百解藤抗炎作用及最大耐受量的实验研究

周贤强，蒋伟哲，孔晓龙，付书婕，廖万忠，唐 婕，谢佳佳

（1.广西医科大学，广西 南宁 530021；2.右江民族医学院，广西 百色 533000）

百解藤为防己科植物轮环藤属粉叶轮环藤Cy⁃clea hypoglauca（Schauer）Diels，又名银不换、金钥匙等，瑶族称其为“金线风”（仅俊崩），属于常用瑶药“七十二风”之一［1］。目前地方性标准中仅收载了百解藤根部的质量标准，然而，百解藤的茎叶也是瑶族常用的药用部位，具有清热解毒、祛风止痛的功效，常用于治疗风热感冒、咳嗽、咽喉肿痛、风火牙痛、痢疾、风湿疼痛、疮疡肿毒、毒蛇咬伤和尿路感染等［2］。经查阅国内外相关文献发现，有关百解藤的药理学研究报道较少［3-6］，未见其抗炎作用和最大耐受量方面的研究。本实验通过动物实验，对百解藤茎叶的抗炎作用及最大耐受量进行初步的药理学研究，为百解藤的后续研究提供基础的实验数据。

1 实验材料

1.1 动物 SPF级KM小鼠80只，雌雄各半，体质量18~22 g，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK桂2014-0002。饲养温度为25℃，相对湿度为40%~70%，予动物饲料喂养，自由饮水。

1.2 仪器 打孔器（8 mm）；计时器、分析天平（型号：BSM-220.4；上海卓精电子科技有限公司）；移物枪（100µl）。

1.3 试剂及药物 二甲苯（广东省化学试剂工程技术研究开发中心，批号：20170818）；醋酸地塞米松片（浙江仙琚制药股份有限公司，批号：190804；规格：每片0.75 mg）；百解藤茎叶采自玉林市博白县，经广西医科大学药学院余丽莹教授鉴定为防己科轮环藤属植物百解藤Cyclea hypoglauca（Schauer）Diels的茎和叶。取百解藤茎和叶粉末100 g，按料液比1∶8加入纯水，加热沸腾后持续提取1 h，滤过，滤渣再加入4倍量水继续提取30 min，滤过，合并滤液，常压浓缩至50 ml，得浓度为2.0 g/ml生药水提物，置于冰箱内4~6℃保存备用。

2 实验方法

2.1 抗炎实验［7］将50只小鼠随机分为5组：模型组、醋酸地塞米松对照组及百解藤水提物高、中、低剂量组，每组10只。百解藤水提物高、中、低剂量组分别给予百解藤水提物高剂量（4.5 g/kg）、中剂量（3.0 g/kg）、低剂量（1.5 g/kg），醋酸地塞米松对照组给予醋酸地塞米松水溶液0.5 mg/kg，模型组灌胃给予生理盐水。连续灌胃给药7 d，灌胃容积均为20 ml/kg。末次给药1 h后，每只小鼠右耳涂以二甲苯100µl，以左耳对照，1 h后颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用8 mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，精密称量。以两耳片重量差值作为肿胀度指标，并计算出肿胀抑制率。肿胀度（mg）=右耳片重（mg）-左耳片重（mg）；肿胀抑制率（%）=（模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度）/模型组平均肿胀度×100%。

2.2 最大耐受量（MTD）实验［8］取20只小鼠，雌雄各半，随机分为2组：空白对照组和百解藤茎叶水提取物组，每组按性别分笼饲养，禁食不禁水12 h后，每鼠按最大灌胃量20 ml/kg给药，百解藤茎叶水提取物组给予水提物最大浓度药液（2.0 g/ml）灌胃，空白对照组以生理盐水灌胃，每天灌胃1次，连续灌胃和观察7 d，记录此期间小鼠的毒性反应、死亡情况、体质量变化和饲料消耗量，7 d后脱颈椎处死并解剖小鼠，肉眼观察脏器是否病变。体质量变化=给药后第7天体质量-给药前体质量；最大耐受量=小鼠平均给药量/小鼠平均体质量×成人体质量（60 kg）/成人日用剂量（10 g）。

2.3 统计学处理 采用SPSS 22.0统计软件进行分析。计量数据以均数±标准差（±s）表示，组内比较采用ANOVA单因素方差分析，组间比较采用LSD方法分析。以P<0.05或P<0.01为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 百解藤茎叶水提物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 见表1。

