LAPTM4B在胰腺癌中的表达与其侵袭、转移及预后的关系

张春凤 乌云高娃 赵丽娟 张慧★

胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤，居我国肿瘤死亡率前10 位［1］。尽管手术、放射、化学等治疗方法可在一定程度上延长胰腺癌患者生存期，但患者预后仍不乐观［2］。既往学者研究报道，胰腺癌患者5年生存率仅在5%左右［3］。目前临床尚无敏感性高的检查指标，因此积极寻找胰腺癌新的标志物对其早期诊断及治疗具有重要的临床价值。溶酶体相关4 次跨膜蛋白B（lysosome-associated transmembrane protein 4B，LAPTM4B）于2000年首次由荧光差异显示技术筛选出［4］。近年来有较多学者发现，LAPTM4B在肝癌、乳腺癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤中表达率较高，证实其为一个与癌症患者预后相关的危险指标，可作为评估患者预后的重要指标［5］。但LAPTM4B在胰腺癌的表达及与胰腺癌细胞侵袭、转移的机制研究较少。本研究旨在探讨LAPTM4B 在胰腺癌组织中的表达水平，并分析LAPTM4B 表达水平对癌细胞侵袭及转移的影响。现研究报告如下。

面对当今军民融合程度深化、科研院所改制势在必行的社会变化，为适应市场化的要求，科院院所需转变管理体制和运行机制，实现从 “行政化”管理向“市场化”管理的转变，提高科研院所整体的创新能力和效率，增强其参与市场竞争的活力和能力。科研院所档案管理作为其重要组成部分，也需顺应时代发展潮流，改变传统的工作模式和管理理念，树立创新意识，更好地为企业发展提供档案服务。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2019年1月本院收治的96例胰腺癌患者，其中男58 例，女38 例；平均年龄（54.23±4.52）岁；肿瘤直径最大为8.3 cm，最小1.7 cm；肿瘤位于胰腺头颈部58 例，位于体尾部38例。共取得96 份胰腺癌组织标本，设为观察组。并选取上述患者远离胰腺肿瘤3 cm 的癌旁正常组织设为对照组。

纳入标准：①均经影像学（MRI 或CT）检查、术后病理检查确诊为胰腺癌［6］；②均在入院后2 周内完成根治性手术治疗；③纳入研究前未接受过放、化疗等辅助治疗；④获得本院伦理委员会批准，且受试者均签署知情同意书。排除标准：①临床资料、影像资料、病理资料有缺失者，随访过程中失访者；②合并恶性肿瘤、阿尔兹海默症者、因精神障碍无法配合治疗者；③病理检查结果为胰腺囊性肿瘤者；④因非胰腺癌死亡者及随访期间失访者；⑤纳入研究前2 个月内服用过影响LAPTM4B 水平的药物者。

1.2 方法

1.2.1 试剂及仪器

纯化兔抗人LAPTM4B-N1-99 多克隆抗体由北京大学医学部基础医学院细胞生物学系周柔丽教授实验室制备、纯化并提供。DAB 显色剂及PV-9000 二步法免疫组化试剂盒采购自北京中杉金桥生物技术有限公司。光学显微镜、显微摄影显微镜均为日本olympus 公司生产。L.3 回旋式切片机由北京手术器械厂提供。

1.2.3 判定标准

1.2.2 LAPTM4B 检测方法

蜡块通过切片机连续切片，组织厚度4 μm，通过免疫组化染色检测LAPTM4B 表达情况。均经甲醛溶液固定，石蜡包埋、载玻片泡酸、高温灭菌PBS 缓冲液洗涤、及多聚赖氨酸涂片等处理，DAB显色。室温下染色时间为3～5 min，自来水冲洗，终止显色。后将经DAB 显色剂显色的LAPTM4B 组织标本使用苏木精复染10 s，乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。最后在显微镜下观察LAPTM4B 表达情况，并拍片。实验步骤按照试剂盒说明书进行。

