子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中微RNA-143和丝裂原活化蛋白激酶7的表达

赵 静

(重庆市九龙坡区中西医结合医院妇产科，重庆 401326)

子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)是妇科常见疾病，其特征为具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆内膜及宫体肌层以外的部位[1]。EMT为良性疾病，但其具有种植广泛、侵袭性强、易复发等类似恶性肿瘤的特点，严重影响患者的生活质量及身心健康[2]。目前，EMT的发病机制尚未完全阐明，给临床治疗造成一定的困难[3]。因此，探讨EMT的发病机制具有重要意义。微RNA(microRNA,miRNA)是一种非编码小RNA，通过调控靶基因表达在肿瘤的发生发展中起重要作用[4]。研究发现，miRNA表达异常导致下游靶基因表达异常与EMT的发病有关[5]。既往研究表明，miR-143在异位子宫内膜、在位子宫内膜组织中表达异常[6]。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路是与肿瘤发生、发展密切相关的细胞内信号转导通路，其中MAPK7在多种肿瘤细胞侵袭、迁移过程中作为miR-143的靶基因参与调控[7-8]。但miR-143和MAPK7是否与EMT的发病有关尚不明确。本研究旨探讨miR-143和MAPK7在EMT患者子宫内膜组织中的表达，以期为EMT发病机制研究提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2018年3月至2019年3月于重庆市九龙坡区中西医结合医院妇产科行开腹或腹腔镜手术治疗的35例EMT患者作为观察组。病例纳入标准：(1)经开腹或腹腔镜手术观察、病理检查确诊为EMT；(2)患者月经周期规律；(3)病历资料完整。排除标准：(1)患有肝、肾、心血管系统疾病；(2)合并子宫腺肌病、多囊卵巢综合征、功能失调性子宫出血、子宫肌瘤、盆腔炎及其他内分泌、代谢性疾病；(3)有其他自身免疫性疾病史、呼吸道高敏反应性病史、原虫病史；(4)6个月内有妊娠和哺乳史；(5)术前3个月内服用过激素类药物。观察组：患者年龄24～60(36.29±8.54)岁，体质量指数20.12～24.48(22.83±2.33)kg·m-2，产次0～2(1.41±0.45)次，流产次数0～3(1.69±0.46)次；月经周期阶段：增生期20例，分泌期15例。另选择同期行输卵管吻合术的非子宫内膜异位的35例输卵管堵塞患者作为对照组，患者年龄25～58(37.36±8.08)岁，体质量指数20.35～24.15(22.32±2.18)kg·m-2，产次0～2(1.25±0.37)次，流产次数0～3(1.75±0.48)次；月经周期阶段：增生期22例，分泌期13例。2组患者的年龄、体质量指数、产次、流产次数及月经周期阶段比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会审核批准，所有患者签署知情同意书。

1.2 实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测子宫内膜组织中miR-143和MAPK7 mRNA的表达收集手术获取、存放于液氮中保存备用的观察组患者在位子宫内膜组织、异位子宫内膜组织(入侵卵巢，病灶最大横截面积为5.52～58.70 cm2)及对照组患者正常子宫内膜组织，采用实时荧光定量PCR法检测子宫内膜组织中miR-143和MAPK7 mRNA的表达。(1)RNA提取：每份标本取50～100 mg放入匀浆器，在液氮中研磨至粉末状，加入TRIzol试剂(北京百奥莱博科技有限公司)l mL，将匀浆转移至Eppendof管中，4 ℃下3 000 r·min-1离心20 min，收集上清液，使用TRIzol试剂盒提取总RNA。使用紫外分光光度计(美国Thermo Fisher Scientific公司)测定RNA样品在260、280 nm波长处的吸光度(absorbance,A)值， 1.8

2 结果

2.1 不同类型子宫内膜组织中miR-143和MAPK7 mRNA相对表达量比较结果见表1。观察组患者在位子宫内膜、异位子宫内膜组织中miR-143、MAPK7 mRNA相对表达量显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；观察组患者异位子宫内膜组织中miR-143、MAPK7 mRNA相对表达量显著高于在位子宫内膜组织，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 2组患者子宫内膜组织中miR-143和MAPK mRNA相对表达量比较

2.2 2组患者不同月经周期阶段子宫内膜组织中miR-143和MAPK7 mRNA相对表达量比较结果见表2。对照组患者分泌期子宫内膜组织中miR-143、MAPK7 mRNA相对表达量显著高于增生期子宫内膜组织，差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者增生期与分泌期在位子宫内膜、异位子宫内膜组织中miR-143、MAPK7 mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