表1 百解藤茎叶水提物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 （±s，n=10）

表1 百解藤茎叶水提物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 （±s，n=10）

注：与模型组比较，①P<0.05，②P<0.01

组 别模型组醋酸地塞米松对照组百解藤水提取物高剂量组百解藤水提取物中剂量组百解藤水提取物低剂量组剂量（g/kg）—0.000 5 4.5 3.0 1.5肿胀度（mg）11.99±2.13 2.29±1.58②5.59±1.92②7.12±1.73②8.22±1.75①肿胀抑制率（%）—80.90 53.38 40.55 31.40

百解藤水提取物的高、中、低剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用（P<0.05或P<0.01），且抑制作用与剂量呈正相关。

3.2 最大耐受量（MTD）的实验结果

3.2.1 小鼠的一般情况 空白对照组在灌胃后1 h内，大部分小鼠会出现活动减少、卧伏，对外应激反应减少的现象；1.5 h后，小鼠的活动和反应才恢复正常。7 d内小鼠饮食、大小便正常，体重小幅度增长，未见其他异常反应。百解藤水提取物组小鼠在灌胃后1 h内，大部分小鼠会出现活动减少、卧伏现象，对外应激反应减少，口、鼻、眼、外阴等无分泌物，无震颤或抽搐等现象，少数鼠的呼吸频率加快，可见明显的呼吸动作；1~2 h内，小鼠行为活动逐渐增多，部分小鼠开始嗅饲料和饮水，给药组小鼠的粪便、尿液色泽偏黄，粪便较湿润，未见腹泻；给药2.5 h后，小鼠活动基本恢复正常。在7 d观察期内，小鼠反应基本正常，体重变化不大，仅日均消耗的饲料量有逐渐减少的趋势。见图1、图2。

图1 百解藤茎叶水提物对小鼠体重的影响

图2 百解藤茎叶水提物对小鼠进食量的影响

3.2.2 小鼠脏器情况 给药后第7 d将小鼠进行解剖，与空白对照组比较，肉眼可见百解藤茎叶水提物组小鼠心、肝、脾、肺和肾的颜色、大小、质地、表面皆正常，无坏死组织、结节、炎症和肿瘤等病变；胃、大肠和小肠的颜色、形状、大小正常，无气胀、充血、坏死和肿物。

3.2.3 小鼠死亡情况 给药7 d内，空白对照组及百解藤茎叶水提物给药组的20只小鼠均无死亡。

3.2.4 最大耐受量（MTD）测定结果 由实验可知，百解藤茎叶水提物以最大浓度2.0 g/ml给药，小鼠未出现死亡和明显的中毒症状，小鼠对百解藤茎叶水提物的最大耐受量（MTD）为40 g/kg，相当于成人日用剂量的235倍。

4 讨论

小鼠耳廊肿胀致炎实验是验证药物抗炎作用的经典方法，在抗炎实验中，不同剂量的百解藤水提取物和醋酸地塞米松对二甲苯所引起小鼠耳廓肿胀均有一定的抑制作用（P<0.05或P<0.01），表明百解藤茎叶水提取物具有较好的抗炎作用。

百解藤含多种生物碱（如左旋筒箭毒次碱、轮环藤宁碱、异谷树碱、异粉防己碱等）、黄酮类、9-β-D-呋喃核糖嘌呤、胡萝卜苷、β-谷甾醇、棕榈酸甘油酯、γ-谷甾醇、油酸、亚油酸、菜油甾醇、14-甲基十五烷酸和豆甾醇等物质［9-11］，究竟是以上哪种或多种化学物质在发挥抗炎作用，还有待深入探究。

本实验曾按急性毒性实验的要求进行试验，根据小鼠可承受的最大灌胃体积20 ml/kg一次性灌胃给予百解藤茎叶水提取物药液（2.0 g/ml），给药后常规饲养，连续观察7 d，但此期间小鼠的行为反应、饮食和体重变化等均无异常，生命健康状况良好，均未出现死亡，因此无法测得百解藤茎叶水提取物对小鼠的半数致死量（LD50）。在无法测得半数致死量（LD50）的情况下，最大给药量的耐受倍数反映了该药的安全性，依据中药毒性和安全试验方法，小鼠能耐受人用剂量100倍以上即认为中药组方安全［12］，百解藤茎叶最大给药量的耐受倍数相当于成人日用剂量的235倍，表明其毒性相当小，安全性高。