吡格列酮的吸收值差异不大，因此可选择246 nm作为这2种化学药物同时检测的波长。