二是《条例》在防汛抗旱、饮用水安全保障、水资源调度、取水总量控制、水功能区监督管理、水污染防治、水域岸线管理等方面进一步强化了水利、环保等相关部门以及太湖局的职责，并在优化产业布局、保障饮用水供水安全及应急事故预防处置、综合治理政策制定及资金保障、执行防洪和水资源调度指令、开展水污染物总量控制和削减、逐级开展水资源保护和水污染防治目标考核等方面，强化了地方人民政府的综合管理职责。通过制度促进多地区、多部门的合作、协调，实现跨部门跨地区的综合管理，并对水资源保护和水污染防治工作实施综合考核。

以电话随访或门诊复查的随访方式对本研究纳入的96 例胰腺癌患者进行为期1年的随访，随访截止时间2020年1月。将患者治疗后无进展生存期（Progression-Free-Survival，PFS）即患者开始接受治疗，到观察疾病发展或因肿瘤增大、转移死亡时间，总生存时间（Overall Survival，OS）即患者开始治疗到最后一次随访或患者死亡的时间详细记录在病历报告本中，分析不同LAPTM4B 表达的患者生存情况。

观察组 LAPTM4B 阳性表达率为 73（76.04%），显著高于对照组的52（54.17%），差异具有统计学意义（χ2=9.803，P＜0.05）。见图1。

1.3 随访

LAPTM4B 阳性表达的细胞为细胞浆和细胞膜着色，评分由两位病理医师独立打分，评分标准由染色强度和染色细胞百分比综合评定。阳性细胞比例评分［7］：0、1、2、3、4 分；染色强度评分：未染色为0分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。染色指数=阳性细胞比例评分+染色强度评分。染色指数＞3 分为阳性表达；染色指数≤3 分为阴性表达。

1.4 统计学方法

NM 分期为Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴结转移、分化程度为中-低分化的胰腺癌患者LAPTM4B 阳性表达率更高（P＜0.05）。见表1。

体育课程是学校体育的中心环节。通过体育课程的教学，笔者希望达到增强学生体质、增进健康和提高他们体育素养的目的，设计能激发学生兴趣、符合学生身心发展特点和技术技能学习规律的课程，使学生喜欢上体育课，并通过体育课达到体育课程学习目标，对于实现学校体育教育教学目标具有重要意义。

2 结果

2.1 LAPTM4B 在不同组织中的表达情况

目前，我国还没有标准公共危机教育的专用教材，公共危机教育大多流于形式，主要针对在校大中小学生，忽视全民的公共危机的教育引导。危机管理知识在西方发达国家是公务员培训的必修课程，国外一些国家十分注重系统、全面的学校公共危机教育。日本的幼儿园会教孩子地震、火灾发生时该怎么办，进入小学，学生就开始接受正规的急救训练。每个学校设有急救的课程，如果考试不达标，就拿不到毕业文凭。美国的许多学校也常置设一些应急教育课程，教给学生地震、洪水发生等的应急措施。在我国，无论是学校还是各种培训机构，都缺少公共危机事件应对和管理的教育内容。公共危机教育要面向公众，要使全社会都认识到公共危机管理和紧急应对的重要性。

图1 LAPTM4B 在胰腺癌组织中表达（SP，×500）Figure 1 LAPTM4B in pancreatic cancer（SP，×500）

2.2 LAPTM4B 与胰腺癌病理特征的关系

采用SPSS 22.0 软件进行统计分析，计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；Kaplan-Meier 生存分析LAPTM4B 表达对胰腺癌患者预后生存的影响，使用tarone 法进行检验；影响患者预后的相关因素采用非条件单因素和多因素Logistic回归分析；以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

表1 LAPTM4B 与胰腺癌病理特征的关系［n（%）］Table 1 Relationship between LAPTM4B and pathological features of pancreatic cancer［n（%）］

2.3 随访结果

96 例胰腺癌患者1年生存率为20.83%（20/96），LAPTM4B 阳性表达的胰腺癌患者死亡率更高（P＜0.05）。见表2。

TNM 分期为Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴结转移、分化程度为中-低分化、LAPTM4B 表达阳性为影响胰腺癌患者预后生存的独立危险因素（P＜0.05）。见表4。

表2 LAPTM4B 不同表达的胰腺癌患者1年预后情况［n（%）］Table 2 1-year prognosis of pancreatic cancer patients with different LAPTM4B expression［n（%）］

