淋巴细胞、血细胞及骨髓细胞检测在鉴别再生障碍性贫血与低增生性骨髓增生异常综合征中应用价值

鲁恒珍， 张 煌， 周帅跃， 郑华理， 朱爱萍

安庆市第一人民医院 血液肿瘤科，安徽 安庆 246004

再生障碍性贫血(aplastic anemia，AA)是血液系统常见疾病，常以骨髓造血功能低下和全血细胞减少为特征[1]，而这些特征也表现在低增生性骨髓增生异常综合征(hypoplastic myelodysplastic syndrome，hypo-MDS)中[2]。AA与hypo-MDS的治疗方法、预后等差异均很大，前者中期生存期可以超过174个月，而后者通常在22～33个月内。因此，对两者进行鉴别诊断具有重要意义[3]。本研究旨在探讨淋巴细胞、血细胞及骨髓细胞检测在鉴别AA与hypo-MDS中的应用价值。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 将安庆市第一人民医院自2014年1月至2019年12月收治的45例AA患者[4]纳入AA组、48例hypo-MDS患者[5]纳入hypo-MDS组，另将25例健康体检志愿者纳入健康组。AA组中，男性30例，女性15例，中位年龄36岁；hypo-MDS组中，男性29例，女性19例，中位年龄43岁；健康组中，男性15例，女性10例，中位年龄38岁。排除标准：存在感染和其他自身免疫性疾病；应用免疫调节剂。3组研究对象一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。研究对象均签署知情同意书。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 研究方法 收集3组研究对象3～5 ml外周血，收集AA组和hypo-MDS组患者2～3 ml骨髓血。采用FACSC alibur流式细胞仪(Becton Dickinson，美国)检测外周血T淋巴细胞亚群，Sysmex XE-2100血细胞分析仪(Sysmex，日本)检测血细胞计数，Cytomics FC500流式细胞仪(Beckman Coulter，美国)检测骨髓细胞。采用全血/溶血红细胞法制备标本，单克隆抗体标记细胞，四色免疫荧光检测外周血和骨髓血(外周血：FITC/PE/Percp/APC；骨髓血：FITC/PE/PC5/PC7)。

2 结果

2.1 3组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比较 3组CD3+比较，差异无统计学意义(P>0.05)。hypo-MDS组、AA组CD3+CD8+高于健康组，CD3+CD4+、CD4+/CD8+低于健康组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比较

2.2 hypo-MDS组和AA组CD3-CD16/CD56+自然杀伤细胞、CD3+CD57+T-大颗粒淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞比较 AA组CD3-CD16/CD56+自然杀伤细胞、CD3+CD57+T-大颗粒淋巴细胞低于hypo-MDS组，CD19+B淋巴细胞高于hypo-MDS组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 hypo-MDS组和AA组CD3-CD16/CD56+自然杀伤细胞、CD3+CD57+T-大颗粒淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞比较

2.3 hypo-MDS组和AA组白细胞、红细胞、血小板计数及网织红细胞比较 hypo-MDS组、AA组白细胞、红细胞、血小板计数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。AA组网织红细胞低于hypo-MDS组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 hypo-MDS组和AA组白细胞、红细胞、血小板计数及网织红细胞比较

2.4 hypo-MDS组和AA组骨髓原始细胞比率比较 AA组骨髓原始细胞比率为(0.52%±0.19%)，低于hypo-MDS组的(1.10%±0.35%)，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

AA和hypo-MDS均为骨髓造血功能衰竭疾病，在临床特征上显示出多种相似性[6]，但两者的治疗和预后存在显着差异，与AA相比，hypo-MDS的白血病转化率更高[7]，存活期更短。T淋巴细胞是重要的免疫细胞群，其亚群之间的相互作用可维持人体的正常免疫功能，当不同亚群的数量和功能异常时，可能引起免疫功能障碍，诱发一系列病理变化。在血液系统中，T淋巴细胞亚群异常可能表现为AA、骨髓增生异常综合征、血小板减少性紫癜等。有研究表明，AA与T细胞功能亢进引起的造血组织损伤密切相关[8]，AA患者的CD4+/CD8+降低[9-10]。同时，免疫机制异常在骨髓增生异常综合征中也发挥重要作用[11-13]，骨髓增生异常综合征患者外周血和骨髓中T淋巴细胞亚群比例异于常人[14-15]。Maciejewski等研究发现，CD8+淋巴细胞与AA发病有关[16]。Viale等[17]研究显示，重症AA患者的骨髓和外周血CD8+细胞集落明显高于正常人。Smith等[18]研究报道，骨髓增生异常综合征患者存在T抑制因子。Molldrem等[19]研究证明，异常T细胞克隆可以抑制粒细胞和巨噬细胞集落形成。因此，观察患者的免疫状态对于了解和治疗疾病意义重大，而T淋巴细胞亚群的检测是评估患者免疫状态的优质指标。本研究结果显示：hypo-MDS组、AA组CD3+CD8+高于健康组，CD3+CD4+、CD4+/CD8+低于健康组，差异有统计学意义(P<0.05)，提示T淋巴细胞亚群比例失衡可能与hypo-MDS、AA的发病有关。吕远飞等[20]根据CD4+/CD8+将hypo-MDS和AA患者分入正常比例组(1.02～1.95)、倒置比例组(比例<1.02)、高比例组(比例>1.95)3个亚组，结果显示，淋巴细胞亚群的变化可作为AA与hypo-MDS鉴别诊断的参考指标，根据淋巴细胞CD4+/CD8+将患者分为亚组进行比较更有利于鉴别的准确性。但本研究中，hypo-MDS组与AA组CD4+/CD8+差异无统计学意义(P>0.05)，与上述研究[20]结果不同。因此，是否可以基于CD4+/CD8+来区分AA与hypo-MDS还有待进一步研究。

自然杀伤细胞作为自然免疫中一种重要的大颗粒淋巴细胞，与肿瘤细胞的早期免疫监测和杀伤密切相关。自然杀伤细胞可通过直接杀伤或分泌γ干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子抑制骨髓增生异常综合征和AA的骨髓造血细胞[21]。本研究结果发现，AA组CD3-CD16/CD56+自然杀伤细胞、CD3+CD57+T-大颗粒淋巴细胞低于hypo-MDS组，CD19+B淋巴细胞高于hypo-MDS组，差异有统计学意义(P<0.05)。造血干细胞损伤引起的全血细胞减少可能是导致两组患者大颗粒淋巴细胞比例低于正常参考值的主要原因。

骨髓造血细胞受到损伤后，淋巴细胞和其他非造血细胞会相对增加。骨髓原始细胞及成熟淋巴细胞可作为区分hypo-MDS与AA的重要指标[22]。本研究中，AA组骨髓原始细胞比率低于hypo-MDS，差异有统计学意义(P<0.05)。这表明，骨髓细胞可能被免疫细胞的异常功能所破坏。

综上所述，外周血T淋巴细胞亚群、大颗粒淋巴细胞、B淋巴细胞、血细胞、骨髓细胞综合检测可提高AA与hypo-MDS鉴别诊断的准确性。