表2 2组患者不同月经周期阶段子宫内膜组织中miR-143和MAPK7 mRNA相对表达量比较

2.3 EMT患者子宫内膜组织中miR-143与MAPK7 mRNA表达的相关性结果见图1和图2。Pearson相关性分析结果显示，EMT患者在位子宫内膜、异位子宫内膜组织中miR-143与MAPK7 mRNA表达均呈正相关(r=0.515、0.572，P<0.05)。

图1 EMT患者在位子宫内膜组织中miR-143与MAPK7 mRNA表达的相关性

图2 EMT患者异位子宫内膜组织中miR-143与MAPK7 mRNA表达的相关性

3 讨论

EMT是育龄期女性常见的疾病之一，发病率为10%～15%，25～45岁女性约占76%，其临床表现主要为慢性盆腔痛、痛经、不孕、月经异常、性交痛、盆腔包块、急腹症等，严重影响患者的身心健康及生殖健康[9-10]。目前，EMT的发病机制尚不明确，多认为其是免疫因素、血管因素、遗传因素、雌激素等共同作用的结果。由于EMT的种植、侵袭、远处转移等生物学特性与恶性肿瘤类似，故推测其发病机制与肿瘤的发生途径存在重合。

miRNA可调节肿瘤细胞增殖、转移、侵袭等各种生物学活动，在肿瘤生物学研究热门分子中占据重要地位[11]。有研究发现，miR-143在乳腺癌中发挥抑癌基因作用[12]。近年来，越来越多的研究表明，miRNA异常表达所导致的表观遗传学紊乱可能在EMT发生发展机制中占据重要地位[13]。郑冰冰等[6]研究发现，miR-143在EMT患者异位子宫内膜、在位子宫内膜组织中差异表达，且在EMT患者子宫内膜组织中的表达高于非EMT患者。而梁宗文等[14]研究显示，miR-143/145可通过促进异位病灶萎缩而达到治疗大鼠EMT的效果。以上研究结果表明，miR-143在EMT发病中的作用尚存在争议，可能因物种不同而存在差异。在众多EMT发生学说中，子宫内膜种植学说是接受度最高的一种，EMT患者的在位内膜可能存在内源性异常，使之易于迁徙、种植，从而导致EMT的发生和发展[15]。在内膜侵袭性种植过程中涉及多条信号通路的相互调控。MAPK是从细胞外向细胞核转导各种细胞信息的重要传递者，是刺激细胞增殖、分化等细胞活动的共同通路[1]。LIAO等[16]研究发现，调控MAPK信号通路可促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖。张燕等[17]研究表明，MAPK信号通路可能涉及子宫内膜的侵袭性种植，抑制MAPK蛋白活性可阻断细胞间信号传导通路，控制子宫内膜异常增殖。DONG等[18]研究表明，miR-143可能通过靶向MAPK7调节骨肉瘤细胞的增殖和迁移。薛亚军等[19]研究显示，注射转染miRNA-143-3p类似物食管癌细胞的裸鼠瘤体积显著升高，MAPK7表达上调，表明miR-143-3p可能通过MAPK7途径而抑制食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

本研究结果显示，观察组患者在位子宫内膜、异位子宫内膜组织中miR-143、MAPK7 mRNA的相对表达量显著高于对照组，观察组患者异位子宫内膜组织中miR-143、MAPK7 mRNA的相对表达量显著高于在位子宫内膜组织，提示miR-143、MAPK7可能参与EMT的发生、发展。进一步研究发现，对照组分泌期患者子宫内膜组织中miR-143、MAPK7 mRNA的相对表达量显著高于增生期，观察组不同月经周期EMT患者在位子宫内膜、异位子宫内膜组织中miR-143、MAPK7 mRNA的相对表达量比较差异无统计学意义，提示EMT发病后，miR-143、MAPK7的表达与月经周期失去联系，这可能是EMT患者月经异常的诱因。本研究还发现，EMT患者子宫内膜组织中miR-143与MAPK7 mRNA表达呈显著正相关，提示MAPK7、miR-143在子宫内膜组织中存在一定相关性，二者可能与子宫内膜侵袭导致子宫内膜异位有关。

综上所述，EMT患者子宫内膜组织中miR-143、MAPK7 mRNA相对表达量显著升高，二者表达呈显著正相关，可能间接调控、共同影响EMT的发生。