2.4 LAPTM4B 表达与胰腺癌患者预后的关系

LAPTM4B 表达阴性及表达阳性半数生存时间分别为（8.30±0.73）个月、（6.82±0.51）个月。生存分析显示LAPTM4B 表达阳性的患者生存期明显短于LAPTM4B 表达阴性的患者，Keplanmeier 生存曲线比较差异有统计学意义（P＜0.05），见图2。

图2 ROC 曲线Figure 2 ROC curve

2.5 影响胰腺癌患者预后生存的单因素和多因素分析

脱钙抽搐：长期应用醋酸可的松等，可发生钙、铁缺乏，发生抽搐。若与维生素D和钙剂合用，则可预防脱钙和抽搐。

表4 影响胰腺癌患者预后生存的单因素和多因素分析Table 4 univariate and multivariate analysis of prognostic factors in patients with pancreatic cancer

3 讨论

由于胰腺位置隐蔽，在患者表现出临床症状时，肿瘤多已发展至中晚期，手术根治难度大，患者仍面临术后肿瘤复发、转移的风险，且预后情况不理想。癌细胞浸润、侵袭及转移是胰腺癌患者死亡的主要原因［8］。

LAPTM4B是一种新型癌基因，广泛表达于心脏、骨骼肌等组织中［9］。该基因定位于8q22.1 染色体上，有典型的溶酶体定位信号集，因此被命名为溶酶体相关4 次跨膜蛋白B［10］。研究发现，LAPTM4B 过表达后，会抑制细胞凋亡，促进细胞增殖、迁移、侵袭，其与肝癌、肺癌、乳腺癌等疾病发病风险具有显著相关性［11-12］。本研究采用免疫组化染色法，比较胰腺癌组织及癌旁正常组织中的LAPTM4B 水平，发现胰腺癌组织中的LAPTM4B阳性表达率明显高于癌旁组织，这与既往学者报道结果一致［13］。

Roth 等学者［14］通过蛋白印迹实验发现，LAPTM4B 的表达强度与肝癌细胞的病理学分级有关，高分化肝癌组织中LAPTM4B 表达较低，中-低分化肝癌组织中LAPTM4B 表达量较高。Sun Y 等学者［15］报道，乳腺癌细胞的细胞浆及细胞膜上存在LAPTM4B 过表达，且LAPTM4B 表达与乳腺癌患者淋巴结转移、TNM 分期密切相关，因此认为LAPTM4B 参与乳腺癌细胞体外增殖、迁移及侵袭的生物学行为，并具有抗凋亡作用。国外学者经细胞周期分析、细胞增殖相关蛋白表达的检测，发现LAPTM4B 的过表达明显促进了人胆囊癌细胞的体外增殖能力［16］。本研究纳入的96 例胰腺癌患者1年生存率为20.83%（20/96），LAPTM4B 阳性表达的胰腺癌患者死亡率更高，提示LAPTM4B 阳性表达的患者预后更差。在肿瘤侵袭及转移的过程中，LAPTM4B 过表达会刺激肿瘤细胞分泌蛋白酶降解基底膜和基质，部分肿瘤细胞穿越受损的基底膜后侵入淋巴或血液，继而随着淋巴或血液循环，以同样的方式侵出淋巴管或血血管，加速病灶转移［17］。

在寻常百姓的理解中，刑事案件通常是与“人命”挂钩的，也就是我们常说的“命案”。所以法院的法官在面对“命案”时，往往都是慎之又慎，而且对当事双方的调解工作也十分重视。但是俗话说得好：“人命大于天。”“命案”的调解工作却不是那么好做的。

本研究还发现，APTM4B 阳性表达患者生存期要显著短于阴性表达的患者，这与Petti 等学者［18］研究结果相一致。本研究经非条件多因素Logistic 回归模型进一步分析，得出：TNM 分期为Ⅲ～Ⅵ期、有淋巴结转移、分化程度为中-低分化、LAPTM4B 表达阳性为影响胰腺癌患者预后生存的独立危险因素，可见LAPTM4B 表达升高均与与肿瘤发生相关，可作为预测胰腺癌患者预后的指标。

综上所述，胰腺癌组织中LAPTM4B 阳性表达率高，与TNM 分期、淋巴结转移、分化程度密切相关。LAPTM4B 可能参与了胰腺癌细胞侵袭、转移的过程，LAPTM4B 能否作为治疗胰腺癌的新靶点，有待深入研究。