铁皮石斛中有机氯农药多残留检测方法的研究及应用

周键超，韦雪飞，羊超菠

（磐安县食品药品检验检测中心，浙江磐安 322300）

铁皮石斛，学名为Dendrobium officinaleKimura et Migo，是兰科石斛属草本植物，生于海拔1 600 m的山地半阴湿的岩石上，主要分布于我国安徽、浙江、福建等地区[1]，铁皮石斛以其茎入药，属补益药中的补阴药，益胃生津，滋阴清热。铁皮石斛成分复杂，包括石斛多糖、生物碱、黄酮、酚类物质、石斛其他类结构物质及微量元素等[2]，为食药同源中药材。浙江省磐安县是“中国药材之乡”，全县有家种和野生中草药1 219种，“浙八味”中白术、元胡、玄参、贝母和白芍主产于磐安，俗称“磐五味”，2016年，铁皮石斛与三叶青、灵芝、玉竹、天麻被评为新磐五味。作为道地药材之一，铁皮石斛在种植、药用、临床等研究方法发挥着重大作用，但对铁皮石斛原料中有机氯农药多残留研究有所欠缺。人工栽培、生长环境等会造成中药材中农药不同程度的残留[3]，但《中国药典》2020版中未对铁皮石斛农药残留有明确限量指标[4]，这不仅影响药材的用药安全，也不利于中药材出口走出国门及助推产业更好发展。因此，研究并制定简单、快速、准确，并可同时定性、定量的农药多残留检测方法是保障人们用药安全、推动中药材现代化建设迫切需要结果的问题之一[5]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

抽样市面销售铁皮石斛；氯化钠（分析纯）；乙腈（色谱纯）；正己烷（色谱纯）；中药农残专用柱HLB-A（纳普分析技术（苏州）有限公司）；13种有机氯农药标准品，国家标准物质研究中心。13种有机氯农药标准品具体见表1。

表1 13种有机氯农药标准品表

1.2 仪器设备

赛默飞TRACE1300气相色谱仪，配有ECD检测器（赛默飞世尔科技）；电子天平AL204/01（梅特勒-托利多公司）；多管漩涡混合仪GL-50（杭州金谱科学仪器有限公司）；智能氮吹仪MFV-24（广州得泰仪器科技有限公司）；台式高速离心机ST8（苏州Thermo）；旋转蒸发仪Precision（海道尔夫）。

1.3 方法

1.3.1 试样制备与提取

取铁皮石斛样品，将其磨碎过80目筛，制成待测样。取待测样粉末2.5 g，精密称量，加入氯化钠1 g，摇散后加入乙腈25 mL，以2 500 r/s涡旋混匀5 min，4 500 r/min离心5 min，分取上清液于平底烧瓶内，沉淀再加乙腈25 mL，涡旋5 min，离心5 min，合并两次上清液，40 ℃水浴旋转蒸发上清液减压浓缩至3～5 mL，放冷，用乙腈稀释至10.0 mL，摇匀，即得。

1.3.2 净化

量取直接提取法制备的供试品溶液3～5 mL,直接通过亲水亲油平衡材料（HLB SPE）固相萃取柱（200 mg，6 mL），收集全部净化液，摇匀。吸取1.0 mL摇匀后的净化液置水浴氮吹仪氮吹至近干，用正己烷定容至1.0 mL，过0.2 μm滤膜过滤进行测定。

1.3.3 标准溶液配制

（1）准确吸取各农药标准品0.1 mL，于10.0 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此时溶液浓度为1.0 μg/mL的标准储备液，4 ℃保存。用铁皮石斛基质提取液稀释标准储备液，配制成各浓度的混合标准工作液，4 ℃保存，备用。

（2）准确吸取标准储备液（1.0 μg/mL）0.10 mL，用正己烷定容至1.0 mL，此时混合标准品溶液浓度为0.10 μg/mL。

（3）分 别 准 确 吸 取 混 合 标 准 品 溶 液（0.10 μg/mL）0.01 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL和0.50 mL，用正己烷定容至1.0 mL，此时混合标准品浓度分别为0.001 μg/mL、0.005 μg/mL、0.010 μg/mL、0.020 μg/mL 和 0.050 μg/mL。

1.3.4 色谱条件

色谱柱：SPB-530 m×0.25 mm×0.25 μm；进样口温度：240 ℃；升温程序：90 ℃保持1 min，以10 ℃/min的速率升至180 ℃并保持5 min，以4 ℃·min-1的速率升至280 ℃并保持10 min；检测器温度：300 ℃；进样量：1 μL；载气及流速：50 mL/min；定量方法：峰面积外标法定量。

2 结果与分析

2.1 13种有机氯农药标准品的色谱表色谱图

13种有机氯农药标准品的色谱图如图1所示，具体参数见表1。

图1 13种有机氯农药标准品的色谱图

表1 13种有机氯农药标准品的色谱表

2.2 提取过程中直接加乙腈的考察

在对铁皮石斛粉末进行提取过程中，观察到加入水浸润粉末后再加乙腈，会因为铁皮石斛糖分多而发生黏连情况，导致最后回收率过低；而不加水直接乙腈提取，则没有黏连情况，添加回收率也较好，因此选择提取过程中直接加乙腈。

2.3 定容溶剂选择

对铁皮石斛粉末中13种有机氯农药多残留的检测中，选择乙腈进行提取，离心完过滤浓缩净化后较为清澈，且能充分提取出农药残留，但选择乙腈作为定容溶剂时，上机过程中发现溶剂响应值偏大，在做低浓度添加回收时有较大影响，故选择净化后取1 mL水浴氮吹至近干，换正己烷对其进行定容。

2.4 线性范围

用以上混合标准品梯度溶液配制的基质标，在1.3.4条件下进行测定，分别以各组分的溶液浓度（X，μg/mL）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线。从曲线结果上看，13种有机氯农药标准品在0.001～0.100 μg/mL的浓度范围内线性关系良好（R2≥0.997 0），满足定量分析要求，同时，该条件下测定的检出限定量限均满足《中华人民共和国药典》2020版四部有机氯农药残留要求。13种有机氯农药残留的线性关系见表2。

表2 13种农药线性范围、线性关系及相关系数表

2.5 回收率和精密度

对空白均质的铁皮石斛样品基质分别做低、中、高3种添加回收实验，每个水平重复6次，均按照1.3方法进行实验，测定回收率及精密度，实验结果表明，该方法下的添加回收率和精密度基本满足农药残留分析方法规定的相关要求。11种有机氯农药残留在3个水平下的回收率及相对标准偏差范围（n=6）见表3、表4。

表3 11种有机氯农药在3个水平下的回收率及相对标准偏差范围表（n=6）

表4 2种有机氯农药在3个水平下的回收率及相对标准偏差范围表（n=6）

2.6 实际样品应用

根据以上实验方法，抽取了本地市面销售的10批铁皮石斛样品，对其分别进行上述13种有机氯农药多残留检测，结果见表5。实验结果显示，10批铁皮石斛样品中，13种有机氯农药残留部分未检出，检出的均低于《中华人民共和国药典》2020版四部有机氯农药残留要求的定量限。

表5 铁皮石斛样品有机氯农药残留检测结果表

3 结论

从检测结果看，该实验方法建立了铁皮石斛原料中13种有机氯农药多残留检测方法：用乙腈对铁皮石斛粉末进行提取，过亲水亲油平衡材料（HLB SPE）固相萃取柱净化，净化液氮吹至近干用正己烷定容。该方法下得出的各农药回收率均在60.01%～120.31%，RSD在0.846%～9.792%，符合农药残留检测标准，同时该方法高速、有效，可推广并应用于铁皮石斛原料中的有机氯农药的残留